全 文 :菌 物 系 统 22(3):,436~440 2003
Mycosystema
猴头菌单核菌丝厚垣孢子的观察*
张筱梅 1 张焕英 1 张 渊 1,2
(1保定师范专科学校 保定 071051; 2河北大学生命科学院 保定 071051)
摘 要: 多次培养发现猴头菌单、双核菌丝均可形成厚垣孢子。厚垣孢子纺锤形,多端生、中生,
大小 6~8×8~10µm,其中单核厚垣孢子略小。试验表明,2~4℃猴头菌厚垣孢子的保藏期达 7年
以上;缺氧保藏效果好,30~52h萌发,萌发率 32%~54%。
关键词: 保藏, 缺氧条件, 萌发率
中图分类号:Q939.5 文献标识码:A 文章编号:1007-3515(2003)03-0436-0440
猴头菌Hericium erinaceus (Bull.)Pers.是一种夏秋季节发生的木腐真菌。其生活史中双核菌丝
可形成厚垣孢子,单核菌丝是否形成厚垣孢子未见报道(杨新美,1988;张筱梅,1995)。在十年
的猴头菌育种研究中,笔者发现猴头菌单核菌丝亦可形成厚垣孢子,且孢子的形态、大小、产生
条件与双核厚垣孢子比较接近,现将观察研究结果报导如下。
1 材料与方法
1.1 供试菌株
猴头菌 He-1引自河北省微生物研究所;U13由本室选育保藏。
1.2 培养基
母种培养基(%):玉米碎粒 10,麦麸 2,葡萄糖 1,琼脂 2。栽培种培养基(%):棉籽皮 88,
麦麸 10,红糖 1,石膏 1,料水比 1:1.3。
1.3 单核与双核菌丝的分离
采成熟头潮子实体于铺纸条的无菌罐头瓶中,25℃培养 2d,取出菇体,孢子保藏于 4℃冰箱。
取纸条孢子制成原液,25℃浸泡 6h,镜检(160×)使每视野 30~40个孢子,制备梯度孢子悬液,
各取 10-2、10-3稀释度 0.2ml涂布平板(加入链霉素 30µg/ml), 25℃培养 10~12d挑取单孢子,经
三次转管镜检,无锁状联合结构初定为单核菌丝。
各单核菌丝成对接入斜面(相距 1cm)25℃培养 16~20d,经三次转管镜检具锁状联合结构
者确定为双核菌丝。各菌株分别取 10组双核菌丝及其配对的 20个亲和单核菌丝进行斜面培养,
测定生长量及生长状态。重复三次。
1.4 厚垣孢子形态特征观察
分别将各株 10组双核菌丝及其配对的亲和单核菌丝接入平板(直径90mm),25℃培养 15d,
按 35~40℃角插入盖玻片继续培养 10d,取插片观察厚垣孢子大小(取 50个的平均值)、形状、
数量及着生情况(取 20个视野的平均值)。
收原稿日期:2002-10-01,收修改稿日期:2002-12-12
DOI:10.13346/j.mycosystema.2003.03.019
3期 张筱梅等:猴头菌单核菌丝厚垣孢子的观察 437
1.5 厚垣孢子的萌发
分别刮取各株斜面单核或双核菌丝体于 10ml无菌水试管中,反复振荡,过滤除去菌丝,滤
液在 1000r/min离心 2min,取上清液 3000r/min离心 5min,沉淀即为厚垣孢子,稀释孢子液记数,
取 0.2ml孢子液涂布平板,重复三次,25℃培养,记录萌发时间、萌发率,以芽管长度达到厚垣
孢子一半以上记为萌发。
1.6 出菇试验
各株双核菌丝及其配对的亲和单核菌丝分别接入栽培袋,每袋干料 300g,25℃避光培养,
重复三次,记录出菇情况。
2 结果与分析
2.1 单核交配率
经三次培养镜检,选出He-1无锁状联合单核菌株 41个,菌丝配对 82组,发生质配 12组,
交配亲和率 14.6%;选出U13无锁状联合单核菌株 63个,配对 157组,其中质配 29组,交配率
18.5%。
2.2单核与双核菌丝生长情况比较
表 1 猴头菌单双核菌丝生长情况比较
Table 1 Comparision of growth between monokaryon mycelial and amphinuclei mycelial of Hericium Erinaceus
菌丝 Mycelial 菌株 Strain 类型 Type
日长速 Growth rate (mm) 直径 Diameter (?m) 形态 Form
菌苔
Lawn
单核
Monokaryon
1.68 1.71~2.96 较直,分枝少
Straight,,less ramification
绒状, 细密
Fluffy , dense
He-1
双核
Amphinuclei
2.31 2.59~3.87 弯曲,分枝多
Bend, more ramification
线绒状
Tready
单核
Monokaryon
1.79 1.89~2.94 较直,分枝少 Straight, less
ramification
绒状, 细密
Fluffy, dense
U13
双核
Amphinuclei
2.87 2.36~4.02 弯曲,分枝多Bend, more
ramification
线绒状
Tready
观察发现,各单核菌丝直径 1.7~3.0µm,细胞壁较薄,菌丝纤细、较直,分枝少,无锁状联
合结构,日长速较慢在 1.68~1.79mm (表 1;图 1,A~B);双核菌丝直径 2.3~4.0µm,壁较厚菌丝
较粗,弯曲度大,分枝多,具锁状联合结构,日长速较快,为 2.31~2.87mm(图 1, C)。He-1和
U13菌丝之间差异不明显。
2.3 单核与双核菌丝厚垣孢子萌发的比较
试验表明,猴头菌各株单双核厚垣孢子在2~4 ℃冰箱保藏0~7年均可萌发生长 (王革,1998),
随保藏期增加萌发时间延长,萌发率降低。其中保藏方式对萌发影响显著,2~7年试管胶塞封口
效果较好,各保藏期差异显著,保藏 2周,24h萌发,萌发率 74%~85%,保藏 2年萌发率迅速
降至 15%~18%,萌发时间延至 48~52h,保藏 7年,120~144h萌发,萌发率仅 2%~5%(表 2)。
438 菌 物 系 统 22卷
试验发现,孢子浓度高,萌发率亦高;相同保藏方式,一般双核较单核厚垣孢子萌发期短,萌发
率高。菌株 U13与 He-1厚垣孢子萌发及保藏情况相近。
表 2 保藏期及保藏方式对 He-1厚垣孢子萌发的影响
Table 2 The effect of preserve time and method on the germination of chlamydospore
单核厚垣孢子
Monokaryon chlamydospore
双核厚垣孢子
Amphinuclei chlamydospore
2~4℃保藏期
Preserve time
试管封口方式
Seal method of
test tube 萌发率(%)
Germination rate
萌发时间 (h)
Germination time
萌发率 (h)
Germination time
萌发时间 (%)
Germination rate
2 周
2 weeks
棉塞 Cotton plug 73.8 24 84.7 24
53.2 32 54.8 30 2 年
2 years
胶塞 Rubber plug
棉塞 Cotton plug
14.8 52 17.5 48
35.2 4.9 51.3 46 5 年
5years
胶塞 Rubber plug
棉塞 Cotton plug
46 120 6.1 96
31.6 52 46.0 48 7 年
7 years
胶塞 Rubber plug
棉塞 Cotton plug
2.3 144 5.4 120
2.4 单核与双核菌丝厚垣孢子形态特征的比较
镜检发现,各株单核厚垣孢子大小在 6~7×8~9µm之间(表 3),呈纺锤形,多着生于菌丝顶
端,部分生于菌丝中间,640×镜检单核气生菌丝每视野约有 0~3个厚垣孢子。各株双核厚垣孢子
稍大一般 7~8×9~10µm,双核厚垣孢子在菌丝上着生方式多样,有端生,中生和串生。640× 镜
检双核气生菌丝每视野约有 1~6 个厚垣孢子。各株单双核厚垣孢子形态相近,均为纺锤形(图
1~2)。观察发现各株单双核气生菌丝(插片)的厚垣孢子数均较少,匍匐菌丝(贴培养表面生长)
的厚垣孢子数均较多,640×镜检,匍匐菌丝每视野达 10~40个,通常随培养时间延长单、双核厚
垣孢子数明显增多。
2.5 厚垣孢子的产生
猴头菌厚垣孢子产生与环境条件直接有关,试验表明,猴头菌在 25℃营养及水分空气适宜
条件下,随菌丝生长伸长,一般 5~10d可产生厚垣孢子,基质较干产孢子时间延长 8~20d,
2~4℃冰箱保藏 30~60d仍可产生厚垣孢子。
2.6 出菇验证
栽培表明各株交配的 10组双核菌丝均可出菇(20~25℃培养 20~60d),但子实体产量,形状
有所不同;各株配对的 20个单核菌丝栽培期内(20~25℃培养 90d)均未出菇。由此证实试验选
用的单双核菌丝确为猴头菌菌丝。
大量观察发现厚垣孢子多的菌株菌丝生长一般较慢,菇产量偏低。因此猴头菌育种中检测厚
3期 张筱梅等:猴头菌单核菌丝厚垣孢子的观察 439
垣孢子数量可作为衡量高产菌株的一项指标。
表 3 猴头菌单双核厚垣孢子形态特征比较
Table.3 Compriasion of morphological characters between monokaryon chlamydospore and amphinuclei chlamydospore of
Hericium Erinaceus
厚垣孢子(µm)
Chlamydospore
菌株 strain
类型
Type 直径
Diameter
长度
Length
形状
Shape
数量 (气生菌丝)个/视野
(640×)
Number (aerial mycelium)
unit/view
单核 monokaryon 5.78 7.82 纺锤形 spindle-shaped 0~2
He-1
双核 amphinuclei 7.35 9.54 纺锤形 spindle-shaped 1~6
单核 monokaryon 6.81 9.00 纺锤形 spindle-shaped 0~3
U13
双核 amphinuclei 7.76 9.75 纺锤形 spindle-shaped 1~5
图 1 猴头菌丝及其厚垣孢子,
A. 单核菌丝 25 号, ×200; B. 单核菌丝 05 号, ×400;C. 菌株 He-1(双核菌丝)×200;
D.配对菌丝 17-25 号×200
Fig. 1 Mycelial and chlamydospore of Hericium Erinaceus
A. Monokaryon mycelial no. 25, ×200;B. Monokaryon mycelial no. 05, ×400; C. Amphinuclei mycelial (He-1) ×200;
D. Mating mycelial 17-25 号×200
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3 小结
3.1 猴头菌单、双核菌丝均可形成厚垣孢子,由厚垣孢子可构成猴头菌生活史中的两个无性小循
环,即单核厚垣孢子 —单核菌丝和双核厚垣孢子双核菌丝,由此丰富了猴头菌生活史的内容,
亦为猴头菌育种提供了更多的选择途径。
3.2 显微观察猴头菌单、双核厚垣孢子均为纺锤形,可在菌丝上端生、中生、串生。通常双核孢
子较大在 7~8×9~10µm,单核孢子略小在 6~7×8~9µm。
3.3 猴头菌单、双核厚垣孢子在 2~4℃保藏期达 7年以上,其中试管胶塞封口效果较好,孢子萌
发快存活率高,生活力强。实际工作中利用厚垣孢子抗干燥、无氧的特性,可防止菌种退化,进
行长期保藏。
[REFERENCES]
Yang XM, 1988. Cultivation of edible fungi of China. Beijing:China Agricultural Press. 475~477(In Chinese with English abstract)
Zhang XM, 1995.A preliminary study on the basidiospore-induced breeding of Hericium erinaceus.Edible fungi of China,
14 (4): 20~21(In Chinese with English abstract)
Wang G, Zheng XP, Lu JY, Li TF, 1998. Survival of chlamydospores and mycelia of Phytophthora nicotianae in soil. Journal of
Nanjing Agricultural University, 21 (1): 41~45(In Chinese with English abstract)
[附中文参考文献]
杨新美, 1988. 中国食用菌栽培学. 北京, 中国农业出版社.476~477
张筱梅, 1995. 猴头菌单孢诱变育种初报.中国食用菌, 14 (4): 20~21
王革, 郑小波, 陆家云 , 李天飞 , 1998. 烟草黑胫病菌厚垣孢子和菌丝体在土壤中的存活状态 .南京农业大学学报 ,
21 (1 ) : 41~45
OBSERVATION OF CHLAMYDOSPORES PRODUCED FORM
HERICIUM ERINACEUS MONOCARYOTIC MYCELIUM
ZHANH Xiao-Mei1 ZHANG Huan-Ying1 Zhang Yuan1,2
(1Bao Ding Teacher’s College, Bao Ding 071051; 2 Biology Department Heibei University, Bao Ding 071051)
ABSTRICT: Chlamydospores produced form monocaryotic mycelia of Hericium erinaceus were observed. The spores were
spindle-shaped, 6~8×8~10µm in size, and somewhat smaller than those of dicaryotic mycelium. Preservation
experiment indicated that the chlamydospores could be preserved for more than seven years, and non-oxygen situation a
good effect for preservation. 30~52 h were needed for germination of the chlamydospores ,and the germination rate was
32%~54%.
KEY WORDS: Preservation, non-oxygen situation, germination rate