全 文 ：大叶藜叶中总黄酮含量的测定
武 芸1，马世荣2，王春林2，胡浩斌1，张小伟1
(1．陇东学院化学化工学院，甘肃庆阳 745000;2．陇东学院生命科学与技术学院，甘肃庆阳 745000)
摘要 ［目的］建立大叶藜叶中总黄酮含量的测定方法。［方法］采用分光光度法，以芦丁为对照品，10 %KOH为显色剂，在 403 nm处对
样品中的总黄酮含量进行测定。［结果］总黄酮在10． 7 ～64． 2 μg /ml范围内呈良好的线性关系，Ｒ2 = 0． 997;平均加样回收率为98． 45%，
ＲSD为 0． 56%(n =6)，大叶藜叶中的总黄酮含量为 2． 45 mg /g。［结论］该方法稳定、简便、快速，适用于大叶藜叶中总黄酮含量的测定。
关键词 紫外 －可见分光光度法;大叶藜;总黄酮;含量测定
中图分类号 S567． 21 + 9;Ｒ284． 1 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2015)34 －164 －02
Determination of Total Flavone in the Leaf of Chenopodium hybridum L．
WU Yun1，MA Shi-rong2，WANG Chun-lin2 et al (1． College of Chemistry and Chemical Engineering，Longdong University，Qingyang，
Gansu 745000;2． College of Life Science and Technology，Longdong University，Qingyang ，Gansu，745000)
Abstract ［Objective］To establish a method for the total flavonoid content determination of the leaf of Chenopodium hybridum L．［Method］
The content of total flavones from the leaf of Chenopodium hybridum L． was determined by UV-visble spectrophotometry with liquiritin as refer-
ence substance，10% KOH as chromogenic agent at the detection wavelength of 403 nm． ［Ｒesult］The total flavonoid showed a good linear re-
lationship at the range of 10． 7 － 64． 2 μg /ml，Ｒ2 = 0． 997． The average recovery rate was 98． 45%，ＲSD = 0． 56% ． Total flavone content in
the leaf of Chenopodium hybridum was 2． 45 mg /g．［Conclusion］The method was ralatively simple，convenient and accurate，and could be used
for the quality control for Chenopodium hybridum L．
Key words UV-visble spectrophotometry;Chenopodium hybridum;Total flavonoids;Content determination
基金项目 庆阳市自然科学基金资助项目“大叶藜化学成分及HPLC指
纹图谱研究”(ZJ201304) ;甘肃省应用化学重点学科资助项
目(GSACK20130113)。
作者简介 武芸(1982 － ) ，女，甘肃庆城人，讲师，硕士，从事天然药物
提取分离技术研究。
收稿日期 2015-11-09
大叶藜为藜科(Chenopodiaceae)藜属(Chenopodium)一
年生草本植物，别名杂配藜、八角灰菜、血见愁等，我国各地
均有分布［1］，其地上部分可作中药，主治月经不调、子宫出
血、吐血、衄血、咯血、尿血等症［2］。研究表明，藜属植物富含
黄酮、酚酸和萜类物质［3 －4］，黄酮类化合物具有抗氧化、抗肿
瘤、调节免疫、增强心血管功能、抗过敏、抗菌消炎、降血糖、
降血脂、抗病毒、养胃护脾、利肝等功效［5 －6］。现代药学研究
表明，许多藜属植物具有止痒、抗菌、抗癌活性，并作为民间
中药广泛使用［7 －9］。大叶藜中总黄酮的含量测定及提取尚
未见报道，笔者采用紫外 －可见分光光度法测定了大叶藜叶
中的总黄酮含量，旨在为进一步研究提供理论依据。
1 材料与方法
1． 1 材料 大叶藜采自甘肃省庆阳市(107°410． 8″ E，
35°4341． 8″ N) ，由陇东学院生命科学与技术学院马世荣副
教授鉴定，植物标本保存在陇东学院生命科学与技术学院
(20140620)。
1． 2 仪器与试剂 仪器:FZ102 植物粉碎机(北京中兴伟业
仪器有限公司) ;FA1204B型电子分析天平(上海精密科学仪
器有限公司) ;ＲE-52C 旋转蒸发器(上海科升仪器有限公
司) ;KQ-500DB型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公
司) ;SPECOＲD-50 紫外可见分光光度计(德国耶拿公司)。
试剂:芦丁(中国药品生物制品鉴定所，批号:100080 －
200707) ;95%乙醇、甲醇、氢氧化钾、三氯化铝、亚硝酸钠、硝
酸铝均为分析纯;试验用水为二次蒸馏水，自制。
1． 3 方法
1． 3． 1 供试品溶液的制备。准确称取干燥至恒重的原料
(过 60目标准筛)1． 0 g，用 30 ml 70%乙醇溶液超声提取 2
次，每次 40 min，过滤，将滤液合并，减压浓缩，浓缩物用石油
醚(60 ～90 ℃)萃取 3次，水相用乙酸乙酯萃取 2 次，合并乙
酸乙酯萃取液并转移至 100 ml 容量瓶中，用 70%乙醇定容、
摇匀，作为供试品溶液。
1． 3． 2 对照品溶液的制备。准确称取干燥至恒重(120 ℃)
的芦丁标准对照品 0． 010 7 g，用 70%乙醇超声溶解，并定容
至 100 ml，配制成 107 μg /ml 的芦丁标准溶液。
1． 3． 3 检测波长的选择。精密吸取一定量的供试品溶液和
对照品溶液于 2个 10 ml具塞试管中，均用 70%乙醇稀释至
6 ml，加入10% KOH溶液各0． 5 ml，充分混匀，静置5 min，用
70%乙醇定容、摇匀，以相应试剂作为空白对照，分别在 190
～900 nm进行扫描。
1． 3． 4 标准曲线的绘制。精密量取新配制的芦丁标准溶液
1． 0、2． 0、3． 0、4． 0、5． 0、6． 0 ml 于 6 个 10 ml 具塞试管中，按
“1． 3． 3”中的显色方法和测定方法，分别在检测波长处测定
各溶液的吸光度。以芦丁对照品溶液的质量浓度(C)为横
坐标，吸光度(A)为纵坐标，绘制标准曲线。
1． 3． 5 样品总黄酮含量的测定。精密吸取大叶藜叶供试品
溶液 3份，每份均为 5． 0 ml，按“1． 3． 3”的方法在最大波长处
分别测其定吸光度(每样测定 3次) ，将试样的吸光度平均值
代入芦丁标准曲线方程，计算供试样品的总黄酮含量。
2 结果与分析
2． 1 检测波长的确定 由图 1 可知，对照品显色溶液与供
试品显色溶液最大吸收波长很接近，故选择 403 nm 为试验
的测定波长。
2． 2 标准曲线的建立 标准曲线见图 2，用最小二乘法分别
责任编辑 李占东 责任校对 况玲玲安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2015，43(34) :164 － 165
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2015.34.061
注:1．供试品溶液;2．对照品溶液。
图 1 供试品与对照品的紫外吸收
求出回归方程及相关系数分别为 A = 0． 019 6C + 0． 108 6，Ｒ2
= 0． 995。
图 1 标准曲线
2． 3 样品测定 按“1． 3． 5”的方法，将每种试样的吸光度平
均值带入芦丁标准曲线方程，计算供试样品的总黄酮含量，
得到大叶藜叶中总黄酮含量为 2． 45 mg /g。
2． 4 方法学考察
2． 4． 1 精密度。精密吸取 5． 0 ml供试品溶液，按“1． 3． 3”的
方法测定最大吸收波长处的吸光度，重复测定 5 次，结果
ＲSD =0． 86%，表明仪器精密性良好。
2． 4． 2 重复性。精密吸取供试品溶液 5． 0 ml，共 5 份，置于
10 ml容量瓶中，按“1． 3． 3”的方法分别测定其吸光度，每份
溶液在最大波长下测定 3 次，取平均值，结果 ＲSD = 0． 93%，
表明该方法重复性良好。
2． 4． 3 稳定性。精密吸取供试品溶液 5． 0 ml于 10 ml 容量
瓶中，按“1． 3． 3”的方法分别于 20、40、60、80、100、120 min时
测定其吸光度，结果 ＲSD = 1． 78%，表明在显色后 120 min
内，吸光度基本稳定。
2． 4． 4 加样回收率。精密吸取供试品溶液 6 份于 10 ml 容
量瓶中，每份 5． 0 ml。分别加入芦丁标准溶液 1． 0、1． 5、2． 0
ml，每样平行 2份。按“1． 3． 3”的方法在 403 nm处分别测定
加样后的吸光度，并计算总黄酮含量、回收率、平均回收率和
ＲSD。加样回收率试验结果见表 1。由表 1 可知，平均回收
率为 98． 45%，ＲSD =0． 56%。
3 讨论
该试验分别对提取溶剂和显色方法进行了考察。分别
表 1 加样回收率试验
序号
加标前的量
mg
加标量
mg
加标后的量
mg
回收率
%
平均回
收率∥%
ＲSD
%
1 0． 122 5 0． 107 0 0． 227 8 99． 27 98． 45 0． 56
2 0． 122 5 0． 107 0 0． 227 0 98． 93
3 0． 122 5 0． 160 5 0． 278 0 98． 24
4 0． 122 5 0． 160 5 0． 276 7 97． 77
5 0． 122 5 0． 214 0 0． 330 2 98． 12
6 0． 122 5 0． 214 0 0． 330 9 98． 35
采用 50%、60%、70% 、80%、95%乙醇作为提取剂，按照
“1． 3． 1”的方法得到提取液，后采用“1． 3． 3”的显色方法和测
定方法测定提取液在 403 nm处的吸光度，发现 70%乙醇作
为提取剂时吸光度达到最大，因此，该试验选取 70%乙醇为
提取溶剂。分别采用直接测定法和 AlCl3-CH3OH、10%
KOH、NaNO2-Al(NO3)3 3种显色法对供试品溶液进行显色，
后分别在 190 ～ 900 nm 进行扫描，结果表明，采用 10%
KOH作为显色剂，步骤简单、快速、稳定，且出峰效果好，干扰
小，故该试验选用 10% KOH作为显色剂。
4 结论
该研究以 70%乙醇为提取溶剂，10% KOH为显色剂，采
用紫外 －可见分光光度法测定大叶藜叶的总黄酮含量为 2．
45 mg /g，且精密性、重复性、稳定性、加样回收率试验结果表
明，以 KOH为显色剂，采用紫外 －可见分光光度法测定大叶
藜叶的总黄酮含量，方法操作简单，结果稳定、可靠。
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