全 文 ：收稿日期:2008-04-19
基金项目:苏州大学医学发展基金(EE132609)
作者简介:黄荣华(1982-), 男 , 硕士研究生。研究方向:药
物制剂
唐丽华(1952-), 女 , 山东文登人 , 副教授 , 硕士
生导师 , 研究方向:中药新剂型与新技术。 E-
mail:tanglihua@suda.edu.cn
珍珠菜抗肿瘤有效成分的提取工艺优选
黄荣华 ,唐丽华 ,游本刚 ,张　
(苏州大学 药学院 , 江苏 苏州 215123)
摘　要　目的:优选珍珠菜中抗肿瘤活性成分的提取工艺。方法:分别以芦丁和齐墩果酸为对照品 ,采用紫外分光
光度法测定总黄酮和总皂苷含量 ,用 L9(34)正交设计法优化醇提工艺。结果:优化的提取工艺为 70%乙醇提取 3
次 , 第 1次 12倍量 ,第 2次 10倍量 , 第 3次 8倍量 ,每次 1.5 h。结论:优化的提取工艺简便易行 ,稳定可靠。
关键词　珍珠菜;紫外分光光度法;正交法;提取工艺
中图分类号:R284.2　　　文献标识码:A　　　文章编号:1006-9690(2009)02-0058-03
TheOptimizationofExtractionTechnologyofActiveIngredientsfor
Anti-tumorinLysimachiaclethroidesDuby
HuangRonghua, TangLihua, YouBengang, ZhangBen
(SchoolofPharmaceuticalScience, SooChowUniversity, Suzhou215123, China)
Abstract　Objective:Tooptimizetheextractiontechnicsofactiveingredientsforanti-tumorinLCD.
Methods:UsingUVspectrophotometrytodeterminethecontentoftotalflavonesandtotalsapponin.The
extractiontechnicswasoptimizedbytheothogonaltest.Results:Theoptimizedextractiontechnicswasto
use70% alcohol, 3times, 12quantity(1sttime), 10quantity(2ndtime), 8 quantity(3rdtime)and
1.5hourpertime.Conclusions:Theoptimizedextractiontechnicsissteadyandreliable.
Keywords　LysimachiaclethroidesDuby;UVspectrophotometry;orthogonaltest;extractiontechnics
　　珍珠菜为报春花科植物虎尾珍珠菜(Lysimachia
clethroidesDuby)的根或全草 ,味苦 、辛 ,性平 ,具清热
利湿 ,活血散瘀 、解毒消痈之功效 [ 1] 。文献报道珍
珠菜中含多种黄酮苷与皂苷 [ 2-4] ,其中从珍珠菜全
草中得到的黄酮苷和皂苷具有良好的抗肿瘤作用 ,
对人白血病 HL-60及 K562细胞 、小鼠肝癌 H22实
体瘤[ 5]以及小鼠 L615白血病[ 6]均有明显的抑制作
用 。本实验采用 L9 (34)正交设计法 [ 7-9]对珍珠菜
中有效成分提取工艺进行了优选。
1　仪器与试药
岛津 UV-2401PC紫外可见全波长扫描仪(日
本岛津公司), 752 -C紫外分光光度计(上海第三
分析仪器厂),电子分析天平(梅特勒 -托利多仪器
有限公司)。芦丁对照品(中国药品生物制品检验
所 ,批号:080 -9002),齐墩果酸对照品(中国药品
生物制品检验所 ,批号:080-9002),无水三氯化铝 、
香草醛 、冰醋酸 、高氯酸 、乙酸乙酯 、95%乙醇 、甲醇
等化学试剂均为分析纯。珍珠菜(饮片 ,安徽亳州
永刚饮片厂 ,经苏州大学药学院刘春宇教授鉴定为
珍珠菜全草)。
2　试验方法与结果
2.1　珍珠菜中总黄酮的含量测定
2.1.1　标准溶液的制备 　精密称取芦丁对照品
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第 28卷第 2期
2009年 4月 　　　　　　　　　　　　　 中 国 野 生 植 物 资 源ChineseWildPlantResources　　　　　　　　　　 　Vol.28 No.2Apr.2009
10.06 mg于 50 mL容量瓶中 ,以 95%乙醇溶解 ,定
容 ,配成 201.2 μg/mL的标准品溶液 ,冷藏保存备
用 。
2.1.2　最大吸收波长的确定　取芦丁对照品溶液
于 10mL容量瓶中 ,加入 10% AlCl3溶液 1 mL,以
95%乙醇定容至刻度 ,摇匀 ,分别在 200 ～ 600 nm波
长范围内进行紫外可见扫描 ,确定最大吸收波长为
405nm。
2.1.3　标准曲线的制备　精密量取对照品溶液
0.5, 1.0 , 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0 mL于 25 mL
容量瓶中 ,用 70%乙醇溶解 ,定容。过滤后取 1 mL
滤液于 10mL容量瓶中 ,加入 10%AlCl3溶液 1mL,
用 95%乙醇定容至刻度 ,摇匀 ,于紫外分光光度计
下测定其吸收度 ,以吸收度 A对浓度 C作最小二乘
法回归 ,得标准曲线方程为:C=39.972A-0.288 3,
r=0.999 9(n=5),线性范围为 4.025 ～ 32.195 μg/
mL,质量浓度与吸收度值的线性关系良好 。
2.1.4　测定方法　精密量称取干浸膏 5 mg于 25
mL量瓶中 ,加入 10%三氯化铝溶液 1 mL显色 30
min,再加入乙醇 (浓度同上),稀释至刻度 , 摇匀 。
以未加三氯化铝的供试品液作为空白对照 ,在 405
nm处测定吸收度 ,由标准曲线求得浸膏中总黄酮的
含量。
2.2　珍珠菜中总皂苷的含量测定
2.2.1　标准溶液的制备　精密称取齐墩果酸对照
品 5.12 mg于 50mL容量瓶中以色谱甲醇溶解 ,定
容至刻度 ,得浓度为 0.102 4mg/mL的对照品溶液 ,
冰箱冷藏保存备用。
2.2.2　香草醛 -冰醋酸溶液的制备　精密称取香
草醛 5.0 g,加入 100mL冰醋酸溶液溶解 ,得到 5%
香草醛 -冰醋酸溶液 ,冰箱冷藏备用 。
2.2.3　最大吸收波长的确定　取齐墩果酸对照品
溶液适量 ,至 1支具塞试管中 ,分别于 70 ℃水浴加
热挥干溶剂 ,试管中均加入新配制的 5%香草醛 -
冰醋酸溶液 0.2 mL,高氯酸 0.8 mL,旋涡混匀 ,置
70 ℃水浴加热 15 min,水流冷却后 ,加入乙酸乙酯
4.0mL,旋涡混匀 ,在 200 ～ 600nm波长之间进行紫
外可见扫描 ,确定 550nm作为样品溶液中皂苷类化
合物的测定波长 。
2.2.4　标准曲线的制备　精密吸取齐墩果酸对照
品溶液 0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 mL于试管中 , 70 ℃
水浴挥干溶剂 ,于每个试管中加入新配制的 5%香
草醛 -冰醋酸溶液 0.2 mL,高氯酸 0.8 mL,旋涡混
匀 ,置 70℃水浴加热 15min,流水冷却后 ,加入乙酸
乙酯 4.0 mL;旋涡混匀 ,取中浓度(0.4 mL)样品于
200 ～ 800 nm波长下扫描确定空白溶液无吸收 ,然
后再在最大吸收波长测定各试管中溶液的吸收值。
以吸收度 A对浓度 C作最小二乘法回归 ,得标准曲
线方程为:C=24.592A+0.4915, r=0.999 7(n=
5),线性范围:2.048 ～ 16.384 μg/mL,质量浓度与
吸收度值的线性关系良好。
2.2.5　含量测定方法　精密量称取干浸膏 5 mg于
25mL量瓶中 ,用甲醇溶解 ,定容至刻度 。取 0.5mL
滤液至 1支具塞试管中 ,于 70 ℃水浴加热挥干溶
剂 ,试管中均加入新配制的 5%香草醛 -冰醋酸溶
液 0.2 mL,高氯酸 0.8 mL,旋涡混匀 ,置 70 ℃水浴
加热 15min,水流冷却后 ,加入乙酸乙酯 4.0 mL,旋
涡混匀 ,在 550 nm测定吸收度 ,根据标准曲线方程
计算含量 。
2.3　提取工艺的优选
2.3.1　正交试验设计　本试验选择了乙醇浓度 、乙
醇用量 、提取时间及提取次数 4个因素 ,按 L9(34)
表条件对珍珠菜进行总黄酮的提取 ,见表 1。
表 1　因素水平表
水平 因素A醇浓度 /% B乙醇量(倍) C提取时间 /h D提取次数
1 60 8 1.0 1
2 70 10 1.5 2
3 80 12 2.0 3
2.3.2　样品的提取　取珍珠菜药材 60 g数份 ,按
L9(34)正交试验条件进行提取 ,提取液回收乙醇 ,浓
缩成浸膏 ,真空干燥即得 。
2.3.3　浸膏的含量测定　参见 2.1.4节和 2.2.5
节方法测定 ,分别计算总黄酮含量和总皂苷含量。
结果见表 2。
2.2.4　正交试验结果分析　根据以上测定结果 ,以
提取的黄酮和皂苷总量为评判指标 ,采用直观分析
法进行比较 ,结果见表 3。
—59—
第 2期　　　　　　　　　　　　　黄荣华 , 等:珍珠菜抗肿瘤有效成分的提取工艺优选 　　　　　　　　　　　　　
表 2　含量测定结果
试验号 浸膏总重/g
总黄酮含量
/%
总皂苷含量
/%
活性成分总量
/g
1 4.56 8.54 26.80 1.61
2 9.69 7.83 20.32 2.72
3 12.48 7.61 18.39 3.24
4 10.40 7.67 21.95 3.08
5 6.96 9.05 25.38 2.39
6 9.48 8.76 22.79 2.99
7 8.47 9.98 25.25 2.98
8 9.14 8.96 22.87 2.90
9 6.28 10.35 23.45 2.12
表 3　正交试验及试验结果
项目 因素A B C D
活性成分
总量 /g
1 1 1 1 1 1.61
2 1 2 2 2 2.72
3 1 3 3 3 3.24
4 2 1 2 3 3.08
5 2 2 3 1 2.39
6 2 3 1 2 2.99
7 3 1 3 2 2.98
8 3 2 1 3 2.90
9 3 3 2 1 2.12
K1 2.523 2.557 2.500 2.040
K2 2.820 2.670 2.640 2.897
K3 2.667 2.783 2.870 3.073
R 0.297 0.226 0.370 1.033
　　根据以上数据结果分析 ,各因素的重要性依次
为 D>C>A>B,各因素水平以 D3C3A2B3为最佳 ,
考虑到实际工作中的需要 ,选择珍珠菜有效成分提
取优化工艺条件为 , 70%乙醇提取 3次 ,第 1次 12
倍量 ,第 2次 10倍量 ,第 3次 8倍量 ,每次 1.5 h。
2.2.5　验证试验　按照上述优化的工艺进行 3次
重复试验 ,结果见表 4。
表 4　验证试验结果
序号 浸膏总重/g
总黄酮含量
/%
总皂苷含量
/%
活性成分总量
/g
1 11.29 9.14 21.59 3.47
2 11.48 8.91 20.68 3.39
3 11.14 9.24 21.34 3.41
平均 11.30 9.09 21.20 3.42
RSD% 1.51 1.86 2.21 1.21
　　由验证试验结果可知 ,提取出的活性成分总量
平均为 3.42 g, RSD%为 1.21%,说明由正交方法优
选出的工艺条件稳定 、可行。
3　讨　论
通过正交试验 ,对提取工艺进行了筛选 ,正交试
验结果虽以 D3C3A2B3为最佳 ,但乙醇浓度 、乙醇用
量及提取时间对工艺的影响并无显著性差异 ,从试
剂 、节约能源等方面考虑 ,因而选择 70%乙醇提取 3
次 ,第 1次 12倍量 ,第 2次 10倍量 ,第 3次 8倍量 ,
每次 1.5h为实际应用的工艺条件 ,最后验证试验
结果表明 ,优化后的工艺稳定可靠 。
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