全 文 ：收稿日期:2004-01-12原稿;2004-04-05修改稿
作者简介:焦迎春(1973-),女, 2003年毕业于浙江大学生物系统工程与食品营养系 ,硕士 , 讲师 ,主要从事微生物工
程研究 ,发表主笔论文 5篇。
　食用菌学报　2004.11(2):12 ～ 15
　Acta Edulis Fungi
文章编号:1005-9873(2004)02-0012-04
姬松茸菌丝活性肽的分离及其组成的初步研究
焦迎春1 , 郑晓冬2
(1青海大学农牧学院农学系 ,西宁 810016;　2 浙江大学食品科学与营养系 , 杭州 310029)
摘　要:采用两次葡聚糖凝胶色谱法从姬松茸菌丝体中提取的肽类物质 ,初步分离获得肽 , 继
而分析了肽的氨基酸组成和分子量。 结果表明 , 姬松茸菌丝体中的活性肽含有丰富的氨基酸 , 是
一种具有高 F值(22.5)的寡肽 , 其分子量在 1500 ～ 30000U之间。
关键词:姬松茸;活性肽;分离;组成
中图分类号:S646.110.1　　　　文献标识码:A
姬松茸(Agaricus blazei Murrill.)又称巴西蘑菇[ 1] 。姬松茸子实体肉质鲜美可口 ,含有多
种活性成分 ,经常食用 ,具有较好的保健作用 ,是一种很有开发前途的食药兼用真菌[ 2 , 3] 。目
前 ,用液体深层发酵法生产的姬松茸菌丝体 ,其营养成分与子实体的相似 ,蛋白质含量均高达
41%左右 ,居于食用菌的首位[ 3] 。本实验借鉴灵芝肽提取分离方法[ 4] ,采用水提醇沉法获取姬
松茸菌丝体中的活性肽类物质 ,采用两次葡聚糖凝胶层析法初步分离了菌丝肽 ,旨在为姬松茸
菌丝体中活性肽的开发应用提供理论基础。
1　材料和方法
1.1　材料和仪器
1.1.1　材料
姬松茸液体深层发酵生产的菌丝体由浙江大学食品科学与营养系微生物实验室自制 。
1.1.2　主要仪器
定氮仪(KDN-04A 型 ,上海新嘉电子有限公司);毛细管电泳仪(P ACE2100 ,美国 Back-
man公司);葡聚糖凝胶柱层析装置(玻璃层析柱φ2.5cm ×35cm 和φ2.5cm×55cm ,美国Wa-
ter公司);葡聚糖凝胶 Sephadex G-100和 Sephadex G-50型(美国 Pharmacia 公司);自动部分
收集器(BSZ-160型 ,上海沪西分析仪器厂);小型台式记录仪(XWT-S 型 ,上海自动化仪表三
厂);核酸蛋白检测仪(HD-93-1型 ,上海金达生化仪器有限公司);氨基酸分析仪(日立 835-50
型 ,日本日立公司)。
1.2　方法
DOI:10.16488/j.cnki.1005-9873.2004.02.003
1.2.1　肽类物质提取方法[ 5]
称取 1g 干菌丝粉 ,加 10mL H2O ,在不同温度下保温提取 , 5000r min离心 15min ,取上清
液 ,加 8mL 无水乙醇沉淀 ,水醇溶物的混合体系于 4℃冰箱静置 24h 后 ,二次离心得到上清液
即为水醇溶物(肽类物质)。
1.2.2　菌丝体中水醇溶物的两次凝胶色谱分离[ 6]
以双蒸水(Double distilled w ater , DDW)为洗脱液 ,经两步葡聚糖凝胶色谱法分离水醇溶
物组分。两步凝胶柱层析分离条件分别为:Ⅰ Sephadex G-100 ,φ2.5cm×55cm ,紫外检测 UV-
210nm ,洗脱速度 15mL h ,接样间隔每管 7min;Ⅱ Sephadex G-50 ,φ2.5cm ×35cm ,紫外检测
UV-210nm ,洗脱速度18mL h ,接样间隔每管 5min。
1.2.3　肽键和氨基酸的测定
采用双缩脲法检测水醇溶物的肽键[ 8] ,采用茚三酮法检测氨基酸[ 9] 。
1.2.4　姬松茸菌丝肽的氨基酸组成分析
采用氨基酸自动分析仪分析菌丝肽的氨基酸组成 。
1.2.5　姬松茸菌丝肽分子量的测定[ 10 , 11]
分别采用蓝色葡聚糖(分子量 2×106U)和 VB12(分子量 1350U)溶液各 1mL ,上Sephadex
G-50柱层析 ,用双蒸水洗脱 ,以颜色和吸光值判断其洗脱体积。再根据Sephadex G-50分子量
的测定范围(1500 ～ 30000U)初步判定菌丝肽的分子量 。
2　结果与分析
2.1　姬松茸菌丝肽的初步分离
先将脱色后的混合物注入 Sephadex G-100柱 ,用双蒸水洗脱 ,于 210nm处检测洗脱液 ,结
果如图 1所示 ,只洗脱出一个色谱峰 。然后将分离所得单峰部分注入 Sephadex G-50 柱 ,也用
双蒸水洗脱 ,在 210nm 处检测 ,得到三个分离组分 ,结果见图 2。
图 1　水醇溶物在 Sephadex G-100上的凝胶色谱
Fig.1　Gel chromatogram of Agaricus blaz ei
water-alcohol-soluble part on Sephadex G-100 column
图 2　肽在 Sephadex G-50上的凝胶色谱
Fig.2　Gel chromatogram of
peptide on Sephadex G-50 column
根据葡聚糖凝胶柱层析法的分离原理 ,结合双缩脲法和茚三酮法试验结果 ,即可初步确定
从Sephadex G-100分离得到的单峰部分的组成 。将图 2中显示的前两个峰的收集液合并在
一起 ,其双缩脲试验及茚三酮试验结果均呈阳性(双缩脲试验阳性表明样品中有肽存在 ,茚三
132 期　　　　　　　　　焦迎春等:姬松茸菌丝活性肽的分离及其组成的初步研究
酮试验阳性表明样品中含有氨基酸),据此可确定其为菌丝肽。而第三个峰的收集液仅茚三酮
试验呈阳性 ,双缩脲试验呈阴性 ,据此确定其为氨基酸 。
2.2　姬松茸菌丝肽的氨基酸组成
姬松茸菌丝肽的氨基酸组分分析结果见表。氨基酸总量为 16.933mg mL ,氨基酸种类较
多 ,以谷氨酸含量最高 ,占氨基酸总量的 16.47%,其次是丙氨酸 ,占氨基酸总量的 10.51%。
临床和预防医学表明 ,谷氨酸具有健脑作用 ,能促进脑细胞呼吸 ,有利于脑组织中氨的排
除[ 12 , 13] 。
表　姬松茸菌丝肽的氨基酸组成与含量
Table　Amino acid composi tion and content of Agaricus blaz ei mycelium peptide(%)
氨基酸
Amino acids
含量
Content
氨基酸
Amino acids
含量
Content
非必须氨基酸 Non-essential amino acid 69.41 必须氨基酸 Essential amino acid 30.59
天门冬安酸 Asp 9.17 苏氨酸 Thr 5.17
丝氨酸 S er 4.42 异亮氨酸 Ile 4.25
谷氨酸 Glu 16.47 亮氨酸 Leu 6.58
甘氨酸 Gly 7.41 缬氨酸 Val 4.83
丙氨酸 Ala 10.51 苯丙氨酸 Phe 3.47
半胱氨酸 Cys 2.10 赖氨酸 Lys 6.29
酪安酸 Tyr 2.34
组氨酸 His 3.50
精氨酸 Arg 5.31
脯氨算 Pro 8.18
姬松茸菌丝肽中的赖氨酸和亮氨酸含量较高 ,必需氨基酸含量占氨基酸总量的30.59%,
鲜味氨基酸含量为 43.56%,所以菌丝肽具有较高的营养价值和一定的提鲜功能。另据报
道[ 14] ,高 F 值的寡肽有辅助治疗肝硬化 、肝昏迷作用和抗疲劳作用。而姬松茸菌丝肽的 F 值
达 22.5 ,远远高于灵芝肽的 3.2 ,由此可知 ,姬松茸菌丝肽是一种较优秀的活性肽。
2.3　姬松茸菌丝肽的分子量分布
将两次凝胶层析所得的肽浓缩 ,采用另一较长的玻璃层析柱(φ1cm×55cm)装添 Sephade
xG-50 ,先后用蓝色葡聚糖(分子量2×106U)、细胞色素A(分子量12350U)和VB12(分子量
1350U)上柱洗脱 ,试验测得的洗
脱体积分别为 35mL 、65mL 和
110mL。因试验所用 SephadexG-
50对分子量的测定范围是 1500
～ 30000U ,通过以上试验结果并
结合凝胶色谱分离原理 ,说明洗
脱体积在 35mL 之前洗脱出的物
质分子量大于 30000U ,洗脱体积
110mL 之后洗脱出的物质分子
量小于 1500U , 而洗 脱体 积
65mL左右的物质分子量应接近
于 12350U(图 3)。
图 3表明 ,菌丝肽在层析柱
上的洗脱体积主要集中在50 ～
图 3　姬松茸菌丝肽在 Sephadex G-50上的分子量分布
Fig.3　The distribution of molecular weight of Agaricus blazei
mycel ium peptide on Sephadex G-50 column
14 食　用　菌　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　11 卷
90mL范围内 ,因此 ,可初步推断其分子量的范围大致在 1500 ～ 30000U ,且主要集中在 1500 ～
15000U 。
3　结论
对姬松茸菌丝肽类物质采用两次凝胶色谱法进行了初步分离 ,初步研究了其氨基酸组成
及分子量分布 ,发现菌丝肽的氨基酸含量较高 ,必需氨基酸含量高于同类食用菌[ 4] ,具有较高
的营养价值 ,而且其 F 值为 22.5 ,比灵芝肽高 7倍多。因此 ,姬松茸菌丝肽是一种具高 F 值 、
且分子量在 1500 ～ 30000U之间的寡肽 ,有较强的抗氧化能力 ,是一类很有开发前途的活性多
肽。
参　考　文　献
[ 1 ] 史刚荣.姬松茸研究的现状与展望[ J] .江苏食用菌 , 1995 , 16(3):22 ～ 23.
[ 2 ] 黄年来.姬松茸及药效[ J] .江苏食用菌 , l994 , 15(4):30～ 3l.
[ 3 ] 张云凌.浅谈姬松茸的药性[ J] .中国林副特产 , 2001 , 59(4):40 ～ 41.
[ 4 ] 何　慧 ,孙　颉 , 谢笔均.灵芝生物活性肽的分离及组成研究[ J] .食品科学 , 2001 , 22(5):56 ～ 57.
[ 5 ] 何　慧 ,谢笔均 , 吕玉华 ,等.发酵灵芝粉中肽类化合物的分离及其生物活性研究[ J] .华中农业大学学
报 , 1997 , 16(5):416 ～ 421.
[ 6 ] 波钦诺克(荆家海译).植物生物化学分析方法[ M] .北京:科学出版社 , 1981.92～ 93.
[ 7 ] 张龙翔 ,张庭芳 , 李令媛.生化实验方法和技术[ M] .北京:高等教育出版社 , 1981.152 ～ 156.
[ 8 ] 无锡轻工业学院 、天津轻工业学院.食品分析[ M] .北京:中国轻工业出版社 , 1996.225～ 226.
[ 9 ] 天津轻工业学院 、大连轻工业学院 、无锡轻工业学院 ,等.工业发酵分析[ M] .北京:轻工业出版社 , 1991.
84～ 85.
[ 10] 马永强 ,赵　毅 , 石彦国.大豆蛋白水解物中肽分子分布的研究[ J] .中国粮油学报 , 2001 , 16(3):15 ～ 17.
[ 11] 邓　勇 ,冯学武.大豆多肽分子质量分布与苦味的确定[ J] .中国农业大学学报 , 2001 , 6(4):98 ～ 102.
[ 12] 方百盈 ,冯大光.必需氨基酸消旋化理论研究与蛋白质营养[ J] .食品科学 , 1997 , 18(8):13～ 18.
[ 13] 丁之恩 ,严　平.西洋参果实成分分析及利用价值研究[ J] .中国林学院学报 , 1999 , 19(4):48～ 50.
[ 14] 沈蓓英 ,孙冀平.高 F值寡肽生理功能和制备[ J] .粮食与油脂 , 1999 , 4(2):27 ～ 30.
A Preliminary Study on the Separation of the Active Peptide from
Agaricus blazei Mycelia and the Analysis of Its Composition
JIAO Ying-chun1 , ZHENG Xiao-dong2
(1 Agricultural and Animal Husbandry College , Qinghai Univ ersity , Xining 810003 , China;
2Food Science and Nutritio n Department , Zhejiang University ,Hangzhou 310029 , China)
Abstract:Sephadex gel chromatography was used to separ ate the peptide compound ex tracted from Agaricus
blazei mycelia.While the amino acid composition and the molecular weight of the peptide obtained w ere analyzed af-
terw ards.And the experimental results show ed that this peptide was a kind ofolig opeptide with high F value(22.5)
and its mo lecular weight was betw een 1500 ～ 30000U.
Key words:Agaricus blazei;Active peptide;Separ ation;Composition
152 期　　　　　　　　　焦迎春等:姬松茸菌丝活性肽的分离及其组成的初步研究