全 文 ：China Pharmaceuticals
2013年 2月 20日 第 22卷第 4期
Vol． 22, No． 4, February 20, 2013
高效液相色谱法测定当药中龙胆苦苷含量
段吉平，冯 丽，张立涛
（河北省食品药品检验院，河北 石家庄 050011）
摘要：目的 建立测定当药中龙胆苦苷含量的高效液相色谱法。方法 采用外标法，用 Capcell Pak － C18 色谱柱（150 mm × 4． 6 mm，5 μm），
以甲醇 － 水（20 ∶ 80）为流动相，检测波长为 274 nm，流速为 1． 0 mL ／ min。结果 龙胆苦苷进样量的线性范围为 0． 040 48 ～ 6． 072 μg
（ r ＝ 0． 999 9），平均回收率为 100． 86％ ，RSD为 0． 53％ （ n ＝ 6）。结论 该方法简便、准确、灵敏，可作为当药中龙胆苦苷的定量分析方法。
关键词：当药；龙胆苦苷；高效液相色谱法
中图分类号：R284． 1；R282． 71 文献标识码：A 文章编号：1006 － 4931 (2013 )04 － 0039 － 02
Determination of Gentiopicr in Content in Swer tiae Herba by HPLC
Duan Jiping， Feng Li， Zhang Litao
（ Hebei Provincial Institute for Food and Drug Control， Shijiazhuang， Hebei， China 050011）
Abstr act：Objective To establish a HPLC method for the determination of gentiopicrin content in Swertiae Herba． Methods The exter-
nal method with the Capcell PAK － C18 column （150 mm × 4． 6 mm，5 μm） and methanol － water （20 ∶ 80） as the mobile phase were
adopted． The detective wave length was 274 nm and the flow rate was 1． 0 mL ／ min． Results The linear range of gentiopicrin was
0． 040 48 － 6． 072 μg（ r ＝ 0． 999 9）， the average recovery rate of gentiopicrin was 100． 86％ ， and RSD was 0． 53％ （ n ＝ 6） ．
Conclusion The method is simple，accurate and sensitive，which is adoptable for the quantitative analysis of gentiopicrin in Swertiae Herba．
K ey words： Swertia pseudochinensis；gentiopicrin；HPLC
A
AU
2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30
t ／ min
B
0． 030
0． 020
0． 010
0
A． 对照品溶液 B． 供试品溶液
图 1 高效液相色谱图
AU
0． 040
0． 030
0． 020
0． 010
0
2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30
t ／ min
19． 859
19． 692
当药，又名紫花当药，为河北、内蒙古一带的民间草药，中医临
床用量较少，中药生产企业主要用于当药片和当飞利肝宁胶囊的
生产。其在历代本草中未见收载，在《内蒙古中草药》 [1 ]中有收载，
生于海拔 500 ～ 1 600 m的山坡、林下或灌丛中，为龙胆科植物瘤
毛獐牙菜 Swertia pseudochinensis Hara 的干燥全草，具有清湿热、健
胃功能，用于湿热黄疸、胁痛、痢疾腹痛、食欲不振，其有效成分为
龙胆苦苷 [2 ]。现采用高效液相色谱法，对龙胆苦苷的含量测定方法
进行了研究，为更好地控制当药的质量提供了可靠的方法。
1 仪器与试药
Mettler AE 163 型 Mettler AE 240 型电子天平 （瑞士 ）； Shi-
madzu UV － 2450 型 紫 外 －可 见 分 光 光 度 计 （日 本 ）； Waters
2695 － 2996 型高效液相色谱仪（美国）。龙胆苦苷对照品（供含量
测定用，批号为 110770 － 200510，中国药品生物制品检定所）；试
剂为甲醇（色谱纯）；水为去离子水；当药（收集于安国药市，由河
北省药品检验所主任药师牛小莲鉴定，编号与产地，1 号、2 号、3
号均为河北，4 号、5 号、6 号均为内蒙。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱 ：Capcell pak C18 柱 （150 mm × 4． 6 mm，5 μm）；流动
相：甲醇 －水（20 ∶ 80）；流速：1． 0 mL ／ min；检测波长：274 nm；柱
温：25 ℃ ；进样量：10 μL。高效液相色谱图见图 1。
2． 2 溶液制备
取龙胆苦苷对照品 0． 010 12 g，置 25 mL容量瓶中，加甲醇
适量使溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得对照品浓溶液 。精密
量取对照品浓溶液 5． 00 mL，置 50 mL容量瓶中，用甲醇稀释至
刻度，摇匀，即得对照品溶液。取当药药材粉碎过 3 号筛，混匀，
称取粉末 2 g，精密称定，置 100 mL具塞锥形瓶中，精密加入甲
醇 50 mL，密塞，称定质量，超声处理（功率 250 W，频率 40 kHz）
20 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，
取续滤液，即得供试品溶液。
2． 3 方法学考察
线性关系考察：精密量取龙胆苦苷对照品浓溶液（质量浓度
为 0． 404 8 mg ／ mL）5 mL，置 100 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻
度，摇匀，得龙胆苦苷对照品稀溶液。取对照品稀溶液 2，10 μL和
龙胆苦苷对照品浓溶液 5，10，15 μL，分别注入液相色谱仪，按拟订
的色谱条件测定，以峰面积积分值 ( Y)为纵坐标、龙胆苦苷对照品
进样量 ( X)为横坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y＝ 1 264 734 X ＋
20 446． 7， r ＝ 0． 999 9 ( n ＝ 5 ) ，结果表明 ，龙胆苦苷进样量在
0． 040 48 ～ 6． 072 μg 范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。
精密度试验：精密吸取对照品溶液 5 μL，连续进样 5 次，测
定龙胆苦苷峰面积。结果的 RSD 为 0． 78％ （ n ＝ 5），表明仪器精
密度良好。
稳定性试验：取龙胆苦苷对照品溶液 10 μL，注入液相色谱仪
11 次，前 6 次间隔 1． 5 h，后 5 次间隔 3 h；取供试品溶液 10 μL，
注入液相色谱仪 9 次，前 5 次间隔 1． 5 h，后 4 次间隔 5 h，记录龙
胆苦苷峰面积积分值。结果对照品溶液的 RSD为 0． 92％ ，供试品
溶液的 RSD为 0． 84％ ，表明对照品及供试品溶液在 24 h 内稳定
性良好。
重复性试验：取同一批样品（1 号）粉末 1． 6，2． 0，2． 4 g 各 3
份，精密称定，按 2． 2 项下的方法制成供试品溶液，按拟订方法测
·药物鉴定·
Drug Identification
0
0
39
China Pharmaceuticals
2013年 2月 20日 第 22卷第 4期
Vol． 22, No． 4, February 20, 2013
表 1 龙胆苦苷加样回收试验结果（ n ＝ 6）
样品含量（μg）
0． 332 0
0． 327 2
0． 318 8
0． 317 2
0． 336 6
0． 317 0
加入量（μg）
0． 191 9
0． 191 9
0． 310 2
0． 310 2
0． 438 0
0． 438 0
测得量（μg）
0． 526 2
0． 520 8
0． 631 6
0． 630 8
0． 780 2
0． 754 2
回收率（％ ）
101． 20
100． 89
100． 84
101． 10
101． 29
99． 82
X （％ ）
100． 86
RSD（％ ）
0． 53
定，样品的平均含量为 1． 549 mg ／ g， RSD 为 1． 1％ （ n ＝ 9），表明
方法重复性良好。
加样回收试验 [3 ]：精密称取已知含量的样品 （1 号 ，含量为
1． 549 mg ／ g）适量，共 6 份，分别加入高、中、低质量浓度的龙胆苦
苷对照品溶液，按供试品溶液的制备与测定方法测定龙胆苦苷含
量，并计算回收率。结果见表 1。
2． 4 样品含量测定
取 5 批当药，按前述 2． 2 项下方法操作，制成供试品溶液，按
上述检测方法测定 ，计算样品含量 。结果批号分别为 071203，
060401，080103，080102，071204，080101 的样品中龙胆苦苷含量
分别为 0． 15％ ，0． 27％ ，0． 19％ ，0． 18％ ，0． 16％ ，0． 17％ 。
3 讨论
本试验还采用 3 个厂家的色谱柱，色谱柱型号分别为：岛津
Shimadzu Vpodssygg（150 L × 6． 0 mm），戴安 Dionex Acclaim 120
C18柱 （250 mm × 4． 6 mm ， 5 μm） 、菲罗门 Phenomenex C 18 柱
（250 mm × 4． 6 mm，5 μm），考察对分离及测定的影响，结果 3 种
C18 色谱柱柱效、分离度均符合要求，并且含量无明显区别，故认
为本法对 C18 色谱柱品牌无特定要求。
龙胆苦苷具有镇痛 、抗炎的作用 [2 ]，为当药的有效成分，用高
效液相色谱法测定当药中龙胆苦苷尚未见报道。本研究建立的
HPLC 检测方法精密度、重现性好，杂质干扰少，龙胆苦苷的峰纯
度、峰形、分离度均比较理想，样品稳定性和回收率均较高，是一
种理想的测定方法。
作者简介：段吉平（1963 － ），男，大学本科，主任药师，研究方
向为中药质量控制 ，（电话 ）0311 － 85212004 － 8042（电子信箱 ）
jiping819＠ sohu． com。
参考文献：
[ 1 ] 内蒙古自治区革命委员会卫生局 ． 内蒙古中草药 [M ] ． 呼和浩特：内
蒙古自治区人民出版社，1972：206 － 207．
[ 2 ] 陈 雷，王海波，孙晓丽，等 ． 龙胆苦苷镇痛抗炎药理作用研究 [ J ] ．
天然产物研究与开发，2008（5）：903 － 906．
[ 3 ] 徐艳红，陆 君，郭汉文，等 ． 高效液相色谱法测定结肠消炎丸中芦
丁含量 [ J ] ． 中国药业，2011，20（19）：34 － 35．
(收稿日期：2012 － 07 － 17 )
高效液相色谱 －质谱联用法检查止喘灵胶囊中非法添加
的醋酸泼尼松和茶碱
王 戈，赵培敬
（河南省南阳市食品药品检验所，河南 南阳 473061）
摘要：目的 采用高效液相色谱 －质谱联用技术，检查止喘灵胶囊中非法添加的醋酸泼尼松和茶碱。方法 色谱柱为 Shimadzu shim －
pack VP － ODS柱（250 mm × 4． 6 mm，5 μm），0． 02 mol ／ L 乙酸铵 － 0． 1％冰醋酸水溶液 ∶乙腈（71 ∶ 29）为流动相，流速为 1． 0 mL ／ min；Agilent
6310 型离子阱质谱仪，电喷雾离子源（ESI），雾化气压力为 50 psi，干燥气温度为 380 ℃ ，流速为 9． 5 mL ／ min，毛细管电压为 3 500 V，扫描范
围为 100 ～ 500 m ／ z，检测方式为正、负模式一级、二级同时扫描。结果 在高效液相色谱、质谱中，样品出现与醋酸泼尼松、茶碱成分一
致的色谱峰、质谱峰。结论 所用方法简单可行，结果准确可靠，可用于止喘灵胶囊中非法添加醋酸泼尼松、茶碱的定性鉴别。
关键词：止喘灵胶囊；醋酸泼尼松；茶碱；高效液相色谱 －质谱联用
中图分类号：R927． 2；R286． 0 文献标识码：A 文章编号：1006 － 4931 (2013 )04 － 0040 － 02
Determ ination of Pr ednisone Acetate and Theophylline Illegally Added into Zhichuanling
Capsules by HPLC － M S ／ M S
Wang Ge， Zhao Peijing
（ Nanyang Institute for Food and Drug Control， Nanyang， Henan， China 473061）
Abstr act： Objective To establish a HPLC － MS ／ MS method for detecting prednisone acetate and theophylline illegally added in
Zhichuanling Capsules． M ethods The detection was performed on the Shimadzu shim － pack VP － ODS column（250 mm × 4． 6 mm，
5 μg） with the mobile phase of 0． 02 mol ／ L ammonium acetate － 0． 1％ glacial acetic acid solution：acetonitrile（71 ∶ 29） at a flow rate
of 1． 0 mL ／ min． The Agilent 6310 ion trap mass spectrometer was adopted with electrospray ion sourse（ESI） ． The nebulizer pressure
was 50 psi and the dry air temperature was 380 ℃ with a rate of 9． 5 mL ／ min，the capillary voltage was 3 500 V． The scan range
was 100 － 500 m ／ z． The detection mode： simultaneous first and second level scanning with positive and negative modes． Results In
HPLC and MS，the chromatographic and mass peaks coinciding with prednisone acetate and theophylline reference substances were found
in the sample． Conclusion This method is simple and feasible with the accurate and reliable results，so which can be used to qualita-
tively identify prednisone acetate and theophylline illegally added into Zhichuanling Capsules．
Key words：Zhichuanling Capsules；prednisone acetate；theophylline；LC － MS ／ MS
中成药制剂具有疗效确切、毒副反应小的优点，适用于一些 慢性疾病的治疗。目前市场上一些不法商家利用患者对传统中医
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
·药物鉴定·
Drug Identification
40