全 文 ：第 27卷第 2期
2008年 2月
分析测试学报
FENXICESHIXUEBAO(JournalofInstrumentalAnalysis)
Vol.27No.2
185～ 187
收稿日期: 2006-12-11;修回日期:2006-12-29
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30470188)
第一作者:白 洁(1976-), 女(回族), 安徽阜阳人 , 博士
通讯作者:杨得坡 , Tel:020-87333159, E-mail:lswdm@mail.sysu.edu.cn
长萼小连翘醇提物中黄酮类与金丝桃素类
成分的 HPLC/DAD-MS联用分析
白 洁 1, 2 , 王冬梅1 , 杨得坡 1
(1.中山大学 药学院 , 广东 广州 510080;2.清华大学 化学系 , 北京 100084)
摘 要:利用 HPLC/DAD-ESI(-)MS联用技术对植物长萼小连翘(Hypericumerectumsubsp.longisepalumL.
H.WuetD.P.Yang)中主要化学成分进行了分离分析 , 初步鉴定出金丝桃素 、 伪金丝桃素 、 原伪金丝桃素 、
绿原酸 、 芦丁 、 金丝桃苷 、 槲皮素等 12种黄酮类 、 酚酸类和金丝桃素类等化学成分。
关键词:高效液相色谱 -质谱;长萼小连翘;黄酮类化合物;酚酸类化合物;金丝桃素类化合物
中图分类号:Q949.758.5;O657.63 文献标识码:A 文章编号:1004-4957(2008)02-0185-03
IdentificationoftheConstituentsinHydro-alcoholicExtractof
Hypericumerectumsubsp.longisepalumbyHPLC/DAD-MS
BAIJie1, 2 , WANGDong-mei1 , YANGDe-po1
(1.SchoolofPharmaceuticalSciences, SunYat-senUniversity, Guangzhou 510080, China;
2.ChemicalDepartmentofTsinghuaUniversity, Beijing 100084, China)
Abstract:Hypericumerectumsubsp.longisepalumL.H.WuetD.P.YangisanewsubspeciesofHyperi-
cum(Clusiaceae)discoveredinChinain2004.Thequalitativeanalysisofthechemicalconstituentsin
thehydro-alcoholicextractofHypericumerectumsubsp.longisepalumwasperformedusingHPLC/DAD
-ESI(-)MSanalysis.12mainconstituents, includinghypericin, pseudohypericin, protopseudohy-
pericin, chlorogenicacid, rutin, hyperoside, quercetinandsomeotherflavonoids, wereidentifiedor
tentativelyidentified.
Keywords:HPLC/DAD-MS;Hypericumerectumsubsp.longisepalumL.H.WuetD.P.Yang;
flavonoids;phenolicacids;hypericins
长萼小连翘(Hypericumerectumsubsp.longisepalumL.H.WuetD.P.Yang)系藤黄科金丝桃属植物长
萼小连翘的一个新亚种 , 2004年由中山大学药学院吴立宏等[ 1]首次发现并报道。有关长萼小连翘化学成
分分析方面的研究尚未见文献报道。液质联用技术应用于金丝桃属植物中化学成分的分离鉴定的报道较
多 , 其中主要集中在贯叶连翘(H.perforatumL.)的化学成分分析上。同属植物往往具有相似的化学成分 ,
为此 , 本研究利用 HPLC/DAD-ESIMS联用技术对长萼小连翘中的化学成分进行分离分析 , 在与化学对
照品进行比较并参考相关文献 [ 2-4]的基础上 , 对其中主要化学成分进行了结构鉴定与推测。
1 实验部分
1.1 仪器与试剂
FinniganLCQTM DECAXP高效液相色谱 -质谱联用仪(美国 ThermoQuestFinnigan公司):HPLC系
统 , P4000四元泵 , UV6000 LP二极管阵列检测器(DAD), 电喷雾电离(ESI)接口 。色谱柱 Nucleodur
C18(5 μm, 250 mm×4.6mmi.d.)(美国 Macherey-Nagel公司)。
芦丁(rutin)、 绿原酸(chlorogenicacid)购自 Sigma公司;槲皮素(quercetin)购自 Acros公司;金丝
桃苷(hyperoside)购自 Merck公司;金丝桃素(hypericin)自制。甲醇 、 乙腈 、冰乙酸 、磷酸和三乙胺 ,
均为色谱纯;双蒸水为本实验室自制 。
长萼小连翘样品采于湖北巴东县 , 于盛花期采集植物地上部分 , 阴干后备用。样品经中山大学药
分析测试学报 第 27卷
学院杨得坡教授鉴定为藤黄科金丝桃属植物长萼小连翘的新亚种 Hypericumerectumsubsp.longisepalum
L.H.WuetD.P.Yang, 模式标本存于中山大学生命科学学院生物博物馆 。
1.2 长萼小连翘醇提物的制备
长萼小连翘粉碎成粗粉(约 0.350 ～ 0.833 mm), 称取 500 g于玻璃缸中加入 3 L90%(体积分数 ,
下同)的乙醇避光浸提 3次 , 每次过夜 , 搅拌 , 过滤 , 合并滤液 , 40℃以下减压浓缩除去溶剂 , 冷冻干
燥 , 即得到长萼小连翘醇提物 , 得率为 10.35%(质量分数)。避光冷藏 , 备用。
1.3 样品溶液的制备
取长萼小连翘醇提物约 30mg, 精密称定 , 加 90%甲醇超声溶解后 , 定容至 10 mL容量瓶中 , 即
得供试样品溶液 。 0.45μm微孔滤膜过滤后 , 进行 HPLC/DAD-MS分析。
1.4 HPLC/DAD-ESIMS分析条件
液相色谱条件:流动相:A相为水 -甲醇 -乙酸(体积比 94.8 ∶5 ∶0.2, 三乙胺调 pH4.50), B
相为甲醇 , C相为乙腈;流动相梯度:0 ～ 15 min, A由 85%变化至 40%, B由 0变化至 40%, C由
15%变化至 20%;15 ～ 35 min, A由 40%变化至 10%, B由 40%变化至 15%, C由 20%变化至 75%;
35 ～ 50 min, 保持不变。进样量:20μL, 流速 0.8 mL· min-1。 DAD扫描范围 200 ～ 700 nm。
图 1 长萼小连翘醇提物的 HPLC/UV(A)、 (B)
及 ESI(-)MSTIC(C)色谱图
Fig.1 HPLC/UVchromatogramsdetectedat254nm
(A), 590 nm(B)andtheESI(-)MStotalion
chromatogram(TIC)(C)ofthehydro-alcoholic
extractofH.erectumsubsp.longisepalum
质谱条件:电喷雾电离(ESI)负离子模式;
毛细管电压 24 V, 毛细管温度 350 ℃, 喷雾电压
4.5kV, 鞘气流速 60mL·min-1 , 质量数扫描范
围 m/z100 ～ 700。
2 结果与讨论
金丝桃素类 、黄酮类和酚酸类化合物因均具
有酚羟基等活性基团 , 易失去质子而产生负离
子 , 因此在液质联用分析时 , 采用了 ESI(-)MS
检测方式 , 各色谱峰均获得了较好的质谱信号 。
长萼小连翘醇提物在 254 nm及 590 nm处的
HPLC色谱图 、总离子流色谱图见图 1, 各色谱峰
所对应的紫外最大吸收波长 、 ESI(-)MS数据列
于表 1。将各主要色谱峰在不同峰位处的 MS数据
以及200～ 700nm波长范围内的 UV吸收图谱与对
照品和相关文献 [ 2-4]报道进行比较分析 , 鉴定
或推测出 12个化学成分(见表 1)。
表 1 长萼小连翘醇提物中各主要成分的 HPLC/DAD-ESIMS数据
Table1 DataofUVandMSspectraobtainedfromtheHPLC/DAD-ESIMSanalysisofthe
hydro-alcoholicextractofH.erectumsubsp.longisepalum
No Compounds tR/min [M-H] -m/z Maximumλ/nm
1 Chlorogenicacid(绿原酸) 2.21 353 228, 320
2 Cryptochlorogenicacid(隐绿原酸) 2.61 353 230, 318
3 Isoorientin＊(异荭草苷) 8.31 447 229, 269, 342
4 Rutin(芦丁) 9.85 609 229, 254, 354
5 Hyperoside(金丝桃苷) 10.47 463 228, 254, 354
6 Quercitrin＊(槲皮苷) 12.49 447 228, 254, 349
7 Quercetin(槲皮素) 16.54 301 254, 371
8 I3, II8Biapigenin＊(双芹菜素) 18.50 537 268, 328
9 Amentoflavone＊(阿曼托黄酮) 19.08 537 268, 328
10 Protopseudohypericin(原伪金丝桃素) 28.91 521 256, 298, 362, 549
11 Pseudohypericin(伪金丝桃素) 30.06 519 245, 285, 327, 545, 588
12 Hypericin(金丝桃素) 36.06 503 248, 285, 330, 545, 587
＊ indicatedthatcompoundsweretentativelyidentifiedbythecomparingESI(-)MSandUVspectrawiththoseinthecitedliteratures
根据液相色谱保留时间的不同 , 以及 DAD和 ESIMS数据 , 得知长萼小连翘醇提物的 HPLC图中峰
1与峰 2、峰 8与峰 9分别为两对同分异构体。峰 1和峰 2的 [ M-H] -离子均为 m/z353, 紫外最大吸
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第 2期 白 洁等:长萼小连翘醇提物中黄酮类与金丝桃素类成分的 HPLC/DAD-MS联用分析
收波长相似 , 通过比较对照品的 HPLC保留时间以及质谱数据 , 并参考文献 [ 2] , 可以推测峰 1和峰 2
分别为绿原酸(chlorogenicacid)和隐绿原酸(cryptochlorogenicacid)。峰 8和峰 9的准分子离子峰 [ M-
H] -同为 m/z537 , 且紫外最大吸收波长均为 268和 328 nm, 与化合物 biapigenin一致 。对照文献 [ 2]
报道 , 同属植物贯叶连翘在此相似 HPLC色谱条件下的出峰顺序和相对应的保留时间的数据 , 推测峰 8
对应的化合物为双芹菜素(I3, I8Biapigenin), 而峰 9为阿曼托黄酮(Amentoflavone, I3′, I8Biapigenin)。
峰 3ESI(-)的准分子离子 [ M-H] -为 m/z447, 紫外最大吸收波长为 269nm和 342nm, 与化合
物异荭草苷(isoorientin)一致。 Jurgenliemk等 [ 2]报道了贯叶连翘在 RP-C18柱以及相似流动相系统的
HPLC条件下 , 在对应的保留时间处鉴定出异荭草苷 (isoorientin), 由此初步推测峰 3为异荭草苷
(isoorientin)。峰 4、 5和 7的 [ M-H] -分别为 m/z609、 463和 301, 通过与对照品保留时间及 ESIMS
数据比较 , 鉴定出峰 4、 5和 7分别为芦丁(rutin)、 金丝桃苷(hyperoside)和槲皮素(quercetin)。峰 6的
准分子离子峰 [ M-H] -为 m/z447, 主要碎片离子为 m/z301, 说明含有一个甲基五碳糖碎片 , 紫外吸
收图谱与峰 4相似 , 结合文献报道 [ 2 -3] , 推测其为槲皮苷(quercitin)。
从图 1可见 , 峰 11和 12有极其相似的紫外吸收图谱 , 在 590nm附近有最大的吸收峰 , ESIMS的
质谱图中二者的 [ M-H] -分别为 m/z519和 503, 通过与金丝桃素对照品比较并参考文献 [ 3-4] , 鉴
定峰 12为金丝桃素(hypericin), 而峰 11则是多了一个甲基的伪金丝桃素(pseudohypericin)。峰 10紫
外吸收图谱同峰 11、 12相似 , 但是最大吸收波长有一定程度的红移 , 质谱图中 [ M-H] -为 m/z521,
文献 [ 4]报道原伪金丝桃素在贯叶连翘植物体内存在并且在光照下易失去 2H, 转化成伪金丝桃素 , 推
定峰 10为原伪金丝桃素(protopseudohypericin)。
3 结 论
通过以上研究 , 采用高效液相色谱和电喷雾质谱联用的分析技术 , 从金丝桃属植物新亚种长萼小
连翘的醇提物中鉴定或推测出 12种黄酮类 、酚酸类和金丝桃素类化合物 , 这些成分亦是同属抗抑郁植
物药贯叶连翘的主要成分 , 以金丝桃素为化学对照品(自制 , HPLC检测纯度大于 99%), 经初步定量
分析得知 , 长萼小连翘中金丝桃素与伪金丝桃素的含量高于贯叶连翘 。另外 , 贯叶连翘及其提取物具
有显著的药物相互作用 , 其中贯叶金丝桃素是引起药物相互作用的主要成分 [ 5] , 但在长萼小连翘中未
检测到贯叶金丝桃素和加贯叶金丝桃素。因此长萼小连翘可望作为能规避药物相互作用的抗抑郁植物
药新资源被开发利用 , 本文可为该新亚种的进一步研究与广泛开发利用提供重要的参考 。
参考文献:
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