全 文 ：第 31 卷 第 4 期
2 0 1 3 年 4 月
中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 31 No． 4
Apr． 2 0 1 3
中
华
中
医
药
919
学
刊
川续断拮抗昆明山海棠对大鼠生殖损伤作用的研究
陈辉1，陈纪藩2，陈光星2，林昌松2，卢卫国2，刘清平2
(1．广东医学院附属南山医院，广东 深圳 518052;2．广州中医药大学第一附属医院，广东 广州 510405)
摘 要:目的:观察川续断对昆明山海棠致大鼠睾丸毒性损伤作用的影响。方法: 54 只成熟雄性 SD大鼠，随
机分成 3 组，每组 18 只:空白对照组喂服生理盐水 10 mL·kg －1·d －1，中药组喂服川续断水煎剂 2． 5 g·kg －1·
d －1加昆明山海棠水煎剂 7． 5 g·kg －1·d －1，模型组喂服昆明山海棠水煎剂 7． 5 g·kg －1·d －1。连续 60 d后，随
机处死半数大鼠，取材。余下大鼠恢复饲养 72 d后，处死取材。检测睾丸系数、睾丸体积、精子密度、形态、活力
等。光镜观察睾丸组织的病理变化。结果:给药 60 d，与模型组比较，中药组睾丸系数、精子密度均有显著提高
( P ＜ 0． 01) 。停药 72 d后，中药组精子活动力恢复，运动活跃，光镜下睾丸组织几乎无病理损伤;模型组精子形态
异常、活力丧失，光镜下睾丸组织损伤，未见恢复迹象。结论:一定条件下，川续断能够拮抗昆明山海棠对雄性大
鼠的生殖损伤作用。
关键词:川续断;昆明山海棠;睾丸毒性;大鼠
中图分类号:R285． 5 文献标志码:A 文章编号:1673 － 7717( 2013) 04 － 0919 － 03
Resistant Effect of Water Decoction of Himalayan Teasel Root on
Male Infertility Induced by THH in Rats
CHEN Hui1，CHEN Jifan2，HUANG Shengguang1，CHEN Guangxing2，LIN Changsong2，LU Weiguo2，LIU Qingping2
(1． Nanshan Affiliated Hospital of Guangdong Medical College，Shenzhen 518052，Guangdong，China;
2． First Hospital Affiliated to Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510405，Guangdong，China)
Abstract:Objective:To observe the effects of Himalayan Teasel Root(HTR)on infertility induced by Tripterygium
Hypoglaucum Hutch(THH)in rats． Methods:54 SD male rats were randomly divided into 3 groups，18 in each group．
The control group were given normal saline at a dose of 10 mL·kg －1·d －1 ． The treatment group were given THH at a
dose of 2． 5 g·kg －1·d －1 and Himalayan Teasel Root(HTR)at a dose of 7． 5 g·kg －1·d －1，and the model group were
given THH at a dose of 7． 5 g·kg －1·d －1 ． After 60 days，half rats of each group were sacrificed randomly． The rest rats
were continually raised until 72 days later，then sacrificed． The relative testis weight，testicle volume，sperm density and
the total activity were comparatively analyzed． The pathological changes in testicular tissue were observed by optical mi-
croscope． Results:Compared with the model group，it was significantly higher of relative testis weight and sperm density in
the treatment group after a 60 － day treatment(P ＜ 0． 01)． 72 days later，in treatment group sperm motility recovered and
there was no testicular lesion in rats． In model group the motility of sperm from caudal epididymides dropped to zero，and
diastrophic sperms were seen． The testicular lesion in rats caused by THH was serious． It was not found that epididymal
lesion recovered after 72 days． Conclusion:It indicated that in male rats，HTR could relieve the reproductive lesions in-
duced by THH．
Key words:HTR;THH;testicular toxicity;rat
收稿日期:2012 － 11 － 26
作者简介:陈辉(1979 －) ，女，江西上饶人，副主任医师，博士，研究
方向:中医药治疗类风湿关节炎的临床及实验研究。
通讯作者:陈纪藩(1941 －) ，男，江西玉山人，教授，博士研究生导
师，研究方向:中医药治疗类风湿关节炎的临床及实验
研究。E-mail:jifanchen2010@ 126． com。
昆明山海棠(Tripterygium Hypoglaucum Hutch，THH)为
卫矛科雷公藤属植物，具有抗炎、调节免疫等作用，治疗类
风湿关节炎、强直性脊柱炎等自身免疫性疾病疗效肯
定［1 － 2］，但生殖不良反应限制了其临床应用。笔者根据中
医学之中药配伍理论，以川续断(Himalayan Teasel Root，
HTR)与之进行配伍使用，观察川续断对昆明山海棠致大鼠
睾丸毒性损伤作用的影响。
1 材料与方法
1． 1 实验动物 SPF 级纯种 SD 性成熟雄性大鼠 54 只，
体质量 180 ～ 220 g，由南方医科大学实验动物中心提供［实
验动物合格证号:SCXK(粤)2006 － 0015］。饲养环境:广州
中医药大学实验动物中心 SPF级动物房，温度(22 ± 2)℃、
相对湿度 30% ～70%、12 h明和暗。
919
DOI：10.13193/j.archtcm.2013.04.217.chenh.070
第 31 卷 第 4 期
2 0 1 3 年 4 月
中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 31 No． 4
Apr． 2 0 1 3
中
华
中
医
药
920
学
刊
1． 2 药品与主要试剂 通痹合剂由南方医科大学附属珠
江医院中药制剂科煎制，组方中昆明山海棠(产地广西)和
续断(产地湖北)购自广州致信中药饮片有限公司;Hanks
缓冲液(1 ×) (吉诺生物医药技术有限公司)。
1． 3 主要设备条件 Win95 /98 型精子自动分析系统(北
京中科恒业科技有限公司) ;ZD － 44 型标准恒温水浴箱
(杭州蓝天化验仪器厂) ;Olympus BX － 50 显微镜(Olym-
pus，日本)。
1． 4 动物分组与给药 常规饲养 3 d后，将大鼠随机分成
3组，每组 18 只:对照组喂服生理盐水 10 mL·kg －1·d －1，
中药组喂服川续断水煎剂 2． 5 g·kg －1·d －1加昆明山海棠
水煎剂 7． 5 g·kg －1·d －1，模型组喂服昆明山海棠水煎剂
7． 5 g·kg －1·d －1。5 d称量体重 1 次，调整给药剂量。连
续 60 d后，每组各随机处死半数大鼠，取材。余下大鼠停
灌胃，恢复饲养 72 d后，处死取材。
1． 5 睾丸系数与体积检测 根据脏器系数(%)=脏器重
(g)÷体重(g)× 100%，计算睾丸系数;游标卡尺测睾丸
长、宽、厚径(a、b、c) ，根据公式 V = abc × 0． 521，计算睾丸
体积。
1． 6 附睾精子参数检测 由广州中医药大学附属一院男
科实验室协助完成。参照 klinefelter法［3］，采用扩散法收集
附睾精子。直径 35 mm培养皿中加入 3 mL Hanks缓冲液，
置于水浴箱中预温至 37 ℃。取右侧附睾，立即于预热的培
养皿中用眼科剪在附睾尾近输精管端剪十字口，切口完全
浸于缓冲液中，随即有小量精液溢出，置 37 ℃水浴箱中，使
精子充分扩散 30 min。调整精子浓度为(6． 0 ± 1． 0)× 105 /
mL，吸取 5 μL精子悬液至预温 37 ℃的 Macro 精子计数池
(池深 10 μm) ，将计数板置于 37 ℃显微镜载物台上，恒温
条件下计算机辅助精子自动分析系统观察、测定精子浓度、
形态特征和运动状态，如出现精子识别异常则在 CASA 系
统下进行人工校正。
1． 7 睾丸形态学观察 由广州中医药大学附属一院病理
科协助完成。取大鼠部分右睾丸组织经 10%中性缓冲福
尔马林固定，常规包埋，石蜡切片厚 3 μm，苏木精 －伊红染
色。
1． 8 统计学分析 采用 SPSS 11． 5 软件进行统计处理。
数据采用 珋x ± s表示，组间比较采用单因素方差分析(ANO-
VA) ，P ＜ 0． 05 被认为有统计学差异，所有实验及统计数据
仅取小数点后两位有效数字。
2 结 果
2． 1 一般观察 整个实验过程中，给药组大鼠的饮食、活
动、步态、行为及对外界的反应等一般状态均正常。
2． 2 大鼠睾丸系数及体积的比较 表 1 示，给药 60 d 和
停药 72 d，与对照组比较，中药药组睾丸系数、睾丸体积均
无统计学差异(P ＞ 0． 05) ;与模型组比较，中药组睾丸系
数、睾丸体积明显提升，有显著性差异(P ＜ 0． 01)。
2． 3 附睾精子形态、活力及浓度的比较 CASA 仪检测视
野下，正常精子形态表现为:精子头部小而略带钩状，精子
体部弯曲，移行运动活跃。给药 60 d 后，中药组和模型组
精子体部变直，静止不动，活动力下降为零;而停药 72 d
后，中药组精子形态恢复如正常，头部小而呈钩状，体部弯
曲，移行运动活跃;模型组未见恢复。
表 2 示，给药 60 d和停药 72 d，与对照组比较，中药组
精子浓度无统计学差异(P ＞ 0． 05) ;与模型组比较，中药组
精子浓度显著提升(P ＜ 0． 01)。
2． 4 睾丸组织形态学观察 给药 60 d 和停药 72 d，光镜
下，中药组睾丸组织未见病理损伤。见插页Ⅺ图 1 示，生精
小管边界整齐，管径大小形态正常，管腔内可见精原细胞、
精母细胞、精子细胞、精子和支持细胞，生精小管界膜薄而
整齐，间质无异常。给药 60 d，模型组睾丸组织几乎未见病
理损伤，但停药 72 d后，睾丸组织病理变化有所加重，生精
小管变形萎缩，管径变细，界膜轻度增厚，形态尚完整;生精
细胞大量脱落，生精上皮由支持细胞及少量的精原细胞组
成，支持细胞和精原细胞均有程度不等的退变。退变的支
持细胞排列无序甚至脱落。
表 1 各组左睾系数和体积比较(珋x ± s)
组别 n
给药 60 d
左睾系数(%) 左睾体积(cm3)
停药 72 d
左睾系数(%) 左睾体积(cm3)
对照组 9 0． 43 ± 0． 05 1． 63 ± 0． 23 0． 44 ± 0． 06 1． 63 ± 0． 13
模型组 9 0． 35 ± 0． 04Δ 1． 22 ± 0． 46Δ 0． 29 ± 0． 01Δ 0． 81 ± 0． 17Δ
中药组 9 0． 46 ± 0． 06* 1． 71 ± 0． 14* 0． 42 ± 0． 05* 1． 33 ± 0． 38*
注:与模型组比较，* P ＜ 0． 01;与对照组比较，ΔP ＜ 0． 01。
表 2 各组精子浓度的比较(珋x ± s)
组别 n
精子浓度(million /mL)
给药 60 d 停药 72 d
对照组 9 4． 19 ± 1． 16 4． 91 ± 0． 85
模型组 9 2． 95 ± 1． 40Δ 2． 14 ± 1． 00Δ
中药组 9 4． 09 ± 1． 18* 4． 41 ± 2． 42*
注:与模型组比较，* P ＜ 0． 01;与对照组比较，ΔP ＜ 0． 01。
3 讨 论
中药配伍是中医用药的基本形式，其中相畏相杀就是
为了降低药物不良反应而设，是指药物的毒性反应或不良
反应在配伍之后会减轻或消除。两种药物同时给予时，二
者之间发生相互作用，其中一种药物能干扰、抵消另一种药
物的毒作用，对此，毒理学则称之为拮抗作用。
本研究中，在喂服 THH 的量相同的情况下，给药 60 d
后，配伍了川续断的中药组睾丸未发生毒性损害，抗生育作
用停药 72 d 后完全可逆。未配川续断的模型组睾丸发生
毒性反应，睾重减轻、睾丸体积缩小，附睾精子浓度下降，差
异显著(P ＜ 0． 01)。此外，模型组在停药 72 d 后，与给药
60 d的时间点比较，睾重减轻，体积缩小，部分生精小管的
损害不仅无恢复迹象，反有进一步扩大的趋势，提示 THH
的抗生育作用还在持续。上述结果表明，川续断能够拮抗
THH对精子发生与成熟过程的毒性作用，减轻 THH 的生
殖毒性。
THH对睾丸组织的毒性损害，以及对精子发生、成熟
过程的抑制作用，主要因为该药能损伤肝肾之气。中医认
为睾丸属肾，和附睾等共同组成精室，具有化生和贮藏精子
的功能。“肾为先天之本，元气之根”、“肾主生殖”，精室的
功能与肾之精气盛衰密切相关。肾气虚损则影响精子发育
与成熟。“肝肾同源”，“肾子之系(精索)属肝”，若肝气虚
损，肝阴不足，也会引起肾之气血不旺，生育无能。根据相
畏相杀的配伍理论，川续断具有补益肝肾的功效，与THH
029
收稿日期:2012 － 11 － 22
作者简介:王博(1983 －) ，男，陕西咸阳人，硕士研究生，研究方
向:血液系统疾病的实验和临床研究。
通讯作者:林圣云(1963 －) ，女，浙江杭州人，主任医师，硕士研究
生导师，研究方向:血液系统疾病的实验和临床研究。
配伍，能够减缓、抵消 THH对肝肾之气的影响，从而达到减
轻 THH生殖毒性的作用。
从现代药理角度来看，川续断为一种天然的“补
肾”药物，含有许多机体生长所必需的营养元素，其中
包括丰富的 Zn(锌)、Mn(锰)及维生素 E 等［4 － 5］。而
目前已知，营养元素，特别是 Zn、Mn 和维生素 E 的缺
乏可导致大鼠精子生成障碍。食物中 Zn 缺乏或毒物
诱导的 Zn 耗竭可引起睾丸损伤，表现为生精小管发育
不全，而补充 Zn 则能降低毒物诱导的睾丸损伤［6 － 7］。
Mn 参与人体的氧化磷酸化过程，动物缺 Mn 可出现生
长缓慢、生殖功能抑制，而川续断中 Mn 含量丰富，能
够为睾丸精子发生与成熟过程提供能源物质。维生素
E 缺乏或含量水平降低，会妨碍精子生成过程和降低
精子活力［8］，川续断水提液则有抗维生素 E 缺乏症的
作用［9］。由此可以推论，川续断之所以能拮抗 THH 的
抗生育作用，与其含有天然而丰富的 Zn、Mn、维生素 E
等多种营养元素有一定关系。
参考文献
［1］ 张莹，方勇飞，王勇，等．昆明山海棠药理作用及临床应用研
究进展［J］．人民军医，2008，51(7) :463 － 464．
［2］ 王钺，隆长锋． 中药昆明山海棠的研究进展［J］． 医学综述，
2006，12(6) :691 － 692．
［3］ Kinefelter GR，Gray LE Jr，Suarez JD． The method of sperm col-
lection significantly influences sperm motion parameter following
ethare dimethane sulphomate administration in the rat［J］． Re-
prod Toxicol，1991，5(1) :39 － 41．
［4］ 赵春桂． 6 种安胎中草药微量元素的光谱测定［J］．中国中药
杂志，1990，15(5) :43．
［5］ 吴德康，刘志一，王鹰．中药续断中维生素 E的含量测定［J］．
福建药学杂志，1990，2(4) :19 － 20．
［6］ Prasad AS，Obeleas D，Wolf P，et al． Studies on zinc deficiency:
Changes in trace element and enzyme activities in tissues of zinc
－ deficient rats［J］． J Clin Invest，1967，46:549 － 557．
［7］ Thomas JA，Curto KA，Thomas MJ． MEHP /DEHP gonadal toxici-
ty and effects on rodent accessory sec organs［J］． Environ Health
Perspect，1982，45:85 － 92．
［8］ Somkuti SG，Lapadula DM，Chapin RE，et al． Reproductice tract
lesions resulting fron subchronic administration (63 days)of tri －
o － cresyl phosphate in male rats［J］． Toxicol Appl Pharmacol，
1987，89:49 － 63．
［9］ 雷志群．续断等中药抗衰老作用的实验研究［J］．浙江中医学
院学报，1997，21(2) :39．
第 31 卷 第 4 期
2 0 1 3 年 4 月
中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 31 No． 4
Apr． 2 0 1 3
中
华
中
医
药
921
学
刊
白花蛇舌草熊果酸诱导白血病耐药 K562 /ADM
细胞凋亡及其作用机理的研究
王博，武利强，叶宝东，石娜娜，林圣云
(浙江中医药大学第一临床医学院，浙江 杭州 310053)
摘 要:目的:观察白花蛇舌草熊果酸( UAHD) 对 K562 /ADM 细胞株的生长抑制作用及诱导凋亡情况。方
法: MTT法观察 UAHD 对 K562 /ADM 细胞增殖抑制作用;光学显微镜观察药物作用后白血病细胞的形态学变
化，琼脂糖凝胶电泳测定 DNA梯状带，流式细胞仪测定药物对细胞的凋亡作用，检测 GSH、GST、GSH － PX、MDA
探讨凋亡相关机制。结果: UAHD作用于 K562 /ADM细胞 24 h抑制率为: 7． 2%、10． 6%、16． 0%、75． 6% ; 48 h抑
制率为: 33%、39%、51． 1%、61． 6%，72 h 抑制率为: 34． 1%、52． 2%、72． 7%、64． 9%。UAHD 作用 K562 /ADM 细
胞 48 h细胞凋亡率分别为: 3． 18%、8． 78%、17． 83%、23． 52%。结论: UAHD能够诱导 K562 /ADM细胞凋亡，凋亡
的机制与细胞内氧化应激反应有关。
关键词:白花蛇舌草;熊果酸;白血病;耐药;凋亡;氧化;线粒体
中图分类号:R285． 5 文献标志码:A 文章编号:1673 － 7717( 2013) 04 － 0921 － 04
Experimental Study on Apoptosis of Drug －Resistant Leukemia K562 /ADM
Cells Induced by Ursolic Acid Extract from Hedyotic Diffusa and Its Mechanisms
WANG Bo，WU Liqiang，YE Baodong，SHI Nana，LIN Shengyun
(1． Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou 310053，Zhejiang，China;
2． The First Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou 310053，Zhejiang，China)
129