全 文 ：山 东 农 业 科 学 2015，47(9):124 ～ 126，144 Shandong Agricultural Sciences
DOI:10． 14083 / j． issn． 1001 － 4942． 2015． 09． 029
收稿日期:2015 －06 －08
基金项目:国家“十二五”科技支撑计划课题(2011BAI06B01) ;山东省自然科学基金 －青年基金课题(ZＲ2011HQ057) ;山东省自主
创新专项(2013CXB14001)
作者简介:于晓(1979 －) ，女，山东威海人，主管药师，硕士，从事中药质量控制与中药资源研究。
* 通讯作者:张永清(1962 －) ，男，山东平邑人，教授，博士生导师，从事中药资源及其质量控制研究。E － mail:zyq622003@ 126．
com
ＲP － HPLC法同时测定忍冬藤中绿原酸、
马钱苷、当药苷含量的研究
于晓1，2，李松涛2，刘建升2，张永清3* ，李华斌2
(1．山东大学药学院，山东 济南 250355;2．山东医药技师学院，山东 泰安 271016;
3．山东中医药大学药学院，山东 济南 250355)
摘 要:采用 ＲP － HPLC 法建立了忍冬藤中绿原酸、马钱苷、当药苷三种成分的含量测定方法。色谱条
件为:Aglient TC － C18(4． 6 mm × 250 mm，5 μm)色谱柱;流动相:A为乙腈，B为 0． 4%磷酸溶液，进行梯度洗
脱，流速为 1． 0 mL /min;检测波长为 240 nm，柱温 25℃。在该色谱条件下，所测定三种成分均达到基线分离，
且各成分在线性范围内线性关系良好，精密度、重现性、稳定性均良好，回收率变化范围为 98． 65% ～
99． 07%。该方法准确、简便、可行，可以用于忍冬藤的质量控制。
关键词:忍冬藤;绿原酸;马钱苷;当药苷;含量测定
中图分类号:S567． 1 + 9 文献标识号:A 文章编号:1001 －4942(2015)09 －0124 －04
Study on Simultaneous Determination of Chlorogenic Acid，Loganin
and Chiratin in Lonicera japonica Caulis by ＲP － HPLC
Yu Xiao1，2，Li Songtao2，Liu Jiansheng2，Zhang Yongqing3* ，Li Huabin2
(1． College of Pharmacy，Shandong University，Jinan 250355，China;2 Shandong Medicine Technician College，
Taian 271016，China;3． College of Pharmacology，of Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China)
Abstract A new method for simultaneously determining the contents of chlorogenic acid，loganin and
chiratin in Lonicerae japonicae caulis was set up by ＲP － HPLC． The chromatographic conditions were as
Aglient TC － C18 column (4． 6 mm ×250 mm，5μm) ，acetonitrile (A)and 0． 4% (V /V)phosphoric acid
solution (B)composed as the mobile phase for gradient elution，1． 0 mL /min of flow rate，240 nm of detec-
tion wavelength and 25℃ of column temperature． The results showed that all the three components were sepa-
rated well and their calibration curves showed good linear regression within test ranges;and the precision，re-
producibility and stability of this method were better and the recovery rates ranged from 98． 65% to 99． 07% ．
In conclusion，this method was accurate，reliable and convenient，so it could be used for the quality evalua-
tion of Lonicerae japonicae caulis．
Key words Lonicerae japonicae caulis;Cholrogenic acid;Logania;Chiratin;Content determination
忍冬藤为忍冬科植物忍冬(Lonicera japonica
Thunb．)的茎枝，具有清热解毒、疏风通络的功
效，用于温病发热、热毒血痢等症的治疗［1］。忍
冬藤的化学成分复杂，含有机酸类、黄酮类、环烯
醚萜类、挥发油类化合物［2］，其中绿原酸和马钱
苷是《中国药典》(2010 版)规定的忍冬藤的质量
控制指标，此外，当药苷也是忍冬藤中重要的化学
成分，具有保肝作用［3］。本研究在查阅近几年忍
冬藤质量控制相关文献的基础上，建立了采用
ＲP － HPLC法同时测定忍冬藤中绿原酸、马钱苷、
当药苷三种成分含量的新方法，旨在为全面控制
忍冬藤质量及提高临床用忍冬藤质量奠定基础。
1 材料与方法
1． 1 材料
共收集到 6 批忍冬藤药材，经山东中医药大
学周凤琴教授鉴定其为忍冬科植物忍冬的茎枝。
样品编号及来源见表 1。
表 1 样品来源与编号
编号 来源
1 济南漱玉平民药店
2 济南宏济堂药店
3 泰安永春堂药店
4 山东中医药大学药圃
5 济南东方药店
6 山东医药技师学院药圃
1． 2 仪器
Agilentl200 型高效液相色谱仪，配 G1311A
四元梯度泵，G1329B 自动进样器，G1314B 可变
波长紫外检测器和 ChemStation 色谱数据工作站
(美国 Agilent公司) ;CP114 型分析天平(上海奥
豪斯仪器有限公司)。
1． 3 试剂
对照品绿原酸、马钱苷、当药苷(纯度 ＞
99． 0%)均购自上海源叶生物科技有限公司;乙
腈(色谱纯，天津市四友精细化学品有限公司) ;
磷酸(分析纯，莱阳化工实验厂) ;甲醇(分析纯，
天津市富宇精细化工有限公司)。
1． 4 对照品溶液制备
精确称取对照品绿原酸、马钱苷、当药苷，分
别加 50%甲醇溶解，配制浓度为 0． 2375、0． 4896、
0． 3438 mg /mL的对照品溶液。
1． 5 供试品溶液制备
将忍冬藤样品磨成细粉，取约 1． 5 g，精确称
量，置具塞锥形瓶中，精确加入 50%甲醇 25 mL，
超声处理 30 min，冷却，称重，用 50%甲醇补足减
失的质量，摇匀，以微孔滤膜(0． 45 μm)过滤，即
得供试品溶液。
1． 6 色谱条件
Aglient TC － C18(4． 6 mm × 250 mm，5 μm)
色谱柱;流动相:A 为乙腈，B 为 0． 4%磷酸溶液，
梯度洗脱。洗脱程序:0 ～ 10 min，A为 10%;10 ～
12 min，A为 12%;12 ～ 13 min，A为 12%→13%;
18 min，A为 13%;18 ～ 19 min，A为 13%→17%;
21 min，A为 17%;21 ～ 23 min，A为 19%→20%;
27 min，A为 20%;27 ～ 30 min，A为 20%→30%;
30 ～ 40 min，A 为 30%→50%。流速为:1． 0 mL /
min，检测波长为 240 nm，柱温 25℃，进样量 20
μL。色谱图见图 1。
1:绿原酸;2:马钱苷;3:当药苷
图 1 对照品(A)及样品(B)色谱图
521第 9 期 于晓，等:ＲP － HPLC法同时测定忍冬藤中绿原酸、马钱苷、当药苷含量的研究
2 结果与分析
2． 1 标准曲线制备
分别精确吸取对照品溶液 2、4、6、10、20、40
μL进样，以峰面积(Y)为纵坐标，进样量(X)为
横坐标，进行回归计算，得绿原酸回归方程为Y =
2138． 7X + 21． 9(r = 0． 99991) ，线性范围为
0． 475 ～4． 75 μg;马钱苷回归方程为 Y =2000． 3 X +
35． 9(r = 0． 99994) ，线性范围为 0． 9792 ～ 9． 792
μg;当药苷回归方程为 Y = 1197． 6X + 33． 0 (r =
0． 99995) ，线性范围为 0． 6876 ～ 6． 876 μg。
2． 2 精密度考察
将对照品溶液按设定色谱条件进行测定，连
续进样 6 次，每次 20 μL，将所测峰面积进行统
计，结果绿原酸、马钱苷、当药苷三种成分的 ＲSD
分别为 2． 12%、1． 87%、1． 34%，表明精密度良
好。
2． 3 重复性考察
精确称取 6 份样品 4，各约 1． 5 g，制备供试
品溶液，按设定色谱条件测定各成分的含量。结
果绿原酸、马钱苷、当药苷三种成分的含量分别为
0． 33%、0． 69%、0． 22%，ＲSD 分别为 2． 32%、
2． 87%、1． 56%，表明方法重现性良好。
2． 4 稳定性考察
取供试品溶液一份，分别在 0、2、4、6、8、12 h
各进样 1 次，测定并计算三种成分峰面积的 ＲSD，
绿原酸、马钱苷、当药苷分别为 1． 68%、2． 41%、
2． 76%，表明在 12 h内样品稳定性良好。
2． 5 回收率考察
取已知含量的 4 号样品 6 份，各 1． 5 g，精确
称量，置于具塞锥形瓶中，分别加入绿原酸、马钱
苷、当药苷对照品适量，制备供试品溶液，按设定
色谱条件测定回收率，结果表明绿原酸、马钱苷、
当药苷的平均回收率分别为 99． 07%、98． 65%、
98． 82%，ＲSD 分别为 0． 84%、1． 18% 和1． 26%
(表 2)。
2． 6 样品含量测定
分别取各样品约 1． 5 g，精确称量，制备供试
品，重复 3 次，按设定色谱条件进样，按外标一点
法计算各成分的含量，结果见表 3。可见，所测定
6 种来源的忍冬藤饮片中绿原酸和马钱苷含量均
符合《中国药典》(2010 版)的规定，其中，绿原酸
的含量为 0． 07% ～ 0． 33%，最高者为最低者含量
的 4． 7 倍;马钱苷的含量为 0． 18% ～ 0． 70%，最
高者为最低者含量的 3． 9 倍;当药苷的含量为
0． 21% ～0． 49%，最高者为最低者含量的 2． 3 倍。
表 2 3 种成分的回收率
组分
称样量
(g)
样品中含量
(mg)
对照品加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
ＲSD
(%)
绿原酸 1． 5232 5． 0814 5． 1492 10． 2234 99． 86 99． 07 0． 84
1． 5108 5． 0400 4． 6876 9． 6690 98． 75
1． 5076 5． 0294 4． 5799 9． 5845 99． 46
1． 5243 5． 0851 4． 7861 9． 8716 100． 01
1． 4997 5． 0030 4． 5799 9． 4908 97． 99
1． 5004 5． 0053 4． 5965 9． 5246 98． 32
马钱苷 1． 5232 10． 5771 7． 0977 17． 5797 98． 66 98． 65 1． 18
1． 5108 10． 4910 6． 8946 17． 3497 99． 48
1． 5076 10． 4688 7． 0543 17． 4673 99． 21
1． 5243 10． 5847 7． 4218 17． 8076 97． 32
1． 4997 10． 4139 7． 3587 17． 5673 97． 21
1． 5004 10． 4188 6． 4362 16． 8563 100． 02
当药苷 1． 5232 3． 2581 3． 1876 6． 4376 99． 75 98． 82 1． 26
1． 5108 3． 2316 3． 4679 6． 6775 99． 32
1． 5076 3． 2248 3． 0234 6． 2017 98． 56
1． 5243 3． 2605 3． 1176 6． 3011 97． 64
1． 4997 3． 2079 3． 3489 6． 4673 97． 21
1． 5004 3． 2094 3． 2677 6． 4905 100． 42
表 3 样品含量测定结果(n = 3)
样品编号 绿原酸(%) 马钱苷(%) 当药苷(%)
1 0． 20 0． 62 0． 38
2 0． 11 0． 39 0． 30
3 0． 20 0． 31 0． 43
4 0． 33 0． 70 0． 21
5 0． 07 0． 18 0． 49
6 0． 14 0． 53 0． 27
3 讨论与结论
本试验建立了采用 ＲP － HPLC 同时测定忍
冬藤中绿原酸、马钱苷、当药苷含量的方法，所采
用的色谱条件稳定、可靠、重现性好，为忍冬藤的
质量控制奠定了基础。
不同来源样品三种成分含量差异显著，可能
是因为饮片产地及贮藏期不同。样品 4 与样品 6
分别来自山东中医药大学药圃和山东医药技师学
院药圃，两种样品均采自 2012 年 12 月底，并同时
采用晒干的干燥方式加工后同时测定，二者的含
量亦存在较大差异，可能是因为植株生长年限以
及枝条老嫩程度的差异所致。 (下转第 145 页)
621 山 东 农 业 科 学 第 47 卷
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502 － 504．
(上接第 126 页)
临床研究证明［4 ～ 10］，忍冬藤具有抗氧化、抗
病毒、抗炎、解热、抗肿瘤等药理活性，但相比较金
银花，其研究相对滞后。今后应对影响其质量的
因素进行研究，以期为临床提供质量更加优良的
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