全 文 ：湖北中医学院学报
JournalofHubeiUniversityofChineseMedicine
2010年 12月第 12卷第 6期
December2010, Vol.12, No.6
作者简介:卢化(1981-),男 ,武汉市第三人民医院药剂科药师。
HPLC法测定神农香菊植株中绿原酸的含量
卢化 ,朱丽
(武汉市第三人民医院药剂科 , 湖北 武汉 430060)
摘要:目的　研究神农香菊植株中绿原酸的含量 ,探讨绿原酸在神农香菊不同营养器官中的分布规律。方法　使
用 DIONEX-ACCLAIM.120C18(250mm×4.6mm, 5μm)色谱柱;磷酸盐缓冲溶液(pH=2.5)-甲醇为流动相;流速为
0.5mL/min;柱温为 35℃;检测波长为 350nm。结果　绿原酸在神农香菊中的含量分布为全草 >叶 >茎 >花 ,其在全草
中的含量最高 ,绿原酸在 0.024-0.384μg范围内呈线形关系 , 平均回收率为 97.448%, r=0.9999, RSD为 0.9%。结
论　可以使用神农香菊的全草部分作为其有效成分绿原酸的代替品。本实验为扩大神农香菊的药用部位 、提高其药
用价值提供了科学依据。
关键词:高效液相色谱法;神农香菊;绿原酸;分布规律
中图分类号:R284.1　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1008-987X(2010)06-0044-03
DeterminationoftheContentofChlorogenicacid
inDendranthemaindicumwithHPLC
LUHua, ZHULi
(DepartmentofPharmacy, WuhanThirdPeoplesHospital, Wuhan, 430060, Hubei)
Abstract:Objective　TostudythecontentofChlorogenicacidinDendranthemaindicum, andtoidentifythedistributionofChlorogenic
acidindiferentvegetativeorgansofDendranthemaindicum.Methods　TheHPLCconditionswithDIONEX-ACCLAIM.120 C18 column
(250mm×4.6mm, 5μm)wasused, themobilephasewascomposedofPBS(pH=2.5)andmethanol;flowratewas0.5mL/min;column
temperaturewas35℃;thedetectivewavelengthwas350nm.Results　thedistributionofChlorogenicacidinDendranthemaindicumwas
herba>leaves>Stems>flowers, andthehighestcontentwasinherbaofDendranthemaindicum.TherangeofChlorogenicacidwas0.024μg
to0.384μg, r=0.9999, theaveragerecoverywas97.448%, RSDwas0.9%.Conclutions　TheherbaofDendranthemaindicumcanbe
usedasitsactiveingredient-Chlorogenicacid, whichexpandstheDendranthemaindicumsmedicinalpartstoenhanceitsmedicinalvalueof
thefoundation.
Keywords:HPLC;Dendranthemaindicum;Chlorogenicacid;Distribution
　　神农香菊为菊科植物神农香菊(Dendranthemaindicum(L.)
DesMonl.Var.aromaticumQ.H.Liu.etS.F.Zhang)的干燥
的头状花序 , 为神农架特有植物。分布于湖北省神农架地区
2000m以上的山地 [ 1] 。具有平肝明目 、清热解毒 、散风降压的功
效 [ 2] , 鄂西山区民间用于防治感冒 、头痛和治疗慢性肝炎等疾
病。并已被用来提取精油或浸膏 , 广泛用于中药 、饮料 、香烟及
化妆品中 [ 3] 。绿原酸作为其中主要有效成分之一 , 具有抗菌 、
抗病毒 、降压 、抗肿瘤等作用。随着神农香菊的不断被开发 ,其
需求量急剧增加。本文采用高效液相色谱法测定神农香菊花 、
茎 、叶及全草中绿原酸的含量 , 探讨神农香菊次生代谢产物的
分布规律 , 对神农香菊的开发利用提供科学依据。
1　仪器与试药
DIONEX-ULTIMATE3000液相色谱仪 , StarsoriusBSI型电
子分析天平(d=0.01mg, 北京赛多利斯天平有限公司),
UP520H超声波清洗机(熊猫集团南京电子计量有限公司)。
DIONEX-ACCLAIM.120 C18(250mm×4.6mm, 5μm)色谱柱 , 甲
醇为色谱纯(美国天地公司), 其它试剂均为分析纯 , 水为三蒸
水。绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所 , 批号 110753-
200413), 神农香菊(Dendranthemaindicum(L.)DesMon1.var.
aromaticumQ.H.LiuetS.F.Zhang.)于 2003年 11月采集于神
农架燕子垭 ,并由中国科学院武汉植物园赵子恩教授鉴定。
2　方法与结果
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December2010, Vol.12, No.6
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2.1　色谱条件
色谱柱:DIONEX-ACCLAIM.120 C18 (250mm×4.6mm,
5μm);磷酸盐缓冲溶液 (pH2.5)-甲醇为流动相;流速
0.5mL/min;柱温为 35℃;检测波长为 350nm;按表 1梯度洗脱。
理论塔板数按绿原酸峰计算应不低于 3000。结果见图 1 -图
6。
表 1　流动相梯度洗脱表
时间(min) 流动相 A(%) 流动相 B(%)
0-20 62 38
20-35 62※52 38※ 48
35-90 52 48
90-120 52※0 48※100
120-140 0 100
图 1　神农香菊花 HPLC图谱
图 2　神农香菊茎 HPLC图谱
图 3　神农香菊叶 HPLC图谱
图 4　神农香菊全草 HPLC图谱
图 5　绿原酸对照品 HPLC图谱
图 6　空白溶剂 HPLC图谱
2.2　对照品溶液的制备
精密称取绿原酸对照品适量 , 加甲醇溶解 , 制成 0.024mg/
mL的溶液 , 作为对照品溶液。
2.3　供试品溶液的制备
分别取神农香菊花 、茎 、叶及全草粉末(过二号筛)1.0g,精密
称定 ,分别精密加入甲醇 20mL,称定重量 ,超声提取 30min, 放冷 ,
再称定重量 ,分别用甲醇补足各个样品减失的重量 , 过滤, 滤液置
蒸发皿中蒸干 ,残渣用甲醇溶解并分别转移至 50mL量瓶中 , 加
甲醇至刻度 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液 ,即分别得供试品溶液。
2.4　线性关系的考察
精密吸取对照品溶液 1.0、2.0、4.0、8.0、16.0μL,注入液相色
谱仪 ,记录绿原酸的峰面积 ,以进样量为横坐标(X), 峰面积为纵
坐标(Y), 得回归方程为:Y=46.348X-0.0638, r=0.9999。
2.5　精密度实验
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　　精密吸取对照品溶液 5μL,在上述色谱条件下 , 连续进样 5
次 , 注入液相色谱仪 ,绿原酸的峰面积的 RSD为 1.30%。
2.6　稳定性实验
分别精密吸取神农香菊各个部位供试品溶液, 在上述色谱条
件 ,分别在 0、3、6、9、12、24h进样,记录绿原酸的峰面积 ,得神农香菊
花中绿原酸峰面积分别为 1.000、1.035、0.986、1.041、1.031、1.021,
RSD为 1.9%;神农香菊茎中绿原酸峰面积分别为 3.840、 3.905、
3.773、3.723、3.801、3.758, RSD为 1.6%;神农香菊叶中绿原酸
峰面积分别为 5.288、5.406、 5.349、 5.482、5.196、 5.362, RSD为
1.7%;神农香菊全草中绿原酸峰面积为 11.031、11.323、11.246、
10.884、10.988、10.722, RSD为 1.9%;说明各个样品溶液在 24h
内稳定性良好。
2.7　重复性实验
分别精密称取神农香菊各部位同一批样品 5份 , 每份 1.0g,
精密称定 ,按供试品溶液的制备方法下制备 , 在上述色谱条件下
进行测定 ,计算各个样品中绿原酸的平均含量 , 神农香菊花为
0.251mg/g, RSD为 1.7%;茎为 0.844mg/g, RSD为 0.9%;叶为
1.183mg/g, RSD为 1.9%;全草为 2.392mg/g, RSD为 1.7%。
2.8　加样回收试验
分别精密称取已知含量的同一批样品 6份 ,每份 1.0g, 精
密称定 , 加入一定量的绿原酸对照品 , 按供试品溶液的制备方
法制备 , 在上述色谱条件下依法测定 , 其中神农香菊花的平均
回收率为 98.3%, RSD为 1.2%;茎的平均回收率为 99.25%,
RSD为 1.42%;叶的平均回收率为 97.083%, RSD为 0.92%;
全草的平均回收率为 97.448%, RSD为 0.9%, 见表 1。
表 1　各部位加样回收实验结果
供试品
序列
样品含绿
原酸的量
(mg)
添加绿原
酸的量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均
回收率
(%)
RSD
(%)
花 1 0.268 0.20 0.460 96.00 98.3 1.2
2 0.245 0.20 0.443 99.00
3 0.241 0.20 0.439 99.00
4 0.267 0.20 0.466 99.50
5 0.251 0.20 0.447 98.00
6 0.231 0.20 0.428 98.50
茎 1 0.845 0.80 1.637 99 99.25 1.4
2 0.850 0.80 1.633 97.88
3 0.833 0.80 1.621 98.5
4 0.839 0.80 1.656 102.13
5 0.852 0.80 1.642 98.75
6 0.844 0.80 1.638 99.25
叶 1 1.177 1.00 2.157 98.00 97.083 0.9
2 1.162 1.00 2.136 97.40
3 1.180 1.00 2.143 96.30
4 1.194 1.00 2.165 97.10
5 1.185 1.00 2.151 95.70
6 1.188 1.00 2.168 98.00
全草 1 2.325 1.50 3.782 97.13 97.448 0.9
2 2.310 1.50 3.796 99.1
3 2.308 1.50 3.779 97.93
4 2.319 1.50 3.771 96.8
5 2.331 1.50 3.783 96.8
6 2.322 1.50 3.776 96.93
2.9　样品溶液的测定
按上述测定方法 ,测定 5批各个样品的绿原酸含量 , 结果见
表 2。
表 2　样品测定实验结果　(n=5)
样品 批号 绿原酸(mg/g) RSD(%) 平均含量(mg/g)
花 1 0.25 1.2 0.242
2 0.24 1.0
3 0.226 2.0
4 0.24 1.5
5 0.255 1.7
茎 1 0.844 0.9 0.844
2 0.854 1.2
3 0.834 1.8
4 0.857 1.5
5 0.834 1.9
叶 1 1.179 1.9 1.178
2 1.176 1.0
3 1.185 1.2
4 1.19 1.7
5 1.162 1.0
全草 1 2.386 1.7 2.392
2 2.485 1.0
3 2.331 1.6
4 2.333 1.1
5 2.426 1.7
　　上述实验结果表明:神农香菊花中绿原酸的含量约为
0.242mg/g, 茎中绿原酸的含量约为 0.845mg/g;叶中绿原酸的
含量约为 1.178mg/g、全草中绿原酸的含量约为 2.392mg/g。由
此可见 ,神农香菊全草中绿原酸含量最高。
3　讨论
经试验研究选择用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色
谱柱 , 曾使用过 Diamasil200mm×4.6mm5μm、AgilentZOBAX
SB2 C18 (250mm×3.0mm, 5μm) 、 TURNERKro2masilTM
(4.6mm× 250mm, 5μm)及 DIONEX2ACCLA IM.120 C18
(250mm×4.6mm, 5μm)最后根据色谱峰的分离效果及稳定性
等因素综合考虑 , 选择使用 DIONEX2ACCLA IM.120 C18
(250mm×4.6mm, 5μm)色谱柱。
神农香菊为湖北特有品种 ,相关研究较少 , 其中绿原酸作为
有机酸类具有抗炎 、抑菌 、抗病毒作用 , 本试验首次采用高效液
相色谱法测定神农香菊不同营养器官中绿原酸的含量 , 并得出
神农香菊全草中绿原酸含量为最高的结论 , 为神农香菊的合理
使用提供了依据。
参考文献:
[ 1] 　刘启宏 ,张树藩.神农架菊属一新变种 [ J] .武汉植物研究 , 1983
(2):237.
[ 2] 　湖北中医药资源普查办公室 ,湖北省中药材公司.湖北中药资源
名录 [ M] .北京:科学出版社 , 1990:344.
(收稿日期:2010-08-10　编辑:郑晓屏)
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