全 文 ：苏州医学院学报 1 9 9 8 , 1 8 ( 2 )
一叶秋碱对不同细胞增殖影响及鼠体内抗肿瘤作用
苏州医学院药理学教研室 ( 21 5 0 0 7 ) 董宁征 刘卫军 顾振纶
摘要 应用 M T T 法测定一叶秋碱对人早幼粒细胞白血病 细胞 H L 60 、 人红白血病细胞
K 5 6 2
、 人骨肉瘤细胞 H O S 一 8 603 、 人脑胶质瘤细胞 S H G 一 4 的增殖抑制作用 ;体内采用小鼠移植性
肿瘤模型 ,观察一叶秋碱对艾氏癌实体型 (E O 抑瘤作用 。 结果 :一叶秋碱对 4 株肿瘤细胞的增殖均
有抑制作用 , 药物作用 2 4 h 的 IC : 。分别为 6 . 1 5 、 2 6 . 5 、 6 5 . 4 、 1 2 0 . 9 拜g 厂m l ;对 E e 平均抑 瘤率为
25
.
3 %一 62 . 2 % ,与环磷酞胺合用抑瘤作用相加 。
关键词 一叶秋碱 ;抗瘤作用 ; C T X ; IsC 。
中图法分类 R 9 6 5 . 4 ; 9 7 9 . 2 3
一叶秋碱 ( S e e u r in i n e , S E C )是从大效科
植物一叶秋 中提取的生物碱 , 具有 “ 活血舒
筋 ,健脾益肾 ” 的功用 。 临床上用于再生障碍
性贫血 、 面神经麻痹等疾病的治疗 〔` 〕 ,并具有
抗 I 型单纯疤疹病毒作用川 。 本文观察 s E C
对人早幼粒细胞 白血病细胞 H L 60 、 人红 白
血病细胞 K 5 6 2 、 人骨 肉瘤细胞 H O S 一 8 6 0 3 、
人脑胶质瘤细胞 S H G 一4 的体外增殖抑制效
应 , 以及其对小鼠移植性肿瘤艾氏癌 ( E C )的
抑瘤作用 。
l 材料和方法
.1 1 实验材料
一叶秋碱粉剂 (江苏宜兴制药厂提供 ) 。 无水乙
醇 (江苏省常州试剂厂 ,批号 9 6 0 5 0 2 )配成 3 2 m g /m l
母液 , 4 C保存 , 临用时用 R P M I 1 6 4 0 全培养墓将其
稀释成所需浓度 。 无水乙醉最大浓度为 。 . 5 % 。 硝酸
一叶秋碱 (江苏宜兴制药厂 ,批号 9 5 1 1 7 2 ) 。 环磷酸
胺 ( C T X ,批号 9 6 0 2 0 6 ,上海华联制药有限公司) 。
细胞株 : H L 60 、 K 5 62 由中国科学院上海细胞生
物所提供 , S H G一 4 由苏州医学院附二院脑肿瘤研
究室提供 , H O S 一 86 0 3 由苏州医学院墓因室提供 ,用
含 1 0 %灭活新生小牛血清的 R l , M T 1 6 4 0 ( G IB CO )
培养基在 37 ℃ , 5% CO : 条件下培养 , 取对数生长期
细胞用于实验。
瘤株 : 艾氏癌实体型 ( E C ) ,引 自中国科学院上
海药物研究所 。
动物 :昆明种小鼠 ,雌雄兼用 , 体重 20 · 5士 1· 3
g
,同批实验使用的动物性别相同 , 由苏州 医学院实
验动物中心提供 。
1
.
2 实验方法
1
.
2
.
1 体外实验 :采用 M T T 法川 ,贴壁细胞 H O S -
86 03
、
S HG
一
4 经 。 . 2% 胰酶消化后制备成单细胞悬
液 , 悬浮细胞 H L 60 、 K 56 2 直接用 R P M I 1 6 4 0 培养
液稀释 , 调整细胞浓度为 5 丫 1护 / m l ,接种于 96 孔板
中 ,每孔 2 0 0 尸l ,对照组和药物组均设 6 个平行孔 。
用 1) S 3 o 22A 酶标仪检测吸光度 A 值 (实验波长 57 0
n m )
,按下式计算抑制率 ,抑制率 (% ) = (l 一 用药组
平均 A 值 /阴性组平均 A 值 ) x 10 % 。
1
.
2
.
2 体内实验闭 : 实验用 同一性别的小鼠 , 设对
照组 、 S EC 组 、 C T X 组 、 S E C 和 C T X 合用组 。 接种后
第 2 天起腹腔给药 1 周 ,对照组 N . S , 治疗组 S E C
每天给药 , C T X 、 5一 F U 间断给药 2 天 ,各组给药体积
均为 。 . l m l / 10 9 体重 ,于停药 1 天后处死动物 ,取
瘤称重 。 按下式计算抑瘤率 :抑瘤率 ( % ) 一 [ (对照组
平均瘤重一给药组平均瘤重 ) /对 照组平均瘤重 ] 火
10 。%
。 两药合用疗效是否增强 ,按 B盯 ig 修正 公
式「5 ] : q = E ( A + B ) /仁EA + ( 1一 E A ) 只 E B〕,算出 q
值 ,其中 E (A + B )为两药合用疗效发生率 ; E A 和
EB 分别为 A 药和 B 药单用的疗效发生率 ; q = 0 . 85
一 1 . 1 5 , 表示两药作用单纯相加 ; q > 1. 1 5 , 表示两药
有协同作用 ; q < 。 . 85 ,表示两药作用拮抗 。
1
.
3 结果
1
.
3
.
1 一 叶秋 碱对 H L 6 o 、 k 56 2 、 S H G 一 4 4 、 HO S -
8 6 0 3 细胞增殖的影响 : 一叶秋碱在体外 明显抑制
H L 6 o
、
k 56 2
、
S HG
一
4 4
、
HO S
一
860 3 细胞的增殖 ,并呈
1 16A T CA A CA E DM A E IM E D ICN A E IU Z SH OU 9 9 18
,
1 8 ( 2 )
剂量依赖性 (表 1 ) ,药物作用 24 h 后 IC 。。分别为
6
·
1 8 拌g / m l ( r = 0
·
9 4 )
、
2 6
.
8 产g /m l ( r = 0 . 9 5 ) 、 1 2 0 . 9
尸g m/ l ( r = 0
·
9 5 ) 和 6 2 · 7 “ g / m l ( r = 0 . 9 3 ) , 其中
H L 6。 细胞对一叶秋碱最敏感 , S H G 一 4 最不敏感 。
1
.
3
.
2 一叶秋碱对小鼠移植性 E C 的抑制作用 : 见
表 2 . S EC 与 C T X 合用抑瘤作用相加 ,结果见表 3 。
表 x 一叶秋减对 H L 6 o 、 K s 6 2 、 s H G 一 44 、 HO S一 a 6o 3 细胞增殖的抑制率 ( % ,又士 s )
药物 抑制率 (% )
(拌g /m l ) H L 6 0 K 5 6 2 S H G 一 4 4 H O S 一 8 6 0 3
S E C 5 4 1
.
5 5士 3 . 1 1 一 一 一
10 6 0
.
8 7士 2 . 4 0 27 . 11士 4 . 12 11 . 54士 5 . 22 15 . 32士 3 . 9 5
20 7 7
.
78士 2 . 97 43 . 23士 8 . 49 14 . 10士 3 . 8 5 3 4 . 23士 7 . 0 1
4 0 8 3
.
57士 2 . 3 3 67 . 74士 1 . 9 3 2 5 . 0 0士 2 . 9 0 4 0 . 54士 3 . 87
80 9 4
.
20士 0 . 9 8 74 . 19士 2 . 20 38 . 4 6士 7 . 8 1 54 . 0 5士 4 . 1 3
1 6 0 一 7 8 . 0 6士 1 . 80 61 . 54士 8 . 0 5 7 9 . 28士 5 . 9 6
0
.
5 %乙醉 一 4 . 0 5士 1 . 65 一 一
表 2 一叶秋碱对小鼠移植性 E C 的抑制作用
一叶秋碱
(m g /k g
·
d 义 d )
鼠数
(始 /末 )
10 / 1 0
8 / 8
8 / 8
8 / 8
体重变化
( g )
+ 5
.
7 5
+ 4
.
2 5
+ 5
.
4 3
+ 4
.
3 4
瘤重
( g X士 S )
抑制率
( % )
:
户J几八UOUtl心,曰连心`U
2
.
0 3士 1 . 16
1
.
4 5士 0 . 5 7
1
.
0 7士 0 . 4 0
0
.
6 9士 0 . 3 4
Cén甘
。
O
八`以亡,工
QUn己ó减ù只z//了.了,了QU一匕口éOLJ0
2
.
5
5
.
0
1 0
+ 10
.
23
+ 7
.
20
+ 8
.
37
十 5 . 8 1
1
.
7 7士 0 . 9 8
1
.
1 3士 0 . 7 6
1
.
0 3士 0 . 5 1
0
.
7 4士 0 . 3 4
3 6
.
2
4 1
.
8
5 8
.
2
口巴
0哎U月b
ù.几,立.占月O
2
.
5
5
.
0
1 0
+ 6
.
0 1
+ 9
.
0 1
十 5. 83
+ 4
.
4 3
.
9 9士 0 . 6 2
.
7 7士 0 . 8 1
.
0 5士 .0
0
.
7 5士 0 .
1 1
.
0
4 7
.
2
’ .
6 2
.
3
. `
UO内6匕产了z矛2 2.z八己OU内践ùn6
与对照组相比 , , P < 0 . 0 5 , ` ,
表 3
P < 0
.
0 1
S E c
、
C T X 单用与合用对 E C 的作用
S E C 5 m g /k g
IR ( % )
C T X 2 0 m g / kg
IR ( % )
S E C + C T X
IR ( % )
q 值
,01乙一匕自Où八UQ.
.…,1` .10一U4 7 . 34 1 . 84 5 . 2
平均 4 .5 2
4 1
.
4
3 6
.
2
4 1
.
8
4 1
.
8
57
.
6
6 3
.
8
6 1
.
8
6 1
.
8
(下转第 一xs 页 )
A C T人 A C A D EM I A M DI C E E水A S U E Z HOU 1 98 ; 18 ( 2 )
膜 , 仅少数达到并分支人脊髓 , 或与脊健前动
脉吻合 ,其支亦很细小 , 该处的脊髓仍以脊髓
前 、 后动脉供 血为主 。 文献报道 临床造 影及
化疗时极 少 引起脊 髓横 断损 伤亦证 明这一
点川 。 但需 指 出的是 , 临床栓塞 治疗 时情况
会有所不同 ,栓塞治疗时 , 如支气管动脉与根
动脉吻合 , 该根动脉 又有细支与脊髓 前动脉
或后动脉 有 吻合 , 栓 塞材料会随血流到脊髓
几 段或 L: 段 易受损 区 , 造成脊 髓横断性损
伤 。 有报道支气管动脉栓塞引起脊髓损伤的
发生率较单纯造影高一倍 。 提示在支气管动
脉造影时如 有脊髓前 动脉显影 , 或有多条 根
动脉显影者 , 则不宜再行栓塞治疗 。
参 考 文 献
中国解剖学会 体质调 查组 . 支气管动 脉的数 目与
起点 . 上海 :上海科技 出版社 , 1986
刘 航 ,综述 . 支气管动脉造影 . 国外 医学 : 临床放
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th
e s p in目 e o lrt . N e w Y o r k : S p ir n g e r 一 V e lr a y , 197
( 一9 9 7 年 5 月 2 日收稿 )
(上接第 1 16 页 )
2 讨论
S E C 用于治疗肿瘤尚未见报道 。 本文用
M T T 法测得 S E C 对人 白血病 H L 60 细胞 、
K 5 6 2 细胞 、 人脑胶质瘤细胞 S H G 一 4 和人骨
肉瘤细胞 H O S 一8 6 0 3 具有增殖抑制作用 ,说
明一叶秋碱具有广谱的抑瘤作用 ,在相同浓
度 下 , H L 6 0 细胞最 为敏感 , 而人脑 胶质瘤
S H G
一
4 4 对 S E C 敏感性较低 。
采 用 小 鼠移植 性肿瘤 模 型 E C 证 实 ,
S E C 具有体内抑 瘤作用 , 与 C T X 合用抑瘤
作用相加 。 本文的实验模型 ,肿瘤生长良好 ,
对 照组小 鼠无小于 4 0 m g 者 ,平均重量大
于 1 9 , 且 3 次实验重复性好 ,说明实验结果
可信[ 6〕 。
细胞凋亡与肿瘤密切相关 ,多种抗肿瘤
药物 , 包括 临床上常用的肿瘤化疗药物在一
定的剂量范围内都可引起肿瘤细胞凋亡川 ,
因而有人认为能否诱导肿瘤细胞凋亡是鉴定
抗肿瘤药物是否有效的标志匡 , S E c 的抑瘤
作用与细胞凋亡的关系值得进一步探讨 .
参 考 文 献
1 余传隆 ,等主编 . 中药词海 . 北京 : 中国医药科
技出版社 , 1 9 9 3 : 3~ 5
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·
A b s t r a e ts o f o r ig in a l A r t ie le s
·
T h e C l in ie a l A P P l ic a t io n o f S e r u m E C P M e a s u r e m e n t i n A P P a t i e n ts
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o n t e s r is w il l b e fu rt h e r s t u d ie d
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Go n a d a l d a m a g e n 一ig h t b e e a u s e d b y i m p i r e d r e n a l fu n e t i o n
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I n o u r e x p e r im e n t r e n a l fu n
-
t io n w a s n o r m a l i n l ig h t o f n , e a s u s e m e n t o f n o r m a l B u n a n d C r le v e ls
.
I n s u m r n a r y
,
C P P u l e s e a d m i n i s r r a t i o n h a s l e s s t o x i e i
-
t y t o l e yd ig e e ll s t h a n 一0 d a ily C P .
K e y W
o r d s C y e lo Ph o s Ph a m i d ; 肠 y d ig C e lls ; g o n a d a l h o r n l o n e s
( P
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1 17 )
T h e E f e e t o f S E C o n t h e G r o 卿 t h o f V a r io u s C e l ls a n d I tS A n t i 一 T u m o u r E件e e t in V i v o
D o n g N i n邵h e n g r e t a l . ( D e p a rt m e n t o f p h a r m a e o lo g y , s u z h o u M e d i e习 C o ll e g e , 2 15 0 0 7 )
T o s t u d a y rh e a n li 一 t u m o r e fe
e t o f s e e u r i n i n e ( SE C ) i
n v i v o a n d i n v i t r o
. 入i E丁H o D : I n o r d e r t o in v e s t ig a t e 一h e
a n t i 一 t u m 盯 e fe e t i n v i v o 幸 S E C w a s a d m i n i s t r a t e d s i n g l e ly o r i n e o m b i n a [ i o n w i t h C T X t o t r e a t t r a n s p l a t e d t u m o r E C . T h e
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、 ℃ r a g e w e ig h t s o f n l i e e 认 e r e o b s e vr e d . U s i n g 入I T T a s s a y : t h e i n h i b i t o卿 e fe e t o f S E C o n h u -
n 、 a n l e u k e n 、 ia e e 几 l in e HL 6 0 a n a K 5 6 2 , h 、 : n 、 a n b r a i n g lio m a e e ll l in e S H G 一 4 4 a n d h u m a n o s t e o s a r e o m a e e ll l in e H o S -
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