全 文 ：临床肿瘤学杂志 1 9 9 8年 3月第 3卷第 1期
· 研究报告 ·
一叶秋碱对不同细胞增殖的影响及其体内抗肿瘤作用
1 5 20 0 7苏州 苏州医学院基因室 董宁征 杨吉成
苏州医学院药理教研室 刘卫军 顾振纶
摘 要 目的 :研究一叶秋碱体内外抗肿瘤作用 。 方法 :体外应用唾哇兰( M T T) 法测定一叶秋碱对人早幼粒细胞白血病
细胞株 H L6 0 、人红白血病细胞株 K 56 2、 人骨肉瘤细胞株 HO S一 86 0 3、 人脑胶质瘤细胞株 SH G一 4的增殖抑制作用 ;体内采用小
鼠移植性肿瘤模型 ,观察一 叶秋碱对艾氏癌实体型 ( E C )的抑瘤作用 。 结果 :一叶秋碱对四株肿瘤细胞的增殖均有抑制作用 ,药
物作用 2 4 h 的 IC S。分别为 6 . 1 8拌g / m l、 2 6 . 8拌g /m l 、 一2 0 . 9拜g / m l和 6 8 . 4拌g /m l ;一叶秋碱对艾氏癌实体型 (E C )具有明显的抑瘤
作用 , 一叶秋碱单用对 E C 的平均抑瘤率为 25 . 3% 一 62 . 2 % ,与环磷酞胺合用抑瘤作用相加 。结论 :一叶秋碱具有抗肿瘤作用 。
关镶词 一叶秋碱 抗瘤作用 IC 50
一叶秋碱 ( S e e u r in in e , S E C )是从大敢科植物一
叶秋中提取的生物碱 ,具有 “ 活血舒筋 ,健脾益肾” 的
功能 , 临床上主要用于再生障碍性贫血 、 面神经麻痹
等疾病的治疗川 。 最近有报道一叶秋碱具有抗 I 型
单纯疙疹病毒作用 2j[ 。 本文观察了一叶秋碱对人早
幼 粒细 胞白血病细胞 H L 60 、 人 红 白血病细胞 K
5 6 2
、 人 骨肉瘤 细 胞 H O S 一 86 03 、 人 脑胶质瘤 细 胞
S H G
一
4 4 的体外增殖抑制效应 , 以及其对小鼠移植
性肿瘤艾氏癌 ( E C )的抑瘤作用 。
1 材料和方法
.1 1 实验材料
.1 .1 1 药物 一叶秋碱粉剂 ,黄色 ,江苏宜兴制药
厂 提 供 , 无 水 乙 醇 (江 苏省 常 州试 剂 厂 , 批 号
9 6 0 5 0 2 ) 配 成 3 2m g /m l 母液 , 4℃保存 , 临用 时用
R P M I 1 6 4 0 全培养基将其稀释成所需浓度 。 无水乙
醇最大浓度为 0 . 5% 。 硝酸一叶秋碱 (江苏宜兴制药
厂 ,批号 9 5 1 1 7 2 ) ,环磷酞胺 ( C T x ;上海华联制药有
限公司 ,批号 9 6 0 2 0 6 ) 。
1
.
1
.
2 细胞株 H L 60 、 K 5 6 2( 中国科学院上海细
胞生物所提供 ) , S H G 一4 (苏州医学院附二院脑肿瘤
研究室提供 ) , H O S 一 8 603 (苏州医学院基 因室提供 ) ,
用 含 10 %灭 活 新 生 小 牛 血 清 的 R P M T 1 6 4 0
( G IBC O )培养基在 37 ℃ , 5% C 0 2 条件下培养 ,取对
数生长期细胞用于实验 。
1
.
1
.
3 瘤株 艾氏癌实体型 ( E C )引自中国科学院
上海药物研究所 。
1
.
1
.
4 动物 昆明种小鼠 , 雌雄兼用 ,体重为 2 0 . 5
士 1 . 3 3 克 , 同批实验使用的动物性别相 同 (苏州医
学院实验动物中心提供 ) 。
1
.
2 实验方法
1
.
2
.
1 体外实 验 采 用 M T T 法图 , 贴 壁 细 胞
H O S
一
86 03
、
S H G
一
4 4 经 0 . 2%胰酶消化后制备成 单
细胞悬液 , 悬浮细胞 H L 60 、 K 5 62 直接用 R P M l
1 64 0 培养液稀释 ,调整细胞浓度为 5 X I护 /m l ,接种
于 96 孔板中 ,每孔 1 0 0川 ,对照组和药物组均设 6 个
平行孔 。 用 1洲3 3 0 2 A 酶标仪检测吸光度 A 值 (实验
波长 5 7 o n m ) , 按下式计算抑制率 , 抑制率% 一 l( 一
用药组平均 A 值 /阴性组平均 A 值 ) x 1 0 % 。
1
.
2
.
2 体内实验闭 实验用同一性别的小鼠 ,设对
照组 、 SE C 组 、 C T X 组 、 SE C 和 C T X 合用组 。接种后
第二天 起腹腔给药 1 周 , 对照组 N . S ,治疗组 S E C
每天给药 , C T X 、 5一 F U 间断给药 2 次 , 各组给药体
积均为每 1馆 体重 .0 l m l , 于停药 1天后处死动物 ,
取瘤称重 。按下式计算抑瘤率 :抑瘤率% 一 [ (对照组
平均瘤重一给药组平均瘤重 ) /对照组平均瘤重〕x
10 0%两药合 用疗效是 否增 强 , 按 B ur g i 修正 公
式 [ 5〕 : q = E ( A + B ) / [ E A + ( z 一 E A ) x E B 」算出 q
值 ,其中 E ( A + B ) 为两药合用疗效发生率 : E A 和
E B 分别为 A 药和 B 药单用疗效发生率 ; q一 0 . 85 一
1
.
1 5
, 表示两药作用单纯相加 ; q > 1 . 1 5 ,表示两药有
协同作用 ; q < 0 . 8 5 ,表示两药作用拮抗 。
1
.
3 实验数据统计学处理
本文实验数据以均数士标准差 (妥士 : 表示 , 用 t
检验进行统计学处理 。
JO URN AL OF CL IN I A CL ON O CL (兀Y Mr a198 9. N o. l
2 结 果
2
.
1一 叶秋碱对HL 6 0、K 2 6 5、S H G一 4 4、H OS -
86 03细胞增殖的影响
一叶秋碱在体外明显抑制HL 6 0、K 52 6 、S H G -
4 4
、
S H O
一
86 03细胞的增殖 , 并呈剂量依赖性 (表 1 ) ,
药物作用 2 4 h 后 的 I C 5 0 分别为 6 . 2 8拌g /m l ( r =
0
.
9 4 )
、
2 6
.
8拜g /m l ( r = 0 . 9 5 ) 、 1 2 0 . 9拼g /m l ( r = 0 . 9 5 )
和 6 2 · 7拌g /m l ( r = o · 9 3 ) , 其中 H L 6 o 细胞对一叶秋
碱最为敏感 , S H G 一 4 最不敏感 。
2
.
2 一叶秋碱对小鼠移植性肿瘤艾氏癌 E C 的抑
制作用
一叶秋碱 2 . 5 、 5 · o 、 l o m g / k g 3 个剂量对 E C 均
有抑制效应 , 其中 s m g / k g 、 l o m g / k g 组与对照组相
比有显著差异 (尸 < 0 . 0 5 ) , 3 次实验平均抑瘤率分别
为 25 · 3% 、 45 . 4 %和 62 . 2% , 3 次实验结果基本相
符 ,结果见表 2 。
单 用 S E C 5 . om g / k g 平均抑 瘤率为 4 1 . 8 %~
4 7
.
2%
,单用 C T X Z o m g / k g 为 3 6 . 1% ~ 4 1 . 8% ,两
药合用 抑瘤率达到 5 7 . 6%一 6 3 . 8% , q 一 0 . 85 一
1
.
0 2
,说明 S E C 与 C T X 合用抑瘤作用相加 , 结果见
表 3 。
表 l 一叶秋碱对 H L 6 o 、 K 5 6 2 、 S H G 一 4 4 和 H O S 一 8 6 0 3 增殖的影响 (王士 : , n = 6 )
药 物
(拌g /m l )
抑 瘤 率 ( % )
H L 6 0 K 5 6 2 S H G
一
4 4 H O S
一
8 6 0 3
S E C S
1 0
2 0
4 0
8 0
1 6 0
0
.
5% 乙醇
4 1
.
5 5士 3 . 1 1 ’ .
6 0
.
8 7士 2 . 4 0 . 香
7 7
.
7 8士 2 . 9 7 任 母
8 3
.
5 7士 2 . 3 3 . 砰
9 4
.
2 0士 0 . 9 8 . 圣
2 7
.
1 1士 4 . 1 2 香 .
4 3
.
2 3土 8 . 4 9 书 `
6 7
.
7 4士 1 . 9 3 . 签
7 4
.
1 9士 2 . 2 0 ’ `
7 8
.
0 6士 1 . 8 0 ”
4
.
0 5士 1 . 6 5 .
1 1
.
5 4士 5 . 2 2“
1 4
.
1 0士 3 , 8 5 苍 .
2 5
.
0 0士 2 . 9 0 二
3 8
.
4 6士 7 . 8 1 . 苍
6 1
.
5 4 士 8 . 0 5 . 苍
1 5
.
3 2士 3 . 9 5 ` ’
3 4
.
2 3 士 7 . 0 1 . 苍
4 0
.
5 4 士 3 . 8 7 ’ .
5 4
.
0 5士 4 . 1 3 . `
7 9
.
2 8 士 5 . 9 6 份 .
注 : ’ 尸< 0 . 05 , ’ . 尸 < 0 . 01
表 2 一叶秋碱对小 鼠 E C 的抑制作用
S E C
(m g /k g
·
d一 ’ x d )
小鼠数
(初 /末 )
体 重 瘤 重
( g )
抑 瘤 率
( % )
01
1008
ǎXù了了/才产
户
/
08
ē匕Qǎ10 X 7
2
.
5 X 7
5
.
0 X 7
1 0 X 7
+ 5
.
7 5
+ 4
.
2 5
+ 5
.
4 3
+ 4
.
3 4
2
.
0 3士 1 . 1 6
1
.
4 5士 0 . 5 7
1
.
0 7 士 0 . 4 0
0
.
6 9士 0 . 3 4
2 8
.
5
4 7
.
3
.
6 6
.
0
怪 .
+ 1 0
.
2 3
十 7 . 2 0
+ 8
.
3 7
+ 5
.
8 1
1
.
7 7士 0 . 9 8
1
.
1 3士 0 . 7 6
1
.
0 3士 0 . 5 1
0
.
7 4士 0 . 3 4
3 6
.
2
4 1
.
8
5 8
.
2
.
ù城Qǎ匕O口//矛/沙 /只ù00八艺00 X 7
2
.
5 X 7
5
.
0 X 7
1 0 X 7
+ 6
.
0 1
+ 9
.
0 1
+ 5
.
8 3
+ 4
.
4 3
9 9士 0 . 6 2
7 7士 0 . 8 1
1
.
0 5士 0 . 6 5
0
.
2 5士 0 . 6 0
4 7
.
2
. 任
6 2
.
3
. ’
六石只ù八污ǎ朽了/产// //了ù匕ē8ē艺0 X 7
2
.
5 X 7
5
.
0 X 7
1 0 X 7
1 1
.
0
与对照相比 ` 尸 < 0 . 05 , 一尸 < 0 . 01
临床肿瘤学杂志 1 9 98年 3月第 3卷第 1期
表 3一叶秋碱加环磷酞胺对 E C作用
抑 瘤 率 ( %)
SE C
CT X
Z o mg / kg
S E C+ CT X
q值
7 4
.
3 41
.
7 5 4
.
6 1
.
0 1
41
.
8 3 6
.
2 63
.
8 1
.
02
45
.
2 41
.
8 6 1
.
8 0
.
8 5
平均 45. 2 41. 8 6 1. 8 0. 6 9
物 ,包括临床上常用的肿瘤化疗药物在一定的剂量
范 围内都可引起肿瘤细胞凋亡 「7〕 , 因而有人认为能
否诱导肿瘤细胞凋亡是鉴定抗肿瘤药物是否有效的
标志图 。 一叶秋碱的抑瘤作用与细胞凋亡的关系值
得进一步探讨 。
参 考 文 献
3 讨 论
一叶秋碱用于治疗肿瘤国内外文献还未见报道
本文用 M T T 法测得一叶秋碱对人 白血病 H L 60 细
胞 、 K 5 62 细胞 、 人脑胶瘤细胞 SH G 一 4 和人骨肉瘤
细胞 H O S 一 8 6 0 3 具有增殖抑制作用 ,说明一 叶秋碱
具有广谱的抑瘤作用 ,在相 同浓度下 , H L 60 细胞最
为敏感 ,而人胶胶质瘤 S H G 一 4 对一叶秋碱敏感性
较低 。
本文还采用小鼠移植性肿瘤模型 E C 证实一叶
秋碱具有体内抑瘤作用 ,并且与 C T X 合用抑瘤作用
相加 。 本文的实验模型 ,肿瘤生长良好 ,对照组小鼠
无小于 4 0 m g 者 , 平均重量大于 1 9 ,且 3 次实验重
复性好 ,说明实验结果可信困 。
关于一叶秋碱抑瘤机制还需进一步研究 ,大量
研究表明 ,细胞凋亡与肿瘤密切相关 ,多种抗肿瘤药
余传隆 ,黄泰康 , 丁志遵 ,等 ,主编 . 中药词海 . 第 1 版 . 北京 : 中
国医药科技出版社 , 19 9 3 : 3
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〕) 〕 le M , N e n e z G , M e r e h a n t A K , e t a l . 玫 l一 2 i n h ib i t s e h e m o t he r -
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,
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Y u A Y
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C o m ib i n de a n t it u om
r e f fe e t o f ly
-
s i
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Ch i n
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C e ll d e a t h s t u d i e
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性细胞死亡及其克服 , 药学学报 , 1 9 94 , 2 4 ( 12 ) : 8 9 1
皮肤剥脱为首发症状的中心性肺癌 1 例
2 2 3 0 0 2 淮阴 江苏省淮阴市城中人 民医院 张文明
患者男 , 59 岁 , 因面颈部皮肤反复剥脱 3 个月 ,伴发热 ,
咳嗽 l 周 , 于 1 9 9 7 年 8 月 1 8 日入院 。 查 : T 3 8 . 5 ℃ , P l l 8 次
/m i
n ,
R 2 5 次 /m i n , B p l 3· 5 / 9 k p a ;神志清楚 ,精神萎糜 , 慢
性病容 ,消瘦 , 面颈部皮肤剥脱 , 见潮红斑 , 境界不清 ;左中下
肺叩呈浊音 , 呼吸音消失 , 心音低钝 ;肝肋下 c6 m , 质韧 ,脾肋
下 cs m , 腹腔可们及 4 枚黄豆大小淋 巴结 ,腹移动性浊音
( + ) ;双下肢无水肿 。 实验室检查 : A L T 83 . 0 U /L , A S T n
ZU / L
,
A K P 3 8 3 U / L
,
G G T 1 3 6 U / L
,
L D H 2 8 1 6 U / L
。 血沉
35 m m h/
,多肤七次阴性 ,血电解质正常 , P P D 试验阴性 ,痰
中未找到结核菌 。 胸水常规中李乏特试验阳性 、 细胞计数
.0 75 X I护 / L ,多核 .0 8 、单核 0 . 2 。 胸部 x 线片见左下肺有外
高内低致密影 ,左肺门周围片状致密阴影 , 大量胸腔积液 。 腹
部 B 超及 C T 示 :肝占位性病变 ,考虑转移引起 , 腹腔淋巴结
肿大 , 腹水 。 二维超示中等量心包积液 , 胸水病理报告鳞状细
胞癌 。 诊断 : 中心性肺癌伴多脏器转移 , 多浆膜腔积液 。 目前
此病人已属肿瘤晚期 ;一般情况差 , 已失去手术及化疗机会 ,
在我科以支持 、 对症为主 , 辅以免疫治疗 。
讨论 肺癌的肺外首发症状多种多样 , 如以神经系统症
状 、 多发性关节炎 、 自发性气胸等为首发症状肺癌 。肺癌还可
引起黑棘皮病 、 皮肌炎 、 掌拓皮肤过度角化症 、 硬皮病等皮肤
表现 。 本例以皮肤反复剥脱为首发症状的中心性肺癌 , 笔者
尚未见报道 。 此患者皮肤反复剥脱 3个月 , 治疗效果均不理
想 ,当患者出现发热 ,咳嗽后才考虑肺部疾患 , 此时经检查已
为肺癌晚期 , 胸腔 、 肝脏 、腹腔 、 心包均有转移灶 ,失去了早期
治疗的时机 。 故临床医生应有早癌意识 ,对高危人群应常规
进行防癌体检 , 争取早期发现有利治疗 。