全 文 ：第 34 卷 第 3 期
2 0 1 6 年 3 月
中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE AＲCHIVES OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 34 No． 3
Mar． 2 0 1 6
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DOI:10． 13193 / j． issn． 1673-7717． 2016． 03． 027
ＲP － HPLC法同时测定湿生扁蕾中木犀草素、
当药黄素和当药醇苷的含量
赵慧巧，陈晖，景明，李成义
(甘肃中医药大学，甘肃 兰州 730000)
摘 要:目的:用反相高效液相色谱法同时测定湿生扁蕾中木犀草素、当药黄素和当药醇苷的含量。方法:色
谱柱:Agilent SB － C18(250 mm ×4． 6 mm，5 μm);流动相:在 0 ～ 20 min内，甲醇∶水(含 0． 04% H3PO4)由 40 ∶ 60 ～
63 ∶ 37 线性梯度洗脱，在 20 ～ 50 min内，甲醇∶水(含 0． 04% H3PO4)= 63 ∶ 37 等度洗脱;流速:0． 8 mL /min;检测
波长:254 nm，柱温:30 ℃。结果:木犀草素在 30 min 内达到基线分离，回归方程:Y = 84 800X + 4540(r =
0． 999 9)，线性范围 0． 848 0 ～ 4． 240 μg;当药黄素在 15 min内达到基线分离，回归方程:Y =52 300X － 32 300(r =
0． 999 9)，线性范围 0． 896 0 ～ 4． 480 μg;当药醇苷在 20 min内达到基线分离，回归方程:Y = 102 000X + 83 400(r
= 0． 999 9)，线性范围为 0． 832 0 ～ 4． 160 μg。结论:该测定方法快速，测定结果准确可靠。
关键词:ＲP － HPLC;湿生扁蕾;木犀草素;当药黄素;当药醇苷
中图分类号:Ｒ258． 8 文献标志码:A 文章编号:1673-7717(2016)03-0603-03
Simultaneous Determination of Luteolin，Swertisin and
Swertianolin in Gentianopsis Paludosa by ＲP －HPLC Method
ZHAO Huiqiao，CHEN Hui，JING Ming，LI Chengyi
(Pharmacy School，Gansu College of Traditional Chinese Medicine，Lanzhou 730000，Gansu，China)
Abstract:Objective:To simultaneously determine luteolin，swertisin and swertianolin in Gentianopsis paludosa by re-
verse high performance liquid chromatography． Methods:By Agilent SB － C18(250 mm ×4． 6 mm，5 μm)chromatograph-
ic column，mobile phase:methanol and water (0． 04% H3PO4)，methanol:water (in 0 ～ 20 min 0． 04% H3PO4)，linear
gradient elution by 40 ∶ 60 ～ 63 ∶ 37 within 20 ～ 50 min;methanol:water (0． 04% H3 PO4) = 63 ∶ 37 isocratic elution;
flow rate of 0． 8 mL /min，the detection wavelength of 254 nm，the column temperature 30 ℃ ． Ｒesults:Luteolin baseline
separation was achieved within 30 min． The regression equation:Y = 84 800X + 4 540 (r = 0． 999 9)，the linear range
0. 848 ～ 4． 240 μg． The swertisin baseline separation was achieved within 15 min，the regression equation:Y =52 300X －
32 300 (r = 0． 999 9) ，the linear range 0． 896 ～ 4． 480 μg． The swertianolin baseline separation was achieved within 20
min，the regression equation:Y =102 000X + 83 400 (r = 0． 999 9)and the linear range was 0． 832 ～ 4． 160 μg． Conclu-
sion:The method is rapid，accurate and reliable．
Key words:ＲP － HPLC;Gentianopsis paludosa;swertisin;swertianolin;luteolin
收稿日期:2015 － 11 － 15
基金项目:国家自然科学基金项目(81360522);甘肃省自然科学基
金项目(1310ＲJZA091)
作者简介:赵慧巧(1989 －)，女，河北沧州人，硕士研究生，研究方
向:中药制药工艺研究。
通讯作者:景明(1963 －)，男，教授，研究方向:中藏药资源与开发
利用。E-mail:1339512509@ qq． com。
湿生扁蕾 Gentianopsis paludosa(Munro)Ma． 为龙胆科
扁蕾属植物，产于甘肃、青海、四川、西藏等地，一年生草本，
全草入药，具有清热解毒、利湿消黄、健脾止泻等功效［1］，
主治肝炎、胆囊炎、热病发斑、泄泻、肠胃炎和疮疥肿毒等
症，由湿生扁蕾制成的冲剂对小儿腹泻有显著的疗效［2 － 4］。
湿生扁蕾主要含有口山酮类、黄酮类和三萜类化合物，口山
酮类和黄酮类化合物具有抗氧化、抗菌等作用［5 － 7］。黄酮
苷类化合物当药黄素对鼠伤寒杆菌具有中度抑制作用。口
山酮苷类化合物当药醇苷具有抑制结核菌的作用［8］。黄
酮类化合物木犀草素对番泻叶诱导的小鼠腹泻模型具有较
好止泻作用［9］，对溃疡性结肠炎小鼠具有一定的治疗作
用［10］。
目前未见同时测定湿生扁蕾中 3 种成分的相关文献报
道，为此，笔者采用反相高效液相色谱法同时测定了该药材
中当药黄素、当药醇苷和木犀草素的含量，旨在为客观准确
地评价藏药湿生扁蕾的质量提供依据。
1 仪器与试药
仪器:电子天平(BL150，深圳市朗普电子科技有限公
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司);旋转蒸发仪(B － 490，上海万捷科技有限公司);真空
泵(SHB －ⅢA，上海豫康科教仪器设备有限公司);紫外可
见分光光度计(Lab Tech，莱伯泰科有限公司);高效液相色
谱仪(Waters 600，美国沃特世公司);色谱柱(Agilent SB －
C18，250 mm ×4． 6 mm，5 μm，杭州赛析科技有限公司);超
声清洗器(FＲ系列，杭州法兰特超声波科技有限公司)。
试剂:甲醇(色谱纯，河北四友卓越科技有限公司，批
号:67 － 56 － 1);娃哈哈纯净水(杭州娃哈哈集团有限公
司，批号:20140713);磷酸(优级纯，天津市凯信化学工业有
限公司，批号:7664 － 38 － 2)。
对照品与药材:木犀草素(中国药品生物制品检定所，
批号:111520 － 200504，含量测定用);当药黄素(成都普菲
德生物技术有限公司，批号:140525，经归一化法检测纯度
大于 98%);当药醇苷(成都普菲德生物技术有限公司，批
号:140521，经归一化法检测纯度大于 98%)。湿生扁蕾药
材于 2012 年 8 月上旬采自甘肃省临潭县冶力关镇，经甘肃
农业大学陈垣教授鉴定为 Gentianopsis paludosa(Munro)
Ma．。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 色谱柱:Agilent SB － C18(250 mm × 4． 6
mm，5 μm);流动相:在 0 ～ 20 min 内，甲醇 ∶ 水(含 0． 04%
H3PO4)由 40 ∶ 60 ～ 63 ∶ 37 线性梯度洗脱，在 20 ～ 50 min
内，甲醇∶水(含 0． 04% H3 PO4)= 63 ∶ 37 等度洗脱;流速:
0． 8 mL /min;检测波长:254 nm，柱温:30 ℃。进样量 20
μL;理论塔板数按木犀草素算不得低于 3000。
2． 2 对照品溶液的制备 分别精密称取当药黄素对照品
5． 3 mg、当药醇苷对照品 5． 6 mg、木犀草素对照品 5． 2 mg，
分别置 3 个 25 mL容量瓶中，分别加甲醇超声使溶解，用甲
醇定容至刻度，作为对照品溶液。
分别精密称取当药黄素对照品 5． 1 mg、当药醇苷对照
品 5． 8 mg、木樨草素对照品 5． 4 mg，置同一 25 mL 容量瓶
中，加甲醇超声使溶解，用甲醇定容至刻度，作为混合对照
品溶液。
2． 3 供试品溶液的制备 称取湿生扁蕾药材细粉(过 4 号
筛)约 2． 5 g，精密称定，加入 80%乙醇 25 mL回流提取 1． 5
h，乙醇液滤过，滤液回收乙醇，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解
并定容至 25 mL，低温冷藏保存。
1．当药黄素，2．当药醇苷，3．木犀草素
图 1 混合对照品 HPLC色谱图
2． 4 线性关系的考察 分别精密吸取“2． 2”法配制的 0．
212 mg /mL当药黄素、0． 224 mg /mL 当药醇苷、0． 208 mg /
mL木犀草素对照品溶液 4L、8、12、16、20 μL，依次注入高
效液相色谱仪，按选定的色谱条件进行测定峰面积。以峰
面积积分值为纵坐标 Y，以绝对进样量为横坐标 X，绘制标
准曲线。各对照品的回归方程、相关系数及线性范围见
表 1。
1．当药黄素，2．当药醇苷，3．木犀草素
图 2 湿生扁蕾药材 HPLC色谱图
表 1 线性关系考察结果
对照品 回归方程 相关系数 线性范围(μg)
当药黄素 Y =52 300X － 32 300 0． 999 9 0． 848 3 ～ 4． 244
当药醇苷 Y =102 000X + 83 400 0． 999 9 0． 896 2 ～ 4． 481
木犀草素 Y =848 00X + 4540 0． 999 9 0． 832 4 ～ 4． 163
2． 5 精密度试验 分别精密吸取“2． 2”法配制的当药黄
素、当药醇苷和木犀草素对照品溶液，进样量为 20 μL，分
别重复进样 5 次，测得各成分的峰面积，其 ＲSD 分别为 1．
1%，0． 9%，1. 3%，表明仪器精密性良好。
2． 6 稳定性考察 精密吸取“2． 3”项下的湿生扁蕾供试
品溶液，在 24 h内分别于 0、4、8、12、16 h各进样 20 μL，测
定当药黄素、当药醇苷和木犀草素含量，计算得 ＲSD 分别
为 1． 6 %，1． 3%，1． 9%，表明当药黄素、当药醇苷和木犀草
素的含量在 16 h内基本稳定。
2． 7 重复性考察 取湿生扁蕾药材细粉(过四号筛)，按
照“2． 3”法平行制备供试品溶液各 5 份。分别进样 20 μL，
测定当药黄素、当药醇苷和木犀草素的含量，计算得 ＲSD
分别为 2． 1%，1． 8%，2． 3%，表明此方法重复性良好。
2． 8 回收率测定 精密称取已知含量的湿生扁蕾样品 5
份，每份中分别加入当药黄素、当药醇苷和木犀草素的对照
品 59． 2 μg、27． 8 μg 和 112． 4 μg，制备成为供试品溶液。
分别测定当药黄素、当药醇苷和木犀草素对照品的回收率。
各对照品平均回收率分别为 95． 8%，96． 1%，96． 3%，其
ＲSD分别为 1． 7%，1． 9%，2． 1%，具体见表 2。
表 2 回收率测定结果
化合物
样品量
(g)
样品中含
量(μg)
加入量
(μg)
测得量
(μg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
ＲSD
(%)
当药黄素 1． 266 1 57． 101 1 59． 2 114． 11 96． 3
1． 252 9 56． 780 9 59． 2 113． 43 95． 7
1． 273 8 57． 448 4 59． 2 113． 57 94． 8 95． 7 1． 7
1． 255 4 56． 618 5 59． 2 113． 63 96． 3
1． 246 7 56． 226 2 59． 2 112． 58 95． 2
当药醇苷 1． 266 1 29． 500 1 27． 8 56． 05 95． 5
1． 252 9 29． 192 6 27． 8 56． 05 96． 6
1． 273 8 29． 679 5 27． 8 56． 90 97． 9 96． 3 1． 9
1． 255 4 29． 250 8 27． 8 56． 00 96． 2
1． 246 7 29． 048 1 27． 8 55． 57 95． 4
木犀草素 1． 266 1 106． 732 2 112． 4 213． 62 95． 1
1． 252 9 105． 619 5 112． 4 212． 40 95． 0
1． 273 8 107． 381 4 112． 4 216． 52 97． 1 96． 2 2． 1
1． 255 4 105． 830 2 112． 4 214． 06 96． 2
1． 246 7 105． 096 8 112． 4 214． 46 97． 3
2． 9 样品含量测定结果 精密吸取“2． 3”项下的供试品
溶液 20 μL、“2． 3”项下的混合对照品溶液 20 μL，分别注入
高效液相色谱仪，按给定的色谱条件测定，样品中当药黄
素、当药醇苷和木犀草素的含量分别为 45． 1、23． 3 和 84． 3
μg /g。
3 结论与讨论
利用紫外可见分光光度计，在 220 ～ 440 nm 扫描当药
醇苷、木犀草素和当药黄素紫外吸收光谱，当药黄素、当药
醇苷和木犀草素对照品在 254 nm波长处均有较高的吸收。
因此，本实验检测波长设为 254 nm。
结合相关文献资料并经实验测定，以甲醇和 0． 04%磷
酸水溶液为流动相，在 0 ～ 20 min内甲醇∶ 0． 04%磷酸水由
40 ∶ 60 ～ 63 ∶ 37 线性梯度洗脱，在 20 ～ 50 min 内甲醇 ∶
0. 04%磷酸水 = 63 ∶ 37 等度洗脱，柱温 30 ℃，当药黄素、当
药醇苷和木犀草素 3 种成分在 30 min内均达到基线分离。
综合考虑峰形、保留时间、拖尾因子和总运行时间等因素，
将流速设为 0． 8 mL /min。
本文建立的方法具有提取完全，分析方法简便快速，结
果准确可靠等特点，对全面评价藏药材湿生扁蕾的质量有
重要的参考价值。
参考文献
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Vol． 34 No． 3
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DOI:10． 13193 / j． issn． 1673-7717． 2016． 03． 028
子宫内膜异位症中西医结合治疗对
患者孕育功能疗效因素研究
冯燕1，张婕2
(1．杭州师范大学附属医院妇产科，浙江 杭州 311100;2．枣庄矿业集团腾南医院，山东 枣庄 277300)
摘 要:目的:研究并探讨子宫内膜异位症经手术治疗加减补肾祛瘀汤对患者的妊娠情况的影响因素。方
法:选取医院 2007—2013 年共 150 例子宫内膜异位症且有生育要求的女性患者，统计患者的子宫内膜异位症的
临床期别、子宫内膜异位囊肿直径以及患者年龄等几大因素，通过术后回访及电话随访了解患者妊娠情况，分析
以上几种因素对妊娠率的影响。结果:子宫内膜异位症分期为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期的妊娠率分别为 52． 63%(10 /19)、
47． 82%(11 /23)、31． 88%(22 /69)、05． 12%(2 /39)。内异症病灶直径 ＜ 3 cm 患者术后妊娠率为 55． 00%(18 /
33)，3 ～ 5 cm者为 50． 90%(35 /69)，内异症病灶直径 ＞ 5 cm患者的经治疗后的妊娠率为 37． 50%(18 /48)。年龄
20 － 25 岁者经治疗后的妊娠率为 58． 69%(27 /46)，26 － 30 岁妊娠率为 30． 76%(12 /39)，＞ 30 岁妊娠率为
13. 84%(9 /65)，差异均具有统计学意义(P ＜ 0． 05) ;治疗后患者痛经症状评分和 VAS评分显著下降(P ＜ 0． 05)，
疼痛持续时间显著缩短(P ＜ 0． 05)。结论:患者的治疗年龄越大，期别越晚，病变越重，经手术后加减补肾祛瘀汤
治疗后的患者妊娠率越低，对中医结合治疗子宫内膜异位症具有一定的指导性意义。
关键词:子宫内膜异位症;手术治疗;补肾祛瘀汤;妊娠率
中图分类号:Ｒ711． 11 文献标志码:B 文章编号:1673-7717(2016)03-0000-00
Combination of Chinese and Western Medicine in Treatment of Endometriosis
FENG Yan1，ZHANG Jie2
(1． Department of Gynecology and Obstetrics，Affiliated Hospital of Hangzhou Normal University，Hangzhou 311100，Zhejiang，China;
2． Tengnan Hospital of Zaozhuang Mining Group，Zaozhuang 277300，Shandong，China)
收稿日期:2015 － 10 － 14
基金项目:国家科技部委托项目(2013255)
作者简介:冯燕(1978 －)，浙江杭州人，学士，研究方向:妇科 /产科。