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尖顶羊肚菌菌丝体水提液对实验型胃溃疡的作用



全 文 :Mycosystema
菌 物 学 报 15 March 2011, 30(2): 325-330

jwxt@im.ac.cn
ISSN1672-6472 CN11-5180Q
©2011 Institute of Microbiology, CAS, all rights reserved.





基金项目:国家农业产业技术体系四川食用菌创新团队精深加工研究岗位建设项目(川农业[2009]75 号);国家农业产业技术体系药用菌栽培岗位
*Corresponding author. E-mail: lx1443cn@sina.com
收稿日期: 2010-11-03, 接受日期: 2011-01-25

尖顶羊肚菌菌丝体水提液对实验型胃溃疡的作用
高明燕 1,2 郑林用 3 余梦瑶 2 魏巍 2 罗霞 2* 王世宽 1
1四川理工学院生物工程学院 自贡 643000
2四川省中医药科学院中药细胞与分子生物学实验室 成都 610041
3四川省农业科学院 成都 610066


摘 要:研究尖顶羊肚菌菌丝体水提液对 4 种实验型胃溃疡模型的治疗作用。以大鼠幽门结扎致胃溃疡为模型,测定各组胃
粘膜损伤指数、胃液分泌量和胃酸浓度;以大鼠乙酸烧灼、小鼠乙醇致胃粘膜损伤和小鼠水浸应激胃溃疡为模型,分别测定
溃疡面积。结果表明尖顶羊肚菌菌丝体水提液可以不同程度抑制胃酸的分泌,减少胃液量,减少溃疡面积,促进溃疡面积的
愈合,因此尖顶羊肚菌菌丝体水提液具有抗实验型胃溃疡的作用。
关键词:尖顶羊肚菌,幽门结扎,乙酸灼烧,乙醇,水浸应激,抗胃溃疡

Effect of Morchella conica mycelial water extract on experimental
gastric ulcer
GAO Ming-Yan1, 2 ZHENG Lin-Yong3 YU Meng-Yao2 WEI Wei2 LUO Xia2* WANG Shi-Kuan1
1Department of Biotechnology, Sichuan University of Science and Engineering, Zigong 643000, China
2Laboratory of Cellular and Molecular Biology, Sichuan Academy of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610041, China
3Sichuan Academy of Agricultural Sciences, Chengdu 610066, China
Abstract: To investigate the effects of water extract from Morchella conica mycelium on four kinds of experimental gastric ulcer
models, four kinds of model animals with experimental gastric ulcer were established. The gastric ulcer index, gastric juice volume
and acidity were measured in pyloric ligation models. The gastric ulcer index was measured in acetic acid-buming, alcohol and
water-immersion-restraint stress of gastric ulcer models. The results show that different doses of Morchella mycelium water extract
inhibit gastric acid secretion, reduce gastric juice acidity and promote healing of ulcer. Therefore, Morchella mycelium water extract
possesses the inhibitory and protective effect on experimental gastric ulcer.
Key words: Morchella conica, pyloric ligation, acetic acid-buming, alcohol, water-immersion-restraint stress, anti-gastric ulcer
DOI:10.13346/j.mycosystema.2011.02.023
326 Mycosystema
http://journals.im.ac.cn/jwxtcn
羊肚菌Morchella spp.隶属子囊菌门Ascomycota、
盘菌纲 Discomycetes、盘菌目 Pezizales、羊肚菌科
Morchellaceae,因其菌盖表面呈许多小凹坑,外观
极似羊肚而得名(杨芳等 2007)。《本草纲目》中
记载羊肚菌性平、味甘,能益肠胃、化痰理气,是
一种野生名贵食药用真菌之一。常食可以提高机体
免疫力(张利平等 2009)、调节心血管系统、抗病
毒、抗菌(Mau et al. 2004;Nitha & Janardhanan
2008;李华等 2004)、抗寄生虫、保肝护肝(孙玉
军等 2008)、抗氧化、抗肾毒性、抗疲劳(高原和
刘海斌 2008)、抗病毒、抑制肿瘤(陈彦等 2008)
等作用。但是对抗胃溃疡的作用还没有报道。本试
验通过 4 种实验型胃溃疡动物模型的复制,初步研
究了羊肚菌菌丝体水提液对胃粘膜的保护作用。
1 材料与方法
1.1 材料、试剂和仪器
1.1.1 材料:尖顶羊肚菌 Morchella conica Pers.:
M1由四川中医药科学院中药细胞与分子生物学实
验室提供。
1.1.2 动物:Wistar 大鼠(由四川省中医药科学院动
物室提供),180-220g,雌雄各半,饲养于 SPF 级
动物室,合格证号:SCXK(川)2005-19;昆明种
小鼠(由四川省中医药科学院动物室提供),18-
22g,雌雄各半,饲养于 SPF 级动物室,合格证号:
SCXK(川)2005-19。
1.1.3 试剂:冰醋酸、甲醛、乙醚均为市场分析纯;
法莫替丁片(重庆青阳药业有限公司),批号为
091001。
1.1.4 仪器:离心机 LDZ5-2(北京京立离心机有限
公司);SY-1000E 多用途恒温超声提取机(北京弘
祥隆生物技术开发有限公司)。
1.2 方法
1.2.1 尖顶羊肚菌菌丝体水提液的制备:使用前将
保存菌种转入新鲜斜面活化,25℃ 1 周;将活化的
斜面琼脂块(1cm2)接入液体种培养基中,25℃、
150r/min,摇床培养 7d。液体种子按体积比 10%接
入发酵培养基中(25℃、150r/min,7d)。菌丝体冷
冻干燥后,以 20 倍、15 倍、10 倍、10 倍蒸馏水在
功率 800W,超声提取 4 次,每次 30min,超声/间
隔 5/5s。将 4 次提取液混合,60℃减压浓缩至
0.1g/mL、0.2g/mL、0.3g/mL 和 0.08g/mL、0.15g/mL、
0.22g/mL 生药量,-20℃保存。
1.2.2 尖顶羊肚菌菌丝体水提液对大鼠幽门结扎胃
粘膜损伤的作用:参照余良主等(2007)的方法。
40 只大鼠雌雄各半,按体重随机分为 5 组,即模型
组、法莫替丁组、羊肚菌菌丝体水提液低、中、高
剂量组、大鼠自由饮食,灌胃给药每天一次,每组
给药量 1mL/100g,模型组给等体积的水,共连续
15d。给药第 13 天开始禁食不禁水,禁食 48h 后即
第 15 天灌胃 1h 后,用乙醚麻醉,局部用碘伏消毒,
打开腹腔,结扎幽门。术后 18h 解剖取胃,收集胃
液,向胃腔内注射 1%福尔马林溶液 8mL,将胃浸
入 1%福尔马林溶液中,10min 后沿胃大弯剪开胃,
观察前胃部溃疡发生的情况,溃疡程度的评价可以
计数前胃部溃疡的面积,并以其总和大小分段折算
成溃疡指数,分为 5 个溃疡等级。将收集的胃液移
至刻度离心管中,记录胃液总量。并于低温离心机
1,500r/min 离心 10min,取上清胃液 1mL,加酚红
指示剂 1 滴,用 0.01mol/L NaOH 滴定,直至胃液
先呈黄色后转为红色 2s 内不消失为终点,计算耗去
的 NaOH 量即总酸度。
溃疡面积(mm2)1-12 13-25 26-37 38-50≥50 或穿孔
溃疡指数 1 2 3 4 5
溃疡抑制率=
模型组溃疡指数-给药组溃疡指数
模型组溃疡指数 ×100%
1.2.3 羊肚菌菌丝体水提液对大鼠乙酸灼烧型胃溃
疡的作用:参照傅继华等(2006)的方法。40 只大
鼠,雌雄各半,禁食 24h 后,乙醚麻醉后,打开腹
腔,将胃轻轻拉出,将一内径为 5mm、长 30mm 的
玻璃管垂直放置于胃体部浆膜面上,向玻璃管中注
入冰醋酸 0.2mL,1.5min 后用棉球蘸出冰醋酸,并
用生理盐水冲洗,以大网膜包裹烧灼部位,缓缓将
胃送入腹中,分层缝合,术后细心喂养。术后第 2
日将动物随机分成 5 组,每组 8 只,分别为模型组,
阳性药法莫替丁组,羊肚菌菌丝体水提液低、中、
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菌物学报
高剂量组。各组给药剂量同 1.2.2,每天给药 1 次,
连续 10d。末次给药后 1h 放血处死动物,剖腹取胃,
并将胃固定于 1%甲醛中,测定溃疡面积,观察溃
疡愈合程度,计算溃疡抑制率。
溃疡抑制率=
模型组溃疡面积-给药组溃疡面积
模型组溃疡面积 ×100%
1.2.4 羊肚菌菌丝体水提液对乙醇致小鼠胃溃疡的
作用:参照马燕等(2005)的方法。昆明种小鼠 32
只,雌雄各半,随机分 4 组,即模型组、羊肚菌菌
丝体水提液低、中、高剂量组,每组 8 只,给药组
给 0.1mL/10g 的不同剂量的羊肚菌菌丝体水提液,
模型组给等量的自来水,连续灌胃 10d,实验前禁
食不禁水 24h,试验当天灌胃受试样品 30min 后各
组给予 95%乙醇 0.1mL/10g,1h 后处死动物取胃以
1%福尔马林溶液固定,损伤程度以 Guth 计数法表
示,溃疡抑制率同 1.2.2。
1.2.5 羊肚菌菌丝体水提液对小鼠水浸应激胃溃疡
的作用:参照徐明等(2006)的方法。昆明种小鼠
40 只,雌雄各半,随机分为 5 组,即模型组,法莫
替丁组,羊肚菌菌丝体水提液低、中、高剂量组,
各组给药剂量同 1.2.4,每天给药 1 次,共连续 15d。
实验前禁食 24h,自由饮水,然后将动物装入特制
的铁丝笼中,垂直浸入 23±0.5℃水中,浸入深度为
小鼠剑突处,24h 取出,颈椎脱位处死,打开腹腔,
结扎幽门和贲门,并经胃壁向胃腔注射 1%的福尔
马林溶液 2mL,将胃取出浸入福尔马林溶液中,
30min 后沿胃大弯剪开,计算胃部出现的溃疡面积。
溃疡抑制率同 1.2.3。
1.2.6 统计方法:各组实验数据以均数±标准差
( x ±s)表示,应用统计软件 SPSS13.0 进行分析,
多组均数比较采用 ANVOA 检验,p<0.05 为差异
显著。
2 结果与分析
2.1 尖顶羊肚菌菌丝体水提液对大鼠幽门结扎胃溃
疡的影响
在前胃部肉眼可见黑褐色出血斑点或呈条块
状,有的深达肌层,表面粘膜皱褶消失;羊肚菌菌
丝体水提液与阳性药法莫替丁组仅见疏散的出血
点和小出血斑块。经过数据统计,与模型组相比,
羊肚菌菌丝体水提液能有效降低大鼠胃液量和总
酸排出量,降低幽门结扎法所致大鼠胃溃疡指数
(表 1),表明羊肚菌菌丝体水提液对幽门结扎胃溃
疡模型有明显的保护作用。
表 1 尖顶羊肚菌菌丝体水提液对大鼠幽门结扎胃溃疡的影响( x ±s)
Table 1 Influence of water extract from Morchella conica mycelium on the gastric ulcer induced by pylorus ligation in rat ( x ±s)
组别
Group
胃液量(mL)
Gastric juice volume (mL)
总酸度(mmol/L)
Total acidity (mmol/L)
溃疡指数
Ulcer index
抑制率(%)
I (%)
模型组
Control group
9.375±1.09 9.4±2.559 4.833±0.372 0
法莫替丁组 4.3mg/kg
Famotidine group 4.3mg/kg
4.325±1.474** 5.5±0.816* 1.667±0.745** 65.5
低剂量组 0.8g/kg
Low dose 0.8g/kg
8.325±2.052 5.4±1.573* 4.667±0.471 3.4
中剂量组 1.5g/kg
Middle dose 1.5g/kg
6.133±2.756* 5.25±1.303* 2.5±0.763* 48.2
高剂量组 2.2g/kg
High dose 2.2g/kg
4.933±2.094 6.6±1.073 3.5±1.118 27.6
注:n=8,与模型组相比**p<0.01,*p<0.05.
Note: n=8, **p<0.01, *p<0.05 compared with control.
328 Mycosystema
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2.2 尖顶羊肚菌菌丝体水提液对乙酸灼烧胃溃疡的
影响
肉眼观察溃疡形态,模型组可见典型的圆形或
椭圆形胃溃疡,周围隆起,中间凹陷,且溃疡底部
覆盖有灰白色炎症坏死渗出物;而羊肚菌菌丝体水
提液组伤口紧缩,有不同程度的愈合,愈合的溃
疡,周围稍有隆起,表面红润,可见有放射状细
纹。羊肚菌菌丝体水提液低、中、高剂量能使大鼠
乙酸灼烧胃溃疡的溃疡指数明显降低,表明羊肚菌
水提液对乙酸灼烧胃溃疡模型有明显的保护作用
(表 2)。
表 2 尖顶羊肚菌菌丝体水提液对乙酸灼烧胃溃疡的影响
( x ±s)
Table 2 Influence of water extract from Morchella conica mycelium on
the gastric ulcer induced by acetic acid in rat ( x ±s)
组别
Group
溃疡面积(mm2)
Ulcer index (mm2)
抑制率(%)
I (%)
模型组
Control group
24.141±3.693 0
法莫替丁组 4.3mg/kg
Famotidine group 4.3mg/kg
10.851±2.548** 55.05
低剂量组 0.8g/kg
Low dose 0.8g/kg
7.667±1.032* 68.24
中剂量组 1.5g/kg
Middle dose 1.5g/kg
4.994±0.983** 79.31
高剂量组 2.2g/kg
High dose 2.2g/kg
3.184±0.689** 86.81
注:n=8,与模型组相比**p<0.01,*p<0.05.
Note: n=8, **p<0.01, *p<0.05 compared with control.
2.3 尖顶羊肚菌菌丝体水提液对乙醇致小鼠胃溃
疡的影响
肉眼可见乙醇致胃溃疡损伤在胃粘膜腺区。模
型组粘膜呈红粉色,腺胃部红肿、充血,并有点状
和长短不一的条索状出血及粘膜糜烂;羊肚菌菌丝
体水提液组小鼠胃黏膜红肿、充血程度明显减轻,
可见点状和少量条索状出血。羊肚菌水提液的高、
中、低剂量能明显减轻乙醇致小鼠急性胃粘膜损伤
(p<0.05),表明羊肚菌水提液对乙醇致小鼠急性
胃粘膜损伤模型有明显的保护作用(表 3)。
表 3 尖顶羊肚菌菌丝体水提液对乙醇致小鼠胃溃疡的影
响( x ±s)
Table 3 Influence of water extract from Morchella conica mycelium on
the gastric ulcer induced by ethanol in mice ( x ±s)
组别
Group
溃疡指数(分)
Ulcer index (Score)
抑制率(%)
I (%)
模型组
Control group
55.11±13.84 0
低剂量组 1.0g/kg
Low dose 1.0g/kg
39.33±8.90* 28.6
中剂量组 2.0g/kg
Middle dose 2.0g/kg
31.44±5.70* 61.1
高剂量组 3.0g/kg
High dose 3.0g/kg
28.67±9.10** 47.9
注:n=8,与模型组相比**p<0.01,*p<0.05.
Note: n=8, **p<0.01, *p<0.05 compared with control.
2.4 尖顶羊肚菌菌丝体水提液对水浸应激胃溃疡的
影响
肉眼可见水浸应激胃粘膜损伤小鼠腺胃部点
状或条状褐色出血点。羊肚菌菌丝体水提液组和阳
性药法莫替丁组可明显降低出血等症状。羊肚菌菌
丝体水提液低、中、高剂量能使水浸应激胃溃疡指
数降低,表明羊肚菌水提液对水浸应激胃溃疡模型
有明显的保护作用(表 4)。
表 4 尖顶羊肚菌菌丝体水提液对水浸应激胃溃疡的影响
( x ±s)
Table 4 Influence of water extract from Morchella conica mycelium on
the gastric ulcer induced by water immersion stress in mice ( x ±s)
组别
Group
溃疡面积(mm2)
Ulcer index (mm2)
抑制率(%)
I (%)
模型组
Control group
32.556±8.110 0
法莫替丁组 6.0mg/kg
Famotidine group 6.0mg/kg
16.730±3.770** 48.7
低剂量组 1.0g/kg
Low dose 1.0g/kg
17.556±5.897** 46.1
中剂量组 2.0g/kg
Middle dose 2.0g/kg
17.000±5.874** 47.8
高剂量组 3.0g/kg
High dose 3.0g/kg
14.222±3.528** 56.3
注:n=8,与模型组相比**p<0.01.
Note: n=8, **p<0.01 compared with control.
Vol.30 No.2 329
菌物学报
3 讨论
胃溃疡是临床上常见的多发病之一,其发病率
高达 10%左右,其原因是由于胃粘膜受到攻击因子
(如胃蛋白酶、胃酸、幽门螺旋杆菌等)损伤或者
胃粘膜保护屏障(如粘蛋白、前列腺素、NO、生
长因子等)保护胃壁的功能减弱(Arun & Asha
2008)。在本实验中由不同的动物溃疡模型来反映
不同的发病机制,如幽门结扎胃溃疡模型是胃酸和
胃蛋白酶分泌失调而引起胃溃疡(叶木荣等
2002),乙酸灼烧胃溃疡模型和乙醇致胃溃疡模型
是由化学性损伤而致的胃溃疡,水浸应激胃溃疡模
型是由应激条件引起的胃溃疡。研究结果表明:羊
肚菌水提液对幽门结扎胃溃疡模型、乙酸灼烧胃溃
疡模型、乙醇致胃溃疡模型和水浸应激胃溃疡模
型均有明显的效果,溃疡指数(面积)的降低,
胃液量的减少说明羊肚菌水提液对由胃酸、化学
性和应激条件引起的胃溃疡均有很好的治疗和预
防作用。
本研究选择法莫替丁经典的治疗胃溃疡药物
作为阳性对照药,法莫替丁为 H2 受体阻断药,可
竞争性抑制胃壁细胞的 H2 受体而有较强抑制胃酸
分泌作用,从而减轻胃粘膜的损伤,促进溃疡愈合。
从实验结果可以看出,法莫替丁和羊肚菌均可使胃
溃疡面积明显减少,胃液量减少,总酸度降低,与
模型组比较具有显著性差异(p<0.05)。由实验结
果推测,羊肚菌的抗溃疡作用可能与下列因素有
关:羊肚菌可抑制胃酸分泌,减轻由胃酸引起的溃
疡的发生。另外羊肚菌营养价值高,是具有多种生
物学功能的药、食两用真菌,具有广阔的应用前景。
因此,通过羊肚菌菌丝体水提液对上述动物模型实
验研究,将羊肚菌进一步开发用于临床消化性疾病
的治疗提供一定的实验依据。
已有报道的抗胃溃疡作用的生物活性物质有
多糖、蛋白质、苷类、总黄酮、生物碱等(沈祥春
等 2006;杜鹏等 2000;蔡莹等 2003;傅继华等
2006;杨明等 2004;庞辉等 2007;江涛等 2009),
而羊肚菌富含蛋白质、多糖、核酸以及多种微量
元素和维生素,而不同的活性成份有不同的药效
作用,在羊肚菌菌丝体水提液保护胃粘膜损伤中
究竟是哪种生物活性物质在起作用,还需进一步
研究。
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