全 文 ：翻白草中原儿茶酸提取工艺的研究＊
张　颖　张立木1　冀海伟　巩学勇　齐永秀　高允生　李同德
(泰山医学院药学院·泰安 271000　1 山东省泰安市第一人民医院·泰安 271000)
摘　要　目的:探寻翻白草中原儿茶酸的最佳提取条件 ,建立高效液相色谱法测定其含量的方法。方法:
设计单因素考察实验 ,回流提取 ,筛选出最佳提取条件。采用高效液相色谱法对其含量进行测定。结果:
采用 80%的甲醇 , 料液比 1:8 ,提取 4 次 ,每次提取时间为 1.5 小时 , 作为翻白草中原儿茶酸的最佳提取条
件。翻白草中原儿茶酸的含量为 0.3589mg·g-1 , 根中的含量为 0.1700mg·g-1。 样品的加样回收率为
99.21%, RSD为 1.05%。结论:翻白草中原儿茶酸的含量较高 , 此结果为其最佳提取条件。
主题词　翻白草/分析　原儿茶酸　工艺学 ,制药
＊泰安市科技计划基金资助项目 No.20042-49
　　翻白草(Potentilla discolor Bge.), 又名鸡腿儿 、反白蒿子 、
鸡腿根 、叶下白 、白背叶等。始载于《救荒本草》 ,多年生宿根
草本 ,为蔷薇科(Rosaceae),委陵菜属植物-翻白草(Potentilla
discolorBge)的带根全草。性平 、味甘 、微苦。清热解毒 、消肿
止血[ 1] 。翻白草中的成分有石竹造甙元 、d-儿茶素[ 2] , 5 种
可水解鞣质[3] 、没食子酸 、原儿茶酸 、槲皮黄素和熊果酸[ 4]
等。现代药理研究证明 , 原儿茶酸对金黄色葡萄球菌 、链球
菌 、肺炎双球菌 、大肠杆菌 、痢疾杆菌等均有明显抑制作用 ,
并有收敛和促进创面愈合的作用 ,故目前在临床上用于小儿
肺炎 、菌痢 、急性肾盂肾炎[ 5] 等。笔者对翻白草中原儿茶酸
的提取工艺进行了研究。
1　实验材料
1.1　仪器　LC5500高效液相色谱仪:北京东西电子科技研
究所。FA1004电子天平:上海精密科学仪器有限公司。SHB
-B95A循环水式多用真空泵:郑州长城科工贸有限公司。
RE-52A旋转蒸发器:上海亚荣生化仪器厂。电热恒温水浴
锅:北京市长风仪器仪表公司。 TGL-16G台式离心机:上海
安亭科学仪器厂。
1.2　药品与试剂　翻白草:野生 , 采于泰山 , 经药学院中药
学教授鉴定 ,洗净 、干燥 、粉碎待用。原儿茶酸标准品:中国
药品生物制品检定所 , 809-200102。甲醇:色谱纯 , 天津市西
华特种试剂厂。冰醋酸 、无水乙醇 、甲醇 、乙酸乙酯 、丙酮:均
为分析纯。0.45μm 微孔滤膜;水为双重蒸馏水。
2　方法
2.1　色谱条件的选择　色谱柱:C18(250mm×4.6mm;5μm);
流动相:甲醇-水-冰醋酸(19:80:1);流速:1ml·min-1;检测
波长:260nm;进样量:10μl;柱温:室温。
2.2　线性关系的考察　精密称取原儿茶酸对照品 3.9mg ,置
于10ml容量瓶中 , 用 70%乙醇溶解并稀释定容至刻度 , 摇
匀 ,得 0.39mg·ml-1的对照品储备液。 移取储备液 0.2、0.4、
0.6 、0.8 、1.0ml于 10ml容量瓶中 , 70%乙醇稀释定容 、摇匀 ,
得0.0078、0.0156、0.0234、0.0312 、0.039mg·ml-1的溶液 , 分别
进样 10μl , 按上述色谱条件测定 ,以峰面积积分值为纵坐标 ,
原儿茶酸浓度为横坐标 , 绘制标准曲线 , 得回归方程为:Y=
5729474.36X+50376.7(r=0.99915), 表明原儿茶酸在 0.0039
～ 0.039mg·ml -1范围内具有良好的线性关系。色谱考察见
图。
附图　原儿茶酸对照品色谱图(A)和样品色谱图(B)
3　提取工艺研究
选择不同溶剂 、不同浓度溶剂 、不同加热时间 、不同料液
比 、不同提取次数 5个因素设计单因素考察实验。
3.1　不同溶剂对提取效果的影响　称取翻白草 5 份适量 ,
用 50%乙醇 、水 、50%丙酮 、50%甲醇 、乙酸乙酯浸泡 24 小
时 ,水浴回流 1 小时 , 冷却 , 抽滤 , 浓缩 , 定容至 100ml。取适
量溶液离心(12000r min , 15 分钟), 微孔滤膜过滤 ,进样 10μl ,
按照上述条件进行测定。结果见表 1。
表 1 不同溶剂对提取效果的影响
编号 溶剂 体积(ml) 质量(g)加热时间(h) 峰面积 含量(mg g)
1 50%乙醇 150 10.040 1 229032 0.3100
2 水 150 10.0506 1 245350 0.3386
3 50%丙酮 150 10.1927 1 62402 0.0206
4 50%甲醇 150 10.3261 1 310595 0.4398
5 乙酸乙酯 150 10.0869 1 61434 0.0191
　　由表 1 结果可知 , 丙酮 、乙酸乙酯的提取含量较低 , 乙
醇 、水的提取含量较高 , 甲醇提取含量最高。所以采用甲醇
为提取溶剂。
3.2　不同浓度甲醇对提取效果的影响　称取翻白草 5 份 ,
分别加入 60%、70%、80%、90%、95%甲醇浸泡 24h , 余项按
3.1下处理。结果见表2。
·269·中国中医药科技 2007年 7 月第 14卷第 4 期 July.2007 Vol.14 No.4
表 2 不同浓度甲醇对提取效果的影响
编号 溶剂(%) 体积(ml) 质量(g)加热时间(h)峰面积 含量(mg g)
1 60 150 10.0990 1 103374 0.0920
2 70 150 10.1951 1 140719 0.1546
3 80 150 10.2435 1 163843 0.1933
4 90 150 10.2348 1 155500 0.1790
5 95 150 10.3098 1 85120 0.0588
　　由结果可知 , 在 60%、70%、80%之间 ,提取含量随溶剂
浓度增大而增高 , 在 80%、90%、95%之间 ,提取含量随溶剂
浓度增大而减少。因此选用 80%甲醇作为提取溶剂。
3.3　不同加热时间对提取效果的影响　称取翻白草 4 份 ,
80%甲醇浸泡 24 小时 , 水浴回流 1、1.5、2、2.5 小时 , 余项按
3.1 下处理。结果见表 3。
表 3 不同加热时间对提取效果的影响
编号 体积(ml) 质量(g)加热时间(h) 峰面积 含量(mg g)
1 150 10.1748 1 161896 0.1912
2 150 10.3481 1.5 207932 0.2657
3 150 10.0365 2 175756 0.2153
4 150 10.1660 2.5 194137 0.2500
　　由表 3 可知 , 回流提取 1.5 小时 , 原儿茶酸含量最高。
因此回流时间采用 1.5小时 次。
3.4　不同料液比对提取效果的影响　称取翻白草 4 份 , 按
1:8、1:10、1:12、1:15 加入 80%甲醇浸泡 24 小时 , 余项按 3.1
下处理。结果见表 4。
表 4 不同的料液比对提取效果的影响
编号 体积(ml) 质量(g)加热时间(h) 峰面积 含量(mg g)
1 80 10.3226 1 204847 0.2612
2 100 10.1754 1 128915 0.1347
3 120 10.0384 1 81435 0.1400
4 150 10.2932 1 50577 0.0131
　　由表 4可知 , 整体上 ,随着料液比的升高 , 原儿茶酸的提
取含量呈下降趋势 ,料液比为 1:8 时提取含量最高 , 因此选
用料液比为 1:8。
3.5　不同提取次数对提取效果的影响　称取翻白草 4 份 ,
按料液比 1:8 ,用 80%甲醇浸泡24小时 , 水浴回流 1.5小时 ,
冷却 ,抽滤。按照上述操作分别提取 1、2、3 、4 次。 合并滤
液 ,浓缩 ,定容至 100ml。取溶液适量 , 离心(12000r min , 15 分
钟),微孔滤膜过滤 , 进样 10μl按照上述条件测定含量。结
果见表 5。
表 5 不同的料液比对提取效果的影响
编号 体积(ml) 质量(g) 提取次数 峰面积 含量(mg g)
1 80 10.1005 1 94695 0.0770
2 80 10.0571 2 116932 0.1156
3 80 10.2941 3 117416 0.1137
4 80 10.2585 4 134729 0.2224
　　由表 5可以看出 , 回流 4次的提取含量明显高于其它回
流次数 ,鉴于工业生产的可行性 , 提取次数选为 4 次。
4　实验结果
上实验数据可知 , 原儿茶酸的最佳提取工艺条件是:
80%甲醇 , 料液比为 1:8 ,回流提取 4 次 ,每次 1.5 小时。
5　翻白草中原儿茶酸的含量测定
5.1　供试品溶液的制备　称取翻白草粗品和根各 10.00g ,
用 80%的甲醇 80ml浸泡 24 小时 , 回流提取 4 次 , 每次 1.5
小时 , 冷却 , 抽滤 , 定容至 100ml , 取溶液适量离心(12000r
min , 15分钟),微孔滤膜过滤 , 备用。
5.2　精密度试验　精密吸取 0.039mg·ml -1溶液 10μl重复进
样 5 次 , 峰面积分别 为:423752、435656、 443495 、424864、
436532 , RSD=2.15%,满足实验测定条件。
5.3　稳定性试验　取 0.039mg·ml-1溶液分别在 0、2、4、6、8
小时内测定其峰面积 , RSD=1.90%, 表明原儿茶酸在 8 小时
内稳定 , 满足实验测定条件。
5.4　加样回收率试验　取已知原儿茶酸含量的翻白草适
量 ,加入一定量对照品 ,在最佳提取条件下回流提取 , 按上述
操作步骤进行回收率测定。结果见表 6。
表 6 回收率试验(n=5)
编号 已知量(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%) RSD(%)
1 1.7835 0.0178 1.8039 100.14
2 1.7989 0.0283 1.7943 98.20
3 1.8563 0.0164 1.8856 100.69 99.92 1.05
4 1.8024 0.0214 1.8387 100.82
5 1.8883 0.0198 1.9031 99.74
5.5　样品含量测定　茎叶的平均含量为0.3589mg g(n=3),
根的平均含量为 0.1700mg g(n=3)。
6　结论
在最佳提取条件下 , 即 80%甲醇 , 料液比为 1:8 , 回流提
取 4次 , 每次 1.5 小时 , 提取原儿茶酸较为安全。样品含量
测定结果表明。翻白草根中原儿茶酸的含量仅次于茎 、叶中
的含量 , 故应充分利用资源 ,变废为宝。
通过日内精密度考察 , RSD 为 2.15%, 说明该方法具有
较高的精密度。样品加样回收率为 99.92%, RSD为 1.05%,
结果较为满意。本法操作简便 , 结果准确 ,精密度高 , 回收率
好 ,是检测翻白草中的原儿茶酸含量的理想方法。
原儿茶酸是一个很有前途的并有待于广泛开发利用的
药物。该研究对于指导临床合理用药 , 开发翻白草中的原儿
茶酸的临床用途 ,提供了实验数据 , 具有重要的理论意义和
现实指导意义。
　　参考文献
1　青岛中草药手册编写组.青岛中草药手册.济南:山东科学技术
出版社 , 1975:263.
2　陈芳群.委陵菜化学成分的研究.华西药学杂志 ,1989;4(1):6
3　冯卫生.翻白草根中可水解单宁的研究.天然产物研究与开发 ,
1996;8(3):26
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1984;15(7):149
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(收稿:2006-09-22)
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