全 文 ：·生物技术· 北方园艺２０１２（２２）：１０４～１０７
第一作者简介：孙永健（１９８３－），男，硕士，助教，现主要从事生物化
学及分子生物学方面的教学与研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｙｊｗｏｎｄｅｒｆｕｌ＠
ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ．
责任作者：张磊（１９５２－），男，本科，教授，现主要从事遗传学及植物
细胞工程方面的研究工作。
基 金 项 目：天 津 市 科 技 支 撑 计 划 重 点 资 助 项 目
（０９ＺＣＫＦＮＣ０１６００）。
收稿日期：２０１２－０７－１８
适于ＡＦＬＰ分析的非洲紫罗兰ＤＮＡ提取方法研究
孙 永 健１，孙 　 宁２，曹 智 攀３，陈 小 强２，张 乃 楠２，张 　 磊２
（１．天津天狮学院，天津３０１７００；２．天津农学院，天津３００３８４；３．中国医学科学院 天津血液学研究所，天津３０００２０）
　　摘　要：以非洲紫罗兰同一植株的叶片和茎段为试材，采用新鲜组织提取、烘干组织提取、冷
冻干燥组织提取的３种不同预处理方法，并采用ＤＮＡ　Ｋｉｔ、ＣＴＡＢ－Ⅰ、ＣＴＡＢ－Ⅱ３种提取方法，比较
分析了ＤＮＡ片断大小及不同方法提取ＤＮＡ的纯度与得率，以期确定适用于多酚、多糖、水分含
量高的非洲紫罗兰的ＤＮＡ提取方法。结果表明：采用冷冻干燥组织提取法，经改良的ＣＴＡＢ?Ⅱ
法，即在２次抽提步骤中，加入一步利用ＣＴＡＢ沉淀液沉淀ＤＮＡ的方法最适合非洲紫罗兰ＤＮＡ
提取。这样得到的基因组ＤＮＡ可作为后续分子水平研究的优良ＰＣＲ模板。
关键词：ＤＮＡ提取；非洲紫罗兰；ＣＴＡＢ；冷冻干燥；ＡＦＬＰ分析
中图分类号：Ｓ　６８１．２　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１２）２２－０１０４－０４
　　随着分子生物学技术的飞速发展，基因分析在花卉
学上的应用日趋广泛，基因组ＤＮＡ的提取和纯化作为
基因分析的关键步骤，其方法的灵敏度、特异性直接影
响基因分析的结果。因此，许多学者一直在努力探索各
种基因组ＤＮＡ的提取方法［１－５］。由于不同植物的内含
物种类及含量存在一定差异，在实际工作中，科技工作
者通常会根据研究对象和目的不同对现有ＤＮＡ提取方
法进行修正。非洲紫罗兰（Ｓａｉｎｔｐａｕｌｉａ　ｉｏｎａｎｔｈａ）为苦苣
苔科多年生常绿宿根草本花卉，又名非洲堇。目前，世
界各地的园艺品种已达上千种，是极好的室内观赏花
卉。在基因水平上对非洲紫罗兰进行研究，有利于开展
其种质资源创新和新品种培育工作［６－７］。该研究试图通
过对不同方法的比较和分析，最终确定一套最适于非洲
紫罗兰ＤＮＡ的提取的方法，为多酚、多糖、水分含量高
的植物组织的ＤＮＡ提取提供借鉴［８］。
１　材料与方法
１．１　试验材料
供试样品为同一植株叶片和茎段的非洲紫罗兰，该
植株是从香港非洲紫罗兰协会的“伊华堇舍”引进的稳
定型缟花品种“Ｓｕｎｒａｙ　Ｔｒａｉｌ”。
１．２　试验方法
１．２．１　材料的预处理　鼓风干燥法：将新鲜的供试材料
放在滤纸上，置入设定好的鼓风干燥箱。温度设定为
６５℃，干燥６ｈ，待材料烘干后，取出置于－２０℃下保存备
用。冷冻干燥法：将新鲜的供试材料用纱布裹好，置入
－２０℃下冷冻２４ｈ。取出放在培养皿中，将培养皿敞口
放在真空冷冻干燥机中，抽真空冷冻干燥２４ｈ，待材料
干燥后，取出置入－２０℃下保存备用。
１．２．２　ＤＮＡ的提取　ＤＮＡ　Ｋｉｔ法：根据ＴＩＡＮＧＥＮ植
物基因组提取试剂盒说明书进行。ＣＴＡＢ?Ⅰ法：（１）准确
称取０．５ｇ样品于事先预冷过的研钵中，加液氮研成细
粉，迅速转入２ｍＬ的离心管中，加入１．３ｍＬ　６５℃预热
的ＣＴＡＢ提取液，上下颠倒充分混匀。在６５℃水浴中保
温３０ｍｉｎ，每隔１０ｍｉｎ上下颠倒缓慢混匀１０次。（２）取
出后冷却至室温，在转速为１４　０００ｒ／ｍｉｎ下，离心１０ｍｉｎ。
取上清８００μＬ转入另一个２ｍＬ离心管中，加入等体积
（８００μＬ）的氯仿／异戊醇（体积比为２４∶１），上下颠倒充
分混匀。在转速为１２　０００ｒ／ｍｉｎ，时间为１０ｍｉｎ的条件
下进行离心。（３）重复第（２）步１～２次。（４）吸取上清
７００μＬ转入１．５ｍＬ离心管中，先加入１／１０体积约７０μＬ
的乙酸钠，再加入等体积约７００μＬ预冷的异丙醇，于
－２０℃静置２ｈ以上或至沉淀出现。（５）在温度为４℃，
转速为１４　０００ｒ／ｍｉｎ，时间为１５ｍｉｎ的条件下进行离心。
弃去上清，７０％乙醇洗沉淀２次（２ｍＬ和１ｍＬ各１次），
期间将沉淀转入１．５ｍＬ离心管中，室温晾干。（６）加入
１００μＬ　ＴＥ（ｐＨ　８．０），室温下溶解ＤＮＡ至沉淀消失，
６５℃保温１５ｍｉｎ。加入１０ｍｇ／ｍＬ　ＲＮａｓｅ　Ａ　２μＬ（终浓
度２００ｎｇ／μＬ），混匀，３７℃保温２ｈ以上。（７）２０℃静置
１２ｈ以上，－２０℃保存。ＣＴＡＢ?Ⅱ法：（１）、（２）步方法同
４０１
北方园艺２０１２（２２）：１０４～１０７ ·生物技术·
ＣＴＡＢ?Ⅰ法。（３）取上清６００μＬ转入另１个离心管中，加
入２倍体积（１　２００μＬ）的ＣＴＡＢ沉淀液，上下颠倒１ｍｉｎ
让其混匀，静置３０ｍｉｎ。在转速为１２　０００ｒ／ｍｉｎ，时间为
１０ｍｉｎ的条件下进行离心。（４）弃去上清，倒置挥发掉
水分，加入８００μＬ浓度为１．２ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＣｌ溶液，将
沉淀溶解，混匀。加入等体积（８００μＬ）的氯仿／异戊醇，
颠倒混匀５ｍｉｎ。在转速为１２　０００ｒ／ｍｉｎ，时间为１０ｍｉｎ
的条件下进行离心。（５）、（６）、（７）步同ＣＴＡＢ?Ⅰ法的（４）、
（５）、（６）步。（８）加入ＴＥ（ｐＨ　８．０）０．４ｍＬ，再加入等体积
（０．５ｍＬ）的氯仿／异戊醇（２４∶１），轻轻颠倒摇匀２ｍｉｎ，在
转速为１０　０００ｒ／ｍｉｎ，时间为１０ｍｉｎ的条件下进行离心。
（９）重复ＣＴＡＢ?Ⅰ法的（４）、（５）步。（１０）加入１００μＬ　ＴＥ
（ｐＨ　８．０），室温下溶解 ＤＮＡ至沉淀消失，６５℃保温
１５ｍｉｎ。２０℃静置１２ｈ以上，－２０℃保存。
１．２．３　ＤＮＡ的检测　ＤＮＡ片段大小：取所提ＤＮＡ溶
解液８μＬ加２μＬ溴酚兰，用１％琼脂糖凝胶（含５０μＬ／Ｌ
ＥＢ），在０．５×ＴＢＥ电泳缓冲液中８０Ｖ电泳，待溴酚兰迁
移至胶的２／３时停止电泳，取出凝胶在紫外透射分析仪
上观察结果并照相。ＤＮＡ纯度和得率：取２０μＬ　ＤＮＡ
提取液，加入１　９８０μＬ　ＴＥ制成１００倍稀释液，用ＵＶ－
１６００型紫外可见分光光度计测定其在波长２３０、２６０和
２８０ｎｍ下的吸收值。ＯＤ２６０／ＯＤ２３０应大于２．０，当小于
２．０时，表明溶液中有残存的盐和小分子杂质，如核苷
酸、氨基酸、酚等。纯的ＤＮＡ溶液其ＯＤ２６０／ＯＤ２８０应为
１．８，大于１．９则有ＲＮＡ污染，小于１．６说明有蛋白质或
酚类污染。核酸浓度可按以下公式计算：ＤＮＡ浓度
（μｇ／μＬ）＝ＯＤ２６０×５０×Ｎ（样品稀释的倍数）／１　０００。对
于双链ＤＮＡ，ＯＤ２６０＝１．０时溶液浓度为５０μｇ／ｍＬ，ＤＮＡ
的得率按以下公式计算：ＤＮＡ质量浓度（μｇ／μＬ）×原提
取液体积（μＬ）／叶片鲜重（ｇ）。ＣＴＡＢ?Ⅱ法提取ＤＮＡ的
ＡＦＬＰ检测：在３７℃条件下，用限制性内切酶ＥｃｏＲⅠ和
ＭｓｅⅠ对ＣＴＡＢ?Ⅱ法提取的ＤＮＡ双酶切４ｈ，酶切反应体
系１５μＬ（模板ＤＮＡ　０．２μｇ，ＥｃｏＲⅠ和 ＭｓｅⅠ内切酶各
２．５Ｕ；１０×Ｂｕｆｅ　１．５μＬ；去离子水补齐体系）。连接体
系２５μＬ（酶切产物１５μＬ，Ｔ４连接酶２Ｕ，Ｔ４ＤＮＡ　１０×
Ｂｕｆｅｒ　２．５μＬ，５ｐＭ的ＥｃｏＲⅠａｄａｐｔｏｒ　１μＬ，５０ｐＭ的ＭｓｅⅠ
ａｄａｐｔｏｒ　１μＬ）。预扩增体系２０μＬ（连接产物１μＬ，
５０μＭ的ＥｃｏＲⅠ预扩引物０．２μＬ，５０μＭ的ＭｓｅⅠ预扩引
物０．２μＬ，１ＵＴａｑＤＮＡ聚合酶，２ｍＭ　ｄＮＴＰ　２μＬ，１０×
ＰＣＲ　Ｂｕｆｅｒ　２μＬ）。预扩增反应程序为：９４℃，３０ｓ；５６℃，
１ｍｉｎ；７２℃，１ｍｉｎ；共２４个循环。选择性扩增体系２０μＬ
（稀释２０倍的预扩产物５μＬ，５０μＭ 的ＥｃｏＲⅠ引物和
５０μＭ的ＭｓｅⅠ引物各０．１μＬ，Ｔａｑ　ＤＮＡ聚合酶０．８Ｕ，
２ｍＭ的ｄＮＴＰ　２μＬ，１０×ＰＣＲ　Ｂｕｆｅｒ　２μＬ）。扩增程序
为：９４℃预变性３０ｓ，［９４℃变性３０ｓ，６５℃（－０．７℃／循
环）复性３０ｓ，７２℃延伸１ｍｉｎ］×１３个循环，［９４℃变性
３０ｓ，５６℃复性３０ｓ，７２℃延伸１ｍｉｎ］×２３个循环，７２℃
保持５ｍｉｎ。ＰＣＲ产物加入变性胶上样缓冲液２０μＬ，
９５℃下变性５ｍｉｎ，然后迅速置于冰上冷击，取２～３μＬ
变性产物在６％变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳检测。
表１ ＡＦＬＰ分析的接头和引物序列
ＥｃｏＲＩ（Ｅ）５’－３’ ＭｓｅＩ（Ｍ）５’－３’
接头１ ＣＴＣＧＴＡＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＣ　 ＧＡＣＧＡＴＧＡＧＴＣＣＴＧＡＧ
接头２ ＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧＣＡＧＴＣ　 ＴＡＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＡＴ
预扩增引物 ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＣＡＡＴＴＣ（Ｅ００） ＧＡＴＧＡＧＴＣＣＴＧＡＧＴＡＡ（Ｍ００）
选择扩增
引物
ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＣＡＡＴＴＣＡＡＣ（Ｅ１１）
ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＣＡＡＴＴＣＡＣＧ（Ｅ１２）
ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＣＡＡＴＴＣＡＴＴ（Ｅ１３）
ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＣＡＡＴＴＣＡＧＡ（Ｅ１４）
ＧＡＴＧＡＧＴＣＣＴＧＡＧＴＡＡＣＡＣ（Ｍ１）
ＧＡＴＧＡＧＴＣＣＴＧＡＧＴＡＡＣＴＡ（Ｍ２）
ＧＡＴＧＡＧＴＣＣＴＧＡＧＴＡＡＣＣＧ（Ｍ３）
ＧＡＴＧＡＧＴＣＣＴＧＡＧＴＡＡＣＧＴ（Ｍ４）
２　结果与分析
２．１　材料的预处理方法对ＤＮＡ提取的影响
２．１．１　新鲜组织的提取　采用ＣＴＡＢ?Ⅱ法，对非洲紫罗
兰新鲜的叶片与茎段进行ＤＮＡ的提取，电泳结果见图
１。叶片ＤＮＡ所在泳道几乎无光亮的条带存在，茎段
ＤＮＡ所在的泳道呈一条微弱的亮带。说明基本没有从
新鲜的叶片组织中提取到ＤＮＡ，并且从新鲜茎段中所提
取到的ＤＮＡ非常少，不足以作为后续试验的高质量的
模板ＤＮＡ，因此以新鲜组织作为供试材料不能达到理想
的效果，需要对材料进行前期的处理。
图１　新鲜材料ＤＮＡ提取结果
注：１：叶片 ＤＮＡ；２：茎段 ＤＮＡ；Ｍ１：λＤＮＡ（２５ｎｇ／μＬ）；Ｍ２：
λＤＮＡ（５０ｎｇ／μＬ）；Ｍ３：λＤＮＡ（１００ｎｇ／μＬ）。图２、３同。
２．１．２　烘干组织的提取　采用ＣＴＡＢ?Ⅱ法，对经过
６５℃，６ｈ烘干处理的非洲紫罗兰叶片与茎段进行ＤＮＡ
的提取，电泳结果见图２。尽管叶片与茎段所在泳道呈
现的光亮条带明显，但ＤＮＡ的弥散现象较为严重，说明
所提取的ＤＮＡ发生了降解，即烘干法的处理过程中对
供试材料的ＤＮＡ产生了损伤，导致其降解，不能为后续
试验提供优质的ＤＮＡ模板。
２．１．３　冷冻干燥组织的提取　采用ＣＴＡＢ?Ⅱ法，对经冷
冻干燥处理的非洲紫罗兰叶片与茎段进行ＤＮＡ的提
取，电泳结果见图３。叶片与茎段所在泳道均呈现１条
较整齐的亮带，无弥散现象，表明提取量较多，ＤＮＡ完整
无降解，可以作为高质量的ＤＮＡ模板。说明冷冻干燥
法在对材料处理的过程中，对ＤＮＡ没有伤害，而且可以
将含水量高的材料中的水分充分挥发掉。
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·生物技术· 北方园艺２０１２（２２）：１０４～１０７
图２　烘干材料ＤＮＡ提取结果
图３　冷冻干燥材料ＤＮＡ提取结果
２．２　不同方法提取ＤＮＡ的片断大小
分别采用ＤＮＡ　Ｋｉｔ、ＣＴＡＢ?Ⅰ和ＣＴＡＢ?Ⅱ３种方法对
经冷冻干燥处理的非洲紫罗兰叶片进行ＤＮＡ提取。由
图４可知，利用３种方法得到ＤＮＡ的片段大小不同。
ＣＴＡＢ?Ⅰ和ＣＴＡＢ?Ⅱ法提取的ＤＮＡ的片段长度为４８ｋｂ。
ＤＮＡ　Ｋｉｔ法提取ＤＮＡ片段长度明显比ＣＴＡＢ法提取
ＤＮＡ片段少约８００ｂｐ。从３种方法提取ＤＮＡ片段长
度来看，ＣＴＡＢ法优于ＤＮＡ　Ｋｉｔ法。
图４　３种方法提取的ＤＮＡ片段大小对比
注：１，３，５：叶片ＤＮＡ；２，４，６：茎段ＤＮＡ；１，２：ＤＮＡ　Ｋｉｔ法；３，４：
ＣＴＡＢ?Ⅰ法；５，６：ＣＴＡＢ－Ⅱ法；Ｍ１：λＤＮＡ（２５ｎｇ／μＬ）；Ｍ２：λＤＮＡ
（５０ｎｇ／μＬ）；Ｍ３：λＤＮＡ（１００ｎｇ／μＬ）。
２．３　不同方法提取ＤＮＡ的纯度与得率
由３种方法提取的 ＤＮＡ电泳结果见图４。经
ＣＴＡＢ?Ⅰ法提取的ＤＮＡ，点样孔残留发亮现象较严重，表
明ＤＮＡ纯度较低，糖类、酚类、单宁等杂质含量较多，会
影响后续 ＡＦＬＰ分析的酶切反应。ＤＮＡ　Ｋｉｔ法与
ＣＴＡＢ?Ⅱ法所提ＤＮＡ纯度较高。经紫外分光光度计测
定结果见表２，不同的方法提取ＤＮＡ的 Ａ２６０／Ａ２８０和
Ａ２６０／Ａ２３０比值差别较大。ＤＮＡ　Ｋｉｔ、ＣＴＡＢ?Ⅰ、ＣＴＡＢ?Ⅱ法
提取ＤＮＡ的Ａ２６０／Ａ２８０比值分别为１．８２３、１．７１９、１．８０７；
Ａ２６０／Ａ２３０比值分别为２．９４６、２．１２７、３．５５１。ＣＴＡＢ?Ⅱ法提
取的ＤＮＡ样品纯度最高。ＤＮＡ　Ｋｉｔ、ＣＴＡＢ?Ⅰ、ＣＴＡＢ?Ⅱ
法得率分别为０．２７４、０．２５１、０．３０９ｍｇ／ｇ。其中，ＣＴＡＢ?Ⅱ
法得率最高。从３种方法得到ＤＮＡ的纯度和得率考
虑，可选择ＣＴＡＢ?Ⅱ法为非洲紫罗兰ＤＮＡ最适宜的提取
方法。
表２　不同种方法提取ＤＮＡ的纯度和得率
方法 Ａ２８０ Ａ２６０ Ａ２３０ Ａ２６０／Ａ２８０ Ａ２６０／Ａ２３０
ＤＮＡ浓度
／μｇ·μＬ－１
ＤＮＡ得率
／ｍｇ·ｇ－１
ＤＮＡ　Ｋｉｔ　０．１５０　０．２７４　０．０９３　 １．８２３　 ２．９４６　 １．３７０　 ０．２７４
ＣＴＡＢ?Ⅰ ０．１４６　０．２５１　０．１１８　 １．７１９　 ２．１２７　 １．２５５　 ０．２５１
ＣＴＡＢ?Ⅱ ０．１７１　０．３０９　０．０８７　 １．８０７　 ３．５５１　 １．５４５　 ０．３０９
　　注：表中所列不同波长下吸光度值为多个材料的平均值。
２．４　ＣＴＡＢ?Ⅱ法提取ＤＮＡ的ＡＦＬＰ扩增
为了进一步证明ＣＴＡＢ－ＩＩ法是适于非洲紫罗兰基
因组ＡＦＬＰ分析的ＤＮＡ提取方法，将利用其得到的基
因组ＤＮＡ进行了ＡＦＬＰ扩增。扩增产物的电泳结果
（图５）表明，扩增产物带型清晰、整齐、稳定、无拖尾现
象，条带集中在１５０～６５０ｂｐ之间。该结果表明ＣＴＡＢ－Ｉ
法提取的ＤＮＡ质量较高，能用作ＰＣＲ模板来开展非洲
紫罗兰分子水平的研究。
图５　ＡＦＬＰ标记部分引物组合的扩增效果
注：１，３，５，７：叶片；２，４，６，８：茎段。
３　讨论
在植物ＤＮＡ提取过程中，获得足够高质量ＤＮＡ是
研究人员追求的主要目标，它与后续研究工作能否顺利
进行密切相关［９］。提取植物ＤＮＡ的方法中关键的３步
为：破碎细胞壁和细胞膜使ＤＮＡ释放到提取裂解液中；
消除蛋白质、多糖、色素等杂质的污染；防止ＤＮＡ的降
解。一般认为质量好的ＤＮＡ的标准是：分子量保留较
大；可被限制性内切酶完全消化；有清晰的和强的ＰＣＲ
扩增式样。植物细胞内含物种类和数量是影响ＤＮＡ质
量的重要因素。研究表明，提取非洲紫罗兰ＤＮＡ的困
难在于其组织中含有大量水分和较多的酚类及多糖类
物质［１０］。
利用新鲜的组织进行ＤＮＡ提取时，组织内的水分
在研磨过程中被释放出来，稀释了后续加入的ＣＴＡＢ裂
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北方园艺２０１２（２２）：１０４～１０７ ·生物技术·
解液，导致细胞裂解不充分，ＤＮＡ得率便大大下降甚至
完全不能提取到ＤＮＡ。虽然烘干的方法能够很好的去
除组织中所含的水分，但是ＤＮＡ在长时间的高温环境
中受到了破坏，导致部分降解，质量下降，也不能够作为
后续试验的高质量模板。研究表明，采用真空冷冻干燥
机对含水量大的植物组织进行冻干处理，既可以很好的
去除水分，又对组织中的ＤＮＡ起到了良好的保护作用，
为ＤＮＡ的提取提供了一个良好的材料基础。
由于ＤＮＡ　Ｋｉｔ法的原理是对ＤＮＡ进行特异性的
吸附，因此所提取的ＤＮＡ纯度较高，基本不含其它细胞
内含物。但对于所提ＤＮＡ片段长度来说，ＣＴＡＢ法优
于ＤＮＡ　Ｋｉｔ法，而且 ＤＮＡ　Ｋｉｔ法的成本也较高。
ＣＴＡＢ?Ⅱ法是在２次抽提之间增加了一步加入ＣＴＡＢ沉
淀液的步骤，并在ＤＮＡ沉淀再溶解后，增加了再次抽
提，和二次沉淀的步骤，这样可以最大限度的将所提取
的ＤＮＡ与其它细胞内含物分开。提高了ＤＮＡ的纯度，
避免了蛋白多糖等物质将ＤＮＡ包裹，影响后续的酶切
试验。另外，多酚类物质会氧化生成一些褐色的非可溶
性物质与ＤＮＡ结合，在提取缓冲液中加入适量的抗氧
化剂能有效抑制多酚类物质氧化褐变。该研究中
ＣＴＡＢ法在原来方法基础上将裂解缓冲液中加入质量
分数为２％的ＰＶＰ有效防止了多酚类物质的氧化［１１－１２］。
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Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ＤＮＡ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓａｉｎｔｐａｕｌｉａ　ｉｏｎａｎｔｈａｆｏｒ　ＡＦＬＰ　Ｒｅａｃｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ
ＳＵＮ　Ｙｏｎｇ－ｊｉａｎ１，ＳＵＮ　Ｎｉｎｇ２，ＣＡＯ　Ｚｈｉ－ｐａｎ３，ＣＨＥＮ　Ｘｉａｏ－ｑｉａｎｇ２，ＺＨＡＮＧ　Ｎａｉ－ｎａｎ２，ＺＨＡＮＧ　Ｌｅｉ　２
（１．Ｔｉａｎｊｉｎ　Ｔｉａｎｓｈｉ　Ｃｏｌｅｇｅ，Ｔｉａｎｊｉｎ　３０１７００；２．Ｔｉａｎｊｉｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ　３００３８４；３．Ｔｉａｎｊｉｎ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｃｈｉｎｅｓｅ
Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｔｉａｎｊｉｎ　３０００２０）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｌｅａｖｅｓ　ａｎｄ　ｓｔｅｍｓ　ｏｆ　Ｓａｉｎｔｐａｕｌｉａ　ｉｏｎａｎｔｈａ　ａｓ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ，ｆｒｅｓｈ　ｔｉｓｓｕｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｄｒｙｉｎｇ　ｔｉｓｓｕｅ
ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｆｒｅｅｚｅ　ｄｒｙｉｎｇ　ｔｉｓｓｕｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，３ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｐｒｅ－ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｗｅｒｅ　ａｄａｐｔｅｄ，ａｌｓｏ　ＤＮＡ　Ｋｉｔ，ＣＴＡＢ－Ⅰ，ＣＴＡＢ－Ⅱ３
ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｗｅｒｅ　ａｄｏｐｔ，ｔｏ　ｃｏｍｐａｒｅ　ＤＮＡ　ｆｒａｇｍｅｎｔ　ｓｉｚｅ，ｐｕｒｉｔｙ　ａｎｄ　ｙｉｅｌｄ　ｔｈｒｏａｇｈ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ＤＮＡ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　Ｓａｉｎｔｐａｕｌｉａ　ｉｏｎａｎｔｈａ　ｗｈｉｃｈ　ｃｏｎｔａｉｎｅｄ　ｍｏｒｅ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ　ａｎｄ
ｍｏｉｓｔｕｒｅ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ＣＴＡＢⅡｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ　ｂｙ　ｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｙｉｎｇ　ｂｅｆｏｒｅ　ｔｅｓｔ，
ｎａｍｅｌｙ，ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｅｃｏｎｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｓｔｅｐｓ，ａｄｄｅｄ　ＣＴＡＢ　ｐｒｅｅｉｐｉｔａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ＤＮＡ　ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｅｄ．ＤＮＡ
ｒｅｃｅｉｖｅｄ　ｂｙ　ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ｔｅｍｐｌａｔｅ　ｆｏｒ　ＰＣＲ　ｉｎ　ｓｔｕｄｙ　ａｔ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｒｅｓｅａｒｃｈ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ＤＮＡ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；Ｓａｉｎｔｐａｕｌｉａ　ｉｏｎａｎｔｈａ；ＣＴＡＢ；ｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｙｉｎｇ；ＡＦＬＰ　ａｎａｌｙｓｉｓ
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