全 文 ：［收稿日期］ 20150406(001)
［基金项目］ 辽宁省自然科学基金项目(201402004) ;辽宁中医药大学杏林学者青蓝工程杰出青年基金(50213) ;中医药行业科研专项
(201407002)
［第一作者］ 谷静逸，在读硕士，从事种质资源鉴定及中药品质评价研究，Tel:13998416927，E-mail:253739680@ qq． com
［通讯作者］ * 尹海波，教授，硕士生导师，从事种质资源鉴定及中药品质评价研究，Tel:0411-87586003，E-mail:yhb0528@ sina． com
辽宁省 5 种老鹳草中 5 种活性成分的含量测定
谷静逸1，尹海波1* ，赵容2，贾晓晴2，邵飞2
(辽宁中医药大学 药学院，辽宁 大连 116600)
［摘要］ 目的:建立 HPLC同时测定老鹳草属 5 种老鹳草中原儿茶酸、没食子酸、柯里拉京、鞣花酸和金丝桃苷含量的方
法。方法:采用 AgilentTC-C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相 0. 1%磷酸-乙腈梯度洗脱，流速 1. 0 mL·min
－1，检测波
长 280 nm，柱温 30 ℃。结果:原儿茶酸、没食子酸、柯里拉京、鞣花酸和金丝桃苷 5 种成分的线性范围分别为 0. 500 ～ 5. 000 μg
(r = 0. 999 5) ，0. 075 ～ 0. 750 μg(r = 0. 999 7) ，1. 790 ～ 17. 900 μg(r = 0. 999 9) ，0. 580 ～ 5. 800 μg(r = 0. 999 6) ，0. 065 ～ 0. 650
μg(r = 0. 999 6) ，平均回收率在 94. 05% ～ 102. 58%，ＲSD在 1. 6% ～ 2. 9%。结论:该方法简单、准确，具有良好的重复性和稳
定性，可为老鹳草药材的质量评价提供一定的参考依据。
［关键词］ 老鹳草;原儿茶酸;没食子酸;柯里拉京;鞣花酸;金丝桃苷
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2016)06-0026-04
［doi］ 10. 13422 / j． cnki． syfjx． 2016060026
Content Determination on Five Active Ingredients in Five
Species Geranii Herba of Liaoning Provience
GU Jing-yi1，YIN Hai-bo1* ，ZHAO Ｒong2，JIA Xiao-qing2，SHAO Fei2
(School of Pharmacy，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，China)
［Abstract］ Objective:To establish an HPLC method to determine the content of protocatechuic acid，
gallic acid，corilagin，ellagic acid and hyperoside in Geranii Herba． Method:HPLC column Agilent TC-C18
(4. 6 mm ×250 mm，5 μm)was eluted with the，mobile phase of 0. 1% phosphonic acid-acctonitril in a gradient
mode，the flow rate was 1. 0 mL·min －1，the detection wave-length was 280 nm，and the temperature was 30 ℃ ．
Ｒesult:The linear ranges of the 5 ingredients in HPLC were 0. 500-5. 000 μg (r = 0. 999 5) ，0. 075-0. 750 μg
(r = 0. 999 7) ，1. 790-17. 900 μg (r = 0. 999 9) ，0. 580-5. 800 μg (r = 0. 999 6) ，0. 065-0. 650 μg (r =
0. 999 6) ，the ranges of average recoveries and ＲSD were 94. 05% -102. 58% and 1. 6% -2. 9% ． Conclusion:
The method is simple and accurate with a high repeatability，which could provide reference for the quality
evaluation of Geranii Herba．
［Key words］ Geranii Herba;protocatechuic acid;gallic acid;corilagin;ellagic acid;hyperoside
老鹳草为我国传统中药，始见于明代兰茂的
《滇南本草》［1］。老鹳草来源于牻牛儿苗科植物牻
牛儿苗、老鹳草或野老鹳草的干燥地上部分，收载
于 2010 年版《中国药典》［2］。老鹳草的主要化学
成分有鞣质、黄酮类、有机酸、挥发油等，尤以鞣质
和黄酮类最为丰富［3］，研究结果表明，鞣质具有抗
菌、抗病毒、抗氧化等生物活性［4］，黄酮类化合物
具有抗病毒、抗炎镇痛、降血糖［5］等生物活性。因
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此，老鹳草的鞣质与黄酮类成分具有很大的研究
价值。
我国老鹳草品种繁多、资源丰富，有老鹳草属植
物 55 种［6］，其中辽宁省内有 7 种［7］，分别为北方老
鹳草、突节老鹳草、朝鲜老鹳草、块根老鹳草、长白老
鹳草，鼠掌老鹳草和老鹳草，其中 2010 年版《中国药
典》规定为老鹳草药材的仅有老鹳草 1 种，而市售
商品老鹳草药材有不少混用现象。基于此，本文对
老鹳草和该属频繁充当老鹳草药材的 4 个品种进行
含量测定与比较，为老鹳草的质量评价提供一定的
科学方法和参考依据，为老鹳草药源的扩大提供一
定的理论依据。
1 材料
1. 1 仪器 1100 型高效液相色谱仪(配置 SPD-
10A紫外检测器，四元低压梯度泵，柱温箱，美国
Agilent) ，KQ3200 型超声波清洗器(昆山市超声仪
器有限公司) ，CP225D 型 1 /1 万电子天平(德国
Sartorius) ，HH-S 型水浴锅(予华仪器有限责任公
司)。
1. 2 试药 没食子酸、原儿茶酸、柯里拉京、鞣花酸
对照品(批号分别为 110831-2003，2110809-20060，
PM0529SA14，091227)均购于中国食品药品检定研
究院，金丝桃苷对照品(批号 482-36-0)购于上海源
叶生物科技有限公司;乙腈、甲醇和磷酸均为色谱
纯，水为重蒸水，其他均为分析纯。
1. 3 药材 分别收集了老鹳草 Geranium wilfordii，
鼠掌老鹳草 G． sibiricum，块根老鹳草 G． dahuricum，
突节老鹳草 G． krameri 和朝鲜老鹳草 G． franchetii。
2014 年 7 月—9 月采自辽宁省山区 15 个天然居群，
并经本院药用植物教研室尹海波教授鉴定。具体信
息见表 1。
2 方法和结果
2. 1 色谱条件 AgilentTC-C18色谱柱(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm) ，流动相乙腈(A)-0. 1%磷酸水(B)
溶液梯度洗脱(0 ～ 10 min，4% ～ 5% A;10 ～ 20 min，
5% ～ 15% A;20 ～ 32 min，15% A;32 ～ 40 min，
15% ～20%A;40 ～ 50 min，20% ～ 21% A) ，流速 1. 0
mL·min －1，检测波长 280 nm，柱温 30 ℃，进样量 5
μL。在此色谱条件下没食子酸、原儿茶酸、柯里拉
京、鞣花酸、金丝桃苷的分离度均 ＞ 1. 5，表明各成分
分离良好。
2. 2 对照品溶液的制备［8-9］ 分别取没食子酸、原
儿茶酸、柯里拉京、金丝桃苷适量，精密称定，用甲醇
溶解。制成每 1 mL分别含没食子酸 1. 00 mg，原儿
表 1 老鹳草属样品基本信息
Table1 Basic information of plant materials of Geranii Herba
样品 批次 采集地 经纬度
老鹳草 L-1 本溪市桓仁县 N41°1320. 21″ E125°2652. 43″
L-2 丹东市宽甸县 N40°3812. 90″ E124°2862. 95″
L-3 抚顺市清源县 N41°5920. 57″ E125°0806. 83″
鼠掌老鹳草 S-1 鞍山市千山 N41°0046. 86″ E123°0755. 64″
S-2 本溪市本溪县 N41°1553. 06″ E124°1952. 18″
S-3 本溪市桓仁县 N41°0949. 46″ E125°3100. 78″
块根老鹳草 K-1 抚顺市新宾县 N41°4551. 48″ E125°0121. 96″
K-2 抚顺市清源县 N41°5525. 46″ E124°5908. 67″
K-3 本溪市本溪县 N41°3108. 16″ E123°5502. 11″
突节老鹳草 T-1 抚顺市清源县 N42°0710. 87″ E124°4908. 21″
T-2 抚顺市清源县 N41°4551. 48″ E125°0121. 96″
T-3 本溪市桓仁县 N41°1624. 79″ E125°2423. 27″
朝鲜老鹳草 C-1 本溪市桓仁县 N41°0859. 55″ E125°2930. 36″
C-2 丹东市宽甸县 N40°3836. 92″ E124°2950. 04″
C-3 丹东市宽甸县 N40°4431. 81″ E124°3031. 81″
茶酸 0. 59 mg，柯里拉京 3. 58 mg，金丝桃苷 0. 26 mg
的混合对照品溶液;另精密称定适量鞣花酸对照品，
用二甲基亚砜溶解［10］，制成每 1 mL 含鞣花酸 1. 45
mg的对照品溶液，备用。
2. 3 供试品溶液的制备 精密称取老鹳草粉末 2
g，分别用水和 75%乙醇 80 mL各回流提取 1 次，每
次 90 min，合并滤液于蒸发皿中，水浴蒸干，定量转
移至 10 mL量瓶，用甲醇稀释至刻度，备用。
2. 4 线性关系考察 精密吸取上述混合对照品溶
液 0. 5，1，2，3，4，5 mL，分别置 5 mL量瓶中，用甲醇
稀释至刻度，摇匀。将各浓度混合对照品溶液进样
5 μL，以混合对照品溶液进样量为横坐标，峰面积为
纵坐标，绘制标准曲线;另精密吸取鞣花酸对照品溶
液 0. 5，1，2，3，4，5 mL，分别置于 5 mL量瓶中，用二
甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，同法绘制鞣花酸的标准
曲线。结果见表 2。
表 2 5 种活性成分的线性范围及线性关系
Table 2 Standard curve and relationship of five active composition
成分 回归方程 r 线性范围 /μg
没食子酸 Y = 8 508. 2X － 314. 25 0. 999 5 0. 500 ～ 5. 000
原儿茶酸 Y = 6 444. 3X － 57. 213 0. 999 7 0. 075 ～ 0. 750
柯里拉京 Y = 5 338. 4X + 342. 58 0. 999 9 1. 790 ～ 17. 900
鞣花酸 Y = 7 996. 4X － 585. 33 0. 999 6 0. 580 ～ 5. 800
金丝桃苷 Y = 19 040X － 34. 407 0. 999 6 0. 065 ～ 0. 650
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2. 5 精密度试验 取混合对照品溶液，在上述色谱
条件下连续进样 6 次，每次进样 5 μL，计录各峰面
积。结果没食子酸、原儿茶酸、柯里拉京、鞣花酸和
金丝桃苷峰面积的 ＲSD 分别为 0. 3%，1. 0%，
0. 4%，0. 2%，0. 9%，表明仪器精密度良好。
2. 6 稳定性试验 取同一批号供试品(老鹳草 L-
1)约 2 g，精密称定，按 2. 3 项下方法制备，分别于
0，8，16，24，32，40，48 h 在上述色谱条件下进样，测
定各峰面积。结果没食子酸、原儿茶酸、柯里拉京、
鞣花酸和金丝桃苷峰面积的 ＲSD 分别为 1. 0%，
1. 1%，0. 5%，0. 1%，0. 9%，表明供试品溶液在 48 h
内稳定。
2. 7 重复性试验 取同一批号供试品(突节老鹳
草 T-1) ，平行 6 份，每份约 2 g，精密称定，按 2. 3 项
下方法制备，按 2. 1 项下色谱条件测定，计算没食子
酸、原儿茶酸、柯里拉京、鞣花酸、金丝桃苷的质量分
数分别为 8. 38，0. 54，5. 00，3. 20，0. 49 mg·g －1，ＲSD
分别为 0. 3%，1. 4%，1. 8%，1. 4%，0. 9%，表明该
试验重复性良好。
2. 8 加样回收率试验 取同一批号供试品(朝鲜
老鹳草 C-1) ，平行 6 份，每份约 1 g，精密称定，再
分别精密加入一定量的没食子酸、原儿茶酸、柯里
拉京、鞣花酸和金丝桃苷，按 2. 3 项下方法制备供
试品溶液，按 2. 1 项下色谱条件进行测定，结果见
表 3。
2. 9 含量测定 精密称取粉末 2 g，按 2. 3 项下方
法制备 5 种老鹳草供试品溶液，进样 5 μL测定。按
外标法分别计算样品中 5 个成分的含量，结果见图
1 和表 4。
3 讨论
3. 1 提取溶剂的选择 分别考察了 50%甲醇［11］回
流提取 2 次、水回流提取 2 次［12］、75%乙醇 +水各
回流提取 1 次后混合共 3 种方法。结果表明，同一
样品在相同色谱条件下，水提取虽然可使鞣质类成
分老鹳草素完全水解，但较 75%乙醇 +水提取后混
合的样品中没食子酸、原儿茶酸、柯里拉京、鞣花酸
和金丝桃苷的含量均略有降低，且 75%乙醇 +水提
取即可使老鹳草素水解完全;50%甲醇提取的样品
中虽较高水平地保留了老鹳草素，但老鹳草素极易
水解，在此条件下也难免存在一定程度的水解，且原
儿茶酸的含量极少，因此，本实验选择 75%乙醇 +
水作为提取溶剂，使老鹳草素水解完全，又可使所检
测的各成分尽可能地达到最大值。
3. 2 流动相的选择 考察了 0. 1%磷酸水-甲醇和
表 3 老鹳草中 5 种成分的加样回收率试验
Table 3 Average recovery of five composition in Geranii Herba
成分
称样量
/ g
样品
中量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
ＲSD
/%
没食子酸 1． 005 0 3． 324 0． 953 4． 285 100． 84 102． 53 2． 9
1． 120 3 3． 018 1． 199 4． 298 106． 76
1． 028 2 3． 254 0． 982 4． 280 104． 48
1． 033 5 3． 238 1． 071 4． 294 98． 60
0． 998 1 3． 342 0． 951 4． 300 100． 74
1． 080 1 3． 111 1． 146 4． 300 103． 75
原儿茶酸 1． 005 0 0． 243 0． 105 0． 346 98． 10 100． 48 2． 7
1． 120 3 0． 226 0． 120 0． 353 105． 83
1． 028 2 0． 240 0． 105 0． 346 100． 95
1． 033 5 0． 241 0． 100 0． 340 99． 00
0． 998 1 0． 252 0． 101 0． 352 99． 01
1． 080 1 0． 234 0． 101 0． 335 100． 00
柯里拉京 1． 005 0 1． 696 0． 748 2． 441 99． 60 99． 49 2． 7
1． 120 3 1． 646 0． 752 2． 411 101． 73
1． 028 2 1． 672 0． 700 2． 397 103． 57
1． 033 5 1． 667 0． 735 2． 387 97． 96
0． 998 1 1． 687 0． 741 2． 402 96． 49
1． 080 1 1． 665 0． 770 2． 415 97． 40
鞣花酸 1． 005 0 1． 014 0． 142 1． 145 92． 25 94． 05 1． 6
1． 120 3 0． 915 0． 141 1． 047 93． 62
1． 028 2 0． 989 0． 155 1． 136 94． 84
1． 033 5 0． 985 0． 160 1． 140 96． 88
0． 998 1 1． 016 0． 142 1． 149 93． 66
1． 080 1 0． 945 0． 147 1． 081 92． 52
金丝桃苷 1． 005 0 0． 165 0． 100 0． 264 99． 00 95． 66 2． 9
1． 120 3 0． 152 0． 096 0． 241 92． 71
1． 028 2 0． 170 0． 095 0． 263 97． 89
1． 033 5 0． 156 0． 100 0． 248 92． 93
0． 998 1 0． 179 0． 100 0． 276 97． 00
1． 080 1 0． 157 0． 091 0． 242 93． 41
0. 1%磷酸水-乙腈 2 种流动相系统，其中 0. 1%磷酸
水-乙腈系统的色谱峰分离度较好，柱压较低，几乎
无基线漂移现象，因此，确定 0. 1%磷酸水-乙腈系统
为本文流动相体系。
3. 3 含量的比较 测定结果表明，不同种老鹳草各
成分含量有较大差异，所测 5 种活性成分均以老鹳
草为最高，其次为鼠掌老鹳草，突节老鹳草的酚酸类
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A．老鹳草;B．鼠掌老鹳草;C．块根老鹳草;D．突节老鹳草;E．朝鲜老
鹳草;1. 没食子酸;2. 原儿茶酸;3 柯里拉京;4. 鞣花酸;5. 金丝桃苷
图 1 5 种老鹳草样品的 HPLC
Fig． 1 HPLC of five species of Geranii Herba sample
表 4 15 份老鹳草 5 种成分含量测定
Table 4 Five composition determination on 15 samples of Geranii
Herba mg·g － 1
样品名称 批号 没食子酸 原儿茶酸 柯里拉京 鞣花酸 金丝桃苷
老鹳草 L-1 4. 51 0. 45 11. 37 3. 27 0. 97
L-2 5. 08 0. 41 18. 72 3. 08 0. 79
L-3 4. 74 0. 39 11. 98 1. 92 0. 49
鼠掌老鹳草 S-1 3. 11 0. 21 7. 01 1. 82 0. 56
S-2 5. 18 0. 21 16. 57 3. 39 0. 79
S-3 4. 09 0. 27 10. 42 2. 23 0. 56
块根老鹳草 K-1 9. 52 0. 56 11. 52 1. 91 0. 48
K-2 2. 60 0. 25 6. 38 1. 98 0. 45
K-3 1. 79 0. 40 8. 66 1. 57 0. 55
突节老鹳草 T-1 4. 12 0. 27 7. 77 2. 08 0. 47
T-2 4. 92 0. 37 13. 41 2. 53 0. 47
T-3 5. 40 0. 35 11. 12 2. 07 0. 47
朝鲜老鹳草 C-1 3. 14 0. 20 4. 04 1. 65 0. 16
C-2 5. 77 0. 45 9. 36 2. 06 0. 33
C-3 2. 69 0. 13 5. 40 2. 10 0. 30
成分与鼠掌老鹳草含量相当，而朝鲜老鹳草中各成
分含量为最低。因鼠掌老鹳草与突节老鹳草资源相
对丰富，结合本实验研究，建议可把该 2 种老鹳草作
为老鹳草药材的代用品供研究参考。与此同时，本
实验进一步完善了老鹳草药材的质量评价系统，亦
为该药材的质量评价提供一定的参考依据。
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［责任编辑 顾雪竹］
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