全 文 ：·研究论文 ·
[ 基金项目] 湖北省自然科学基金(编号:2004ABA242)　[ 作者简介] 卢金清 , 男, 学士 ,教授 ,电话:027-68890109 , 13871312439 , E-m ail:
l jq59169@sohu.com
高效液相色谱法测定神农香菊中绿原酸和木犀草素的含量
卢金清 ,詹晓莲 ,徐玉婷 ,万威 ,曹儒宾 ,吴丹慧 ,何雪峰 ,胡晓燕　(湖北中医学院 , 湖北 武汉 430061)
[ 摘要] 　目的:建立 HPLC 法测定神农香菊中绿原酸 、木犀草素的含量的方法。方法:采用高效液相色谱法 , DIONEX-AC-
CLAIM.120 C18(250 mm×4.6 mm , 5 μm)色谱柱;以磷酸盐缓冲溶液(pH 2.5)-甲醇(梯度洗脱)为流动相;流速为0.5 mL·
min-1 ;柱温为 35℃;检测波长为 350 nm。结果:绿原酸在 0.024 ～ 0.192 μg 范围内呈线形关系 , r=0.999 4 , 平均回收率为
98.3%, RSD为1.2%;木犀草素在0.058 ～ 0.464 μg 范围内呈线形关系 , r=0.999 8 , 平均回收率为97.3%, RSD 为1.8%。结
论:本方法简便 , 重复性好 ,可用于神农香菊原药材质量标准。
[ 关键词] 　神农香菊;绿原酸;木犀草素;含量测定;高效液相色谱法
[中图分类号] R927.2 　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2008)19-1629-03
Determination of chlorogenic acid and luteolin in Dendranthema indicum with HPLC
LU Jin-qing ,ZHAN Xiao-lian ,XU Yu-ting ,WAN Wei ,CAO Ru-bin ,WU Dan-hui , HE Xue-feng , HU Xiao-
yan (Hubei Co lleg e of T raditiona l Chinese Medicine , H ubei WuHan 430061 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To establish a me thod for the determination o f chlo rog enic acid and luteo lin in dendranthema indi-
cum with HPLC.METHODS　DIONEX-ACCLAIM.120 C18 column(250 mm ×4.6 mm , 5 μm)was used , the mobile phase
consisted of pho sphate buffer solution(pH 2.5)and methano l with g radient elution;f low rate was 0.5 mL·min -1 ;co lumn tem-
pera ture w as 35 ℃;the de tective w aveleng th w as 350 nm.RESULTS　The linear range o f chlo ro genic acid wa s 0.024 μg to
0.192 μg , r=0.999 4 , the aver age recovery was 98.3% with RSD of 1.2%.The range of luteo lin w as 0.058 μg to 0.464 μg ,
r=0.999 8 , the average recovery w as 97.3%, RSD was 1.8%.CONCLUSION　The me thod is stable , reliable , precise and can
be used fo r the quality standard o f Dendranthema ind icum.
KEY WORDS:Dendranthema indicum;chlo rog enic acid;luteolin;content determina tion;HPLC
　　神农香菊为菊科植物神农香菊 Dendranthema
indicum(L.)Des M on1.var.aromaticum Q .H .Liu
e t S.F.Zhang 的干燥头状花序 ,产于湖北神农架地
区 ,为湖北特有品种 ,分布在海拔 2 000米以上的向
阳开阔的空旷地 ,系菊科菊属植物的一个新变种 ,民
间以其花作辛凉解表药 ,具有疏风清热 、平肝明目 、
散风降压的功效[ 1] ,湖北中药资源名录已有收载[ 2] ,
神农香菊化学成分复杂 ,主要含有挥发油 、黄酮类等
有效成分[ 3-4] ,但未见文献报道含量测定的方法 ,本
实验采用高效液相色谱法测定神农香菊中绿原酸和
木犀草素的含量 ,操作简便 、快速 、重复性好 ,为建立
神农香菊原药材质量标准提供了依据。
1　材料
DION EX-ULTIMAT E 3000 高效液相色谱
仪(美国戴安公司);绿原酸对照品(批号 110753-
200413)和木犀草素对照品(批号 111520-200201)
均购于中国药品生物制品检定所;甲醇为色谱纯 ,其
他试剂均为分析纯 ,水为注射用水 。神农香菊药材
2007年 10月采自湖北神农架 ,经湖北中医学院药
学院中药鉴定教研室陈科力教授鉴定为菊科植物神
农香菊 Dendranthema indicum (L .)Des Monl var.
aromaticum Q.H.Liu et.S.F.Zhang.var.nov.
的干燥头状花序。
2　方法与结果
2.1　对照品溶液的制备　精密称取绿原酸对照品
适量 ,加甲醇溶解 ,制成0.024 g·L-1的溶液 ,作为绿
原酸对照品溶液 。精密称取木犀草素对照品适量 ,
加甲醇溶解 ,制成0.058 g·L-1的溶液 ,作为木犀草
素对照品溶液 。
2.2　供试品溶液的制备　取本品粉末(过二号筛)
1.0 g ,精密称定 ,精密加入甲醇 20 mL ,称定 ,超声
提取 30 min ,放冷 ,再称定 ,用甲醇补足减失的质
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量 ,滤过 ,滤液置蒸发皿中蒸干 ,残渣用甲醇溶解并
转移至 50 mL 量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,滤过 ,
取续滤液 ,即得供试品溶液。
2.3　色谱条件的选择　经试验研究选择用 DI-
ONEX-ACCLAIM .120 C18色谱柱(250 mm ×4.6
mm , 5 μm);流速:0.5 mL·min-1 ;检测波长:350
nm ;柱温:35 ℃,以磷酸缓冲盐水溶液(pH 2.5)为
流动相 A ,以甲醇为流动相 B ,按表 1 进行梯度洗
脱。理论塔板数按绿原酸 、木犀草素计算均应不低
于3 000 。结果见图 1。
表 1　流动相梯度洗脱程序
Tab 1　Gradient elution of mobile phase
时间/min 流动相 A/ % 流动相 B/ %
0 ～ 20 62 38
20 ～ 35 62※52 38※48
35 ～ 90 52 48
90 ～ 120 52※0 48※100
120 ～ 140 0 100
图 1　高效液相色谱图
A.空白溶剂;B.对照品;C.神农香菊提取物;1-木犀草素;2-绿原酸
Fig 1　HPLC ch romatograms
A.blank sam ple;B.chlorogein acid and luteolin;C.ext ract ion of den-
d ranthema indicum;1-luteolin;2-chlorogenic acid
2.4　线性关系的考察　分别精密吸取绿原酸和木
犀草素对照品溶液1.0 , 2.0 , 4.0 ,6.0 , 8.0 μL ,注入
液相色谱仪 ,记录绿原酸和木犀草素的峰面积 ,以进
样量为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y),得绿原酸
回归方程:Y =46.347 3X -0.074 6 , r=0.999 4 ,绿
原酸在0.024 ～ 0.192 μg 范围内呈线形关系 。得木
犀草素回归方程为Y =118.594 0X -0.553 5 , r =
0.999 8 ,木犀草素在0.058 ～ 0.464 μg 范围内呈线
形关系。
2.5　精密度试验　分别精密吸取绿原酸和木犀草
素对照品溶液各 5 μL ,在上述色谱条件下 ,连续进
样 5次 ,注入液相色谱仪 ,得绿原酸的峰面积 RSD
为1.3%;得木犀草素的峰面积 RSD为1.3%。
2.6　稳定性试验　精密吸取供试品溶液 5 μL ,在
上述色谱条件下 ,分别于 0 ,3 , 6 ,9 , 12 , 24 h进样 ,记
录绿原酸和木犀草素的峰面积 ,得绿原酸峰面积
RSD 为 1.9%,木犀草素的峰面积 RSD 为 1.8%。
说明样品溶液在 24 h内稳定性良好。
2.7　重复性试验　精密称取神农香菊药材粉末 5
份 ,每份1.0 g ,精密称定 ,按供试品溶液的制备方法
下制备 ,在上述色谱条件下测定 ,进行测定 ,计算样
品中绿原酸的平均含量为 0.251 mg·g-1 , RSD 为
1.7%,木犀草素的平均含量为3.251 mg·g-1 , RSD
为1.0%。
2.8　加样回收试验　精密称取已知含量的同一批
神农香菊药材样品 6 份 ,每份1.0 g ,加入一定量的
绿原酸对照品 ,按供试品溶液的制备方法制备 ,在上
述色谱条件下依法测定 ,见表 2。
表 2　绿原酸加样回收实验结果
Tab 2　Result of recovery test of chlo rog enic acid
序
列
样品含绿原酸
的量/mg
添加绿原酸
的量/mg
测得量
/mg
回收率
/ %
平均回收率
/ %
RSD
/ %
1 0.268 0.20 0.460 96.00
2 0.245 0.20 0.443 99.00
3 0.241 0.20 0.439 99.00
4 0.267 0.20 0.466 99.50
5 0.251 0.20 0.447 98.00
6 0.231 0.20 0.428 98.50
98.3 1.2
　　精密称取已知含量的同一批神农香菊药材样品
6份 ,每份1.0 g ,加入一定量的木犀草素对照品 ,按
照供试品溶液的制备方法制备 ,在上述色谱条件下
依法测定 ,见表 3。
表 3　木犀草素加样回收实验结果
Tab 3　Result of recovery test of luteo lin
序
列
样品含木犀草
素的量/m g
添加木犀草
素的量/mg
测得量
/mg
回收率
/ %
平均回收率
/ %
RSD
/ %
1 2.87 1.50 4.32 96.4
2 3.01 1.50 4.49 98.8
3 2.98 1.50 4.41 95.6
4 2.94 1.50 4.45 100.4
5 3.08 1.50 4.53 96.8
6 2.88 1.50 4.27 95.8
97.3 1.8
2.9　样品溶液的测定　按上述测定方法 ,测定 10
批神农香菊中的绿原酸和木犀草素的含量 ,结果见
表 4。
上述实验结果表明:神农香菊中绿原酸的含量
约为0.242 mg·g-1 ,木犀草素的含量约为2.973 mg
·g -1 ,本法可作为质量控制的标准 。
3　讨论
经试验研究选择用十八烷基硅烷键合硅胶为填
充剂的色谱柱 ,曾使用过 Diamasil(200 mm ×4.6
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　　　表 4　样品中绿原酸和木犀草素测定实验结果
Tab 4　Determina tion results o f samples of chlor ogenic acid
and luteolin
批
号
绿原酸
含量
/mg·g -1
绿原酸
RSD
/ %
绿原酸
平均含量
/mg·g -1
木犀草素
含量
/mg·g -1
木犀草素
RSD
/ %
木犀草素
平均含量
/mg·g -1
1 0.250 1.2
2 0.203 1.0
3 0.228 2.0
4 0.251 1.5
5 0.239 1.7
6 0.269 1.1
7 0.240 2.0
8 0.231 2.0
9 0.244 1.8
10 0.267 1.9
0.242
2.86 2.0
2.98 1.1
2.91 2.0
3.02 1.2
2.95 1.5
3.05 1.0
2.94 2.3
2.89 2.0
3.04 1.7
3.09 1.4
2.973
mm , 5μm)、Agilent ZOBAX SB-C18(250 mm ×3.0
mm ,5 μm)、T URN ER KromasilTM(4.6 mm ×250
mm , 5 μm)及 DIONEX-ACCLAIM.120 C18 (250
mm×4.6 mm ,5 μm)最后根据色谱峰的分离效果
及稳定性等因素综合考虑 ,选择使用 DIONEX-AC-
CLAIM.120 C18(250 mm ×4.6 mm ,5 μm)色谱柱 。
曾选用流动相等度洗脱 ,由于神农香菊化学成
分复杂 ,其木犀草素峰受到前后几个峰的干扰无法
基线分离 ,故最终选用了表 1 中的流动相梯度洗脱
程序 ,达到最终要求。
考察了不同检测波长对色谱图的影响 ,结果表
明其对木犀草素峰影响更大 ,综合考虑检测波长对
绿原酸峰和木犀草素峰的影响 ,最终选择以 350 nm
为检测波长。
神农香菊为湖北特有品种 ,相关研究较少 ,其中
木犀草素作为黄酮类具有止咳 、抗炎 、化痰 、平喘作
用 ,绿原酸作为有机酸类具有抗炎 、抑菌 、抗病毒作
用 ,本试验建立的高效液相色谱法 ,首次测定神农香
菊中绿原酸和木犀草素的含量 ,并用双指标测定法 ,
建立了神农香菊的含量测定方法 ,为神农香菊的质
量控制提供科学依据。
参考文献:
[ 1] 　刘启宏 , 张树藩.神农架菊属一新变种[ J] .武汉植物研究 ,
1983 , 1(2):237-237.
[ 2] 　湖北中医药资源普查办公室, 湖北省中药材公司.湖北中药资
源名录[ M] .科学出版社 , 1990:344.
[ 3] 　姜从良 ,卢金清.神农香菊中挥发油 、总黄酮与杭菊花 、贡菊花
的比较研究[ J] .湖北中医学院学报 , 2001 , 3(3):48-49.
[ 4] 　龚复亮 ,王国亮 ,王有为 ,等.神农香菊花的化学成分研究(Ⅱ)
[ J] .武汉植物学研究 , 2005 , 23(6):610-612.
[收稿日期] 2008-03-10
[ 基金项目] 天津市卫生局科技基金项目(编号:05 KYZ 89)　[ 作者简介] 魏智勇 , 男 , 副主任药师 , 电话:022-27468130 , E-m ail:
w eizhiyong1954@126.com
高效液相色谱法测定抗纤丸中芍药苷 、阿魏酸和黄芩苷的含量
魏智勇1 ,王俊华1 ,边景1 ,毕丽萍1 ,刘芳2 ,周晶2 ,张庆伟2 　(1.天津传染病医院 ,天津市肝病研究所 ,天津 300192;2.
天津医科大学 ,天津 300070)
[ 摘要] 　目的:建立同时测定抗纤丸中芍药苷 、阿魏酸 、黄芩苷 3种有效成分的含量方法。方法:Diamonsil C18色谱柱 , 流动相
甲醇-1%磷酸 , 梯度洗脱;二极管阵列检测器(DAD);检测波长分别为芍药苷 230 nm , 阿魏酸 316 nm , 黄芩苷 280 nm , 柱温 35
℃。结果:在 3 个波长下同时测定 3 种化合物的含量:芍药苷 、阿魏酸 、黄芩苷的线性范围分别为 0.20 ～ 0.60 μg , 0.025 ～
0.075 μg , 1.25 ～ 3.75 μg;平均加样回收率分别为100.87%, 100.31%, 101.05%;RSD 分别为 1.03%, 0.71%, 1.88%。结论:
该方法灵敏准确 、重复性好 , 可用于本制剂的质量控制。
[ 关键词] 　高效液相色谱—二极管阵列检测器;抗纤丸;芍药苷;阿魏酸;黄芩苷
[中图分类号] R927　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2008)19-1631-03
Determination of paeoniflorin , ferulic acid and baicalin in Kangxian pills by HPLC
WEI Zhi-yong 1 ,WANG Jun-hua1 , BIAN Jing 1 , BI Li-ping1 , LIU Fang2 , ZHOU Jing2 , ZHANG Qing-wei2
(1.Infectious Disease Hospitial , Hepatopathy Resea rch Institute , T ianjin 300192 , China;2.T ianjin Medical Univer sity , T ianjin
300070 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To establish an HPLC-DAD method to determine the content o f paeoniflo rin , ferulic acid and baica-
lin in Kangxian pills.METHODS　The sample was determined by RP-HPLC-DAD with a Diamonsil C18 co lumn , using methanol-
1% phospho ric acid so lution as a mobile pha se , detecting w aveleng th at 230 nm , 316 nm , 280 nm and the column tempera ture
being 35 ℃.RESULTS　The three effective components could be de tected by this method.A good linearity of paeoniflo rin , fe r-
·1631·中国医院药学杂志 2008年第 28卷第 19期 Chin H osp Pharm J , 2008 Oct , Vol 28 , No.19