全 文 ： 2010, Vol. 31, No. 19 食品科学 ※基础研究150
中国树花中松萝酸含量的测定及抗氧化活性
吐尔干乃义·吐尔逊，热衣木·马木提，阿地里江，阿不都拉·阿巴斯 *
(新疆大学生命科学与技术学院，新疆 乌鲁木齐 830046)
摘 要：以从新疆天山八一林场采集的中国树花(Ramalina sinesis Jatta.)为材料，用乙酸乙酯为溶剂回流提取松萝
酸，用高效液相色谱法测定松萝酸的含量并对松萝酸的还原力、羟自由基清除率进行测定。结果表明：中国树花
中松萝酸的总含量为 18.32%，松萝酸具有较强的还原力及清除羟自由基的能力。
关键词：中国树花；松萝酸；高效液相色谱；抗氧化
Content Determination and Antioxidant Activity Evaluation of Usnic Acid in Ramlina sinesis Jatta
Tugunay TURSUN，Reyim MAMUTI，Adilijiang，Abdulla ABBAS*
(College of Life Science and Technology, Xinjiang University, Urumqi 830046, China)
Abstract：In this study, usnic acid in Ramalina sinesis Jatta growing in August First forest farm, Tianshan mountain area,
Xinjiang autonomous region was extracted with ethyl acetate by reflux extraction for content determination by HPLC and
antioxidant activity evaluation by reducing power and hydroxyl free radical scavenging assays. The content of usnic acid in
Ramalina sinesis Jatta was 18.32%, and usnic acid derived from Ramalina sinesis Jatta had interesting reducing power and hydroxyl
free radical scavenging capacity (with vitamin C as the control).
Key words：Ramalina sinensis Jatta；usnic acid；HPLC；antioxidant activity
中图分类号：TS254.58 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2010)19-0150-03
收稿日期：2010-06-10
基金项目：国家自然科学基金项目(30960003；30750012)
作者简介：吐尔干乃义·吐尔逊( 1 9 8 3 —)，女，硕士研究生，研究方向为地衣有效成分分析。
E-mail：turgunay83@126.com
*通信作者：阿不都拉·阿巴斯(1951—)，男，教授，博士，研究方向为资源植物成分。E-mail：abdulla@xju.edu.cn
地衣是一类藻类和真菌共生的生物，除了在形态上
与高等植物有很大不同外，其化学成分也有其独到之
处。许多只有在地衣中才存在的化学物质，因其具有
神奇的生物活性正逐渐引起化学家和药学家的广泛关
注，地衣物质在许多国家已经被应用于医药事业[1-3]。由
地衣中提取抗生素是当前最重要而热门的研究课题，地
衣主要成分松萝酸已经成为研究最广泛的地衣物质之
一。对于松萝酸的抗菌功能、化学性质及其在医药、
环境监控等各个领域的应用研究，多见于外文文献的报
道。中国树花属于树花科 ( R a m a l i n a c e a e )树花属
(Ramalina Ach.)，松萝酸是其主要成分之一[4]。药理实
验证明：松萝酸为一广谱抗菌成分，尤其对结核杆菌和
革兰氏阳性细菌作用突出还有明显的抗癌、抗滴虫、抗
原虫和解痉作用[5-7]。而人类许多疾病的发生都与自由基
有着密切的联系，因此对中国树花中的松萝酸进行抗氧
化作用研究具有重要的意义。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
中国树花(Ramalina sinesis Jatta.)采自于新疆天山八
一林场，并经阿不都拉·阿巴斯教授鉴定为树花科
(Ramalinaceae)树花属(Ramalina Ach.)中国树花(Ramalina
sinesis Jatta.)。
乙酸乙酯、无水乙醇、苯、氯仿、铁氰化钾、
磷酸二氢钾、氢氧化钠、三氯乙酸、三氯化铁、水
杨酸、过氧化氢、松萝酸对照品、V C 等均为分析纯。
1.2 仪器与设备
DHG-9141A型电热恒温干燥箱 上海精宏实验设备
有限公司；可见分光光度计、SHZ-D循环水式真空泵、
HH-S电热恒温水浴锅 巩义市英峪予华仪器厂；RE-52A
旋转蒸发器 上海亚荣生化仪器厂；Spectrumlab 53紫
外 -可见分光光度计 上海棱光技术有限公司；1100高
效液相色谱仪 安捷伦公司。
. . ..
151※基础研究 食品科学 2010, Vol. 31, No. 19
1.3 中国树花中松萝酸含量的测定
1.3.1 色谱条件
色谱柱：Kromasil C18柱(200mm× 4.6mm，5μm)；
流动相：甲醇 -水 -冰乙酸(体积比 81:14:5)；检测波长：
254nm；流速：1mL/min；柱温：30℃[ 8]。
1.3.2 中国树花中松萝酸的提取
称取 5g中国树花粉末，用 100mL乙酸乙酯回流提
取 3 次，每次 3 h，合并提取液，抽滤，浓缩至原体
积的 1 / 6，自然冷却，析出结晶，滤去母液，于 80℃
烘干，即得松萝酸粗品。向粗品中加入 30 倍量苯 - 乙
醇(体积比 1:1)混合溶剂，回流 2h，趁热过滤，将滤液
浓缩至原体积的 1/5，冷却析出结晶，于 80℃烘干，用
乙酸乙酯重结晶两次，所得较纯的淡黄色针晶即为松萝
酸精品[9-11]。用少量氯仿溶解并用甲醇定溶至 25mL，取
10μL 注入液相色谱仪。
1.4 中国树花中松萝酸的抗氧化活性研究
1.4.1 还原力的测定[12]
分别准确吸取2.0mL不同质量浓度的样品液、VC溶
液，加入 0.2mol/L pH6.8磷酸缓冲液 2.0mL，0.01g/mL
氰化钾 2.0mL，50℃水浴 20min后急速冷却，加入0.1g/mL
三氯乙酸 2.0mL，于 3000r/min离心 10min，取上清液
5.0mL，加蒸馏水 4.0mL，0.001g/mL三氯化铁 1.0mL，
混合后 10min以蒸馏水作参比于波长 700nm处测定吸光
度，吸光度越大则还原力越强。
1.4.2 对羟自由基清除率的测定[13-15]
利用 H2O2与 Fe3+混合产生·OH，但由于·OH具
有很高的反应活性，存活时间短，若在反应体系中加
入水杨酸，就能有效地捕捉·O H，并产生有色产物。
该产物在波长 510nm处有强吸收，若在此反应体系中加
入具有清除·O H 功能的被测物，便会与水杨酸竞
争·O H，从而使有色产物生成量减少。反应体系为：
9mmol/L Fe2(SO4)3溶液 1.0mL和 9mmol/L水杨酸 -乙醇溶
液 1.0mL作为对照溶液，加入不同质量浓度的松萝酸溶
液，最后加 8.8mmol/L H2O2溶液 1.0mL启动反应，37℃
反应 0.5h，以蒸馏水为参比，在波长 510nm处测定各
浓度的吸光度，考虑到本身的吸光度，以 9m mo l / L
Fe2(SO4)3溶液 1.0mL、9mmol/L水杨酸 -乙醇溶液1.0mL、
不同质量浓度的松萝酸提取液、VC溶液各2.0mL，蒸馏水
1.0mL作为样品液的本底吸收。其清除率计算公式如下：

A0－(Ax－Ax0)
·OH清除率 /%=————————×100 (1)

A0
式中：A0为对照溶液的吸光度；Ax为加入 H2O2和
对照溶液的样品液吸光度；A x0 为加入对照溶液，不加
H2O 2样品液的本底吸光度。
2 结果与分析
2.1 中国树花中松萝酸的含量测定结果
按照图 1，以中国树花松萝酸质量为横坐标，峰面
积为纵坐标做标准曲线，可知，回归方程为 y=2.1771x－
54.95，R2=0.9991，质量在 0～700ng范围内线性关系良
好。图 2为中国树花松萝酸HPLC图，样品中中国树花
松萝酸的质量浓度为 91.61μg/mL，中国树花中松萝酸的
总含量为 18.32%。
2.2 中国树花松萝酸抗氧化活性的测定结果
2.2.1 还原力的测定结果
图 1 松萝酸标准品 HPLC图谱
Fig.1 Chromatogram of usnic acid standard
25
20
15
10
5
0
16
.4
76
m
A
U
时间 /min
0 5 10 15 20 25
17
.8
21
13
.1
18
12
.3
02
10
.8
62
4.
61
9
5.
27
0
3.
83
6
图 2 中国树花松萝酸的 HPLC图
Fig.2 Chromatogram of usnic acid derived from Ramalina sinesis
Jatta
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0
16
.6
24m
A
U
时间 /min
0 5 10 15 20 25
4.
62
9
图 3 中国树花松萝酸和 VC 溶液还原力测定结果
Fig.3 Comparison of reducing power between usnic acid derived from
Ramalina sinesis Jatta and vitamin C
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0
中国树花松萝酸
VC
A
70
0n
m
质量浓度 /(μg/mL)
0 20 40 60 80 100
由图 3可知，VC和中国树花松萝酸溶液都随着质
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量浓度的增大吸光度也逐渐增大，总体来看，中国树
花松萝酸溶液的具有一定的还原力，但 VC的还原力强
于中国树花松萝酸。
2.2.2 对羟自由基清除率的测定结果
由图 4可知，VC 和中国树花松萝酸溶液都随着质
量浓度的增大清除率也增加，VC的 EC50为 143μg/mL，
中国树花松萝酸溶液的 EC50=54.56μg/mL。可知，中国
树花松萝酸溶液对羟自由基有较强的清除能力。
3 结 论
本研究采用高效液相色谱法测定中国树花中松萝酸
的含量为 18.32%，这说明中国树花中松萝酸含量较高。
采用高效液相色谱法测定含量具有选择性好、样品用量
少、分辨率高、灵敏度高等优点，具有一定的实际应
用价值。
中国树花中提取的松萝酸具有较强的还原力，随着
松萝酸质量浓度的增加还原力增强。本实验用 VC作参
照物来测定松萝酸清除羟自由基的能力，结果表明，
VC的EC50为 143μg/mL，中国树花松萝酸溶液的EC50为
54.56μg/mL，可知，中国树花松萝酸有较强的清除羟
自由基的能力。
参 考 文 献 ：
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图 4 中国树花松萝酸和 VC 溶液对羟自由基清除率的测定结果
Fig.4 Comparison of hydroxyl free radical scavenging capacity
between usnic acid derived from Ramalina sinesis Jatta and vitamin C
80
70
60
50
40
30
20
10
0
中国树花松萝酸
VC
清
除
率
/%
质量浓度 /(μg/mL)
0 20 40 60 80 100