全 文 ：长:516 nm;柱温:25 ℃。
2.2　溶液的配制
2.2.1　对照品溶液　精密称取左旋紫草素对照品5.0 mg ,
置于 50 mL 量瓶中 , 用甲醇溶解并定容 , 作为对照品溶液 ,
质量浓度为0.1 mg·mL -1 。
2.2.2　样品溶液　精密称取样品5.0 g ,切成碎片置于小烧
杯中 ,加 20 m L甲醇 , 超声 30 min , 取上清液 , 抽滤。滤液减
压抽干 ,残渣用甲醇溶解 , 转移至 10 mL 量瓶中 , 用甲醇定
容作为供试液。进样前过滤(0.45μm 微孔滤膜)。
2.2.3　阴性样品溶液　取不含紫草的空白栓依样品溶液的
配制方法同法配制。
2.3　系统适用性试验　在“ 2.1”项色谱条件下 , 阴性样品 、
对照品 、样品溶液的色谱图见图 1。由图可见 , 样品在与左
旋紫草素对照品相应的位置 , 有相同保留时间的色谱峰
(13.8230),并且与杂质峰分离良好;阴性样品溶液对测定无
干扰。
图 1　HPLC图谱
A.左旋紫草素对照品;B.复方紫冰栓;C.阴性对照品
Fig 1　HPLC ch romatograms
A.shikonin;B.compound Zi Bing supposi tory;C.negative cont rol
2.4　标准曲线的制备　取对照品溶液 2 , 4 , 6 , 8 , 10 μL 分别
进样 ,各进样 3 次 , 取其平均值。以峰面积积分值为纵坐标
Y ,对照品进样量 X(μg)为横坐标 , 得回归方程 Y =
1563677X -46074.5 , r=0.999 5。表明左旋紫草素的进样
在0.2 ～ 1 μg 范围内线性关系良好。
2.5　精密度试验　精密吸取左旋紫草草素标准品溶液 6
μL , 连续 5 次进样的峰面积积分值为 879846 , 887615 ,
872774 , 858028 , 887425 , RSD 为1.4%。
2.6　重复性试验　取供试品栓剂 5 份 ,按样品配制项下配
制 ,每份进样 20 μL , , 取 3 次平均值 , 测定左旋紫草素含量
(μg·g -1), 结果样品平均含量为 29.2 μg·g -1 , RSD 为
2.04%。
[作者简介] 朱雪松 ,男 ,主管药师 ,电话:0719-8272347
2.7　稳定性试验　精密吸取样品溶液 , 在 0 , 2 , 4 , 6 , 8 h 进
样测定含量 ,所得峰面积的 RSD 为1.7%(n=5), 说明供试
品在制备后 8 h 内稳定。
2.8　回收率试验　取已知含量的复方紫冰栓 5.0 g , 共 5
份 ,分别精密加入对照品溶液 , 其中 1 号样2.5 m L;2 , 3 号样
5 mL;4 , 5 号样 8 mL 。按 “2.2.2” 项下方法制备溶液 , 按
“ 2.1”色谱条件测定左旋紫草素含量 , 进样 10 μL , 结果见表
1。(n=5)
2.9　样品含量测定　分别精密称取 3 批(批号 080311 ,
080425 , 080512)复方紫冰栓剂 , 按“ 2.2.2”项下样品溶液制
备方法及“ 2.1”项下色谱条件进行测定 , 结果见表 2。
3　讨论
紫草的有效成分为紫草萘醌色素 , 化学性质活泼 , 遇热
遇氧极容易氧化变色。 目前紫草制剂含量测定时供试液通
常采用加入酸 、碱 、氯仿反复萃取的方法制备。本实验中用
甲醇作为溶剂 , 用超声去除其中的氧并提取出栓剂中的紫草
素 ,尽量保留了有效成分不被氧化 ,并简化了制备步骤。
表 1　回收率试验结果(n=5)
Tab 1　Results o f recovery test(n=5)
样品含量
/μg
加入量
/μg
测得量
/μg
回收率
/ %
平均回
收率/ %
RSD
/ %
146 250 398 100.8%
146 500 640.5 98.9%
146 500 648 100.4% 99.42% 1.04%
146 800 938 99.00%
146 800 930 98.00%
表 2　样品含量测定结果(n=3)
Tab 2　Results o f content determina tion of samples(n=3)
样品批号 平均含量/μg·g-1 RSD%
080311 30.7 1.69
080425 28.7 2.68
080512 29.8 1.61
　　2005 年版中国药典一部紫草药材质量控制采用紫外分
光光度法 ,以紫草萘醌总色素的含量计。本方法以左旋紫草
素作为指标成分 , 用 HPLC 法测定其含量。 文献中[ 2-3] 用
H PLC 法测定左旋紫草素含量时 , 多选用甲醇-0.025 mo l·
L -1磷酸(85∶15)作为流动相。经试验 , 选用了甲醇-水(75∶
25)作为流动相时 ,在 516 nm 波长处基线较平稳 ,出峰时间
快 ,左旋紫草素峰无杂质干扰 ,且流动相配制方法简单 ,减少
了操作时的工作量 , 价格低廉。本实验所建立的方法准确 ,
重复性好 , 灵敏度高 ,经济适用 , 可用于本栓剂的质量控制。
参考文献:
[ 1] 　中国药典.一部[ S] .2005:238-239 , 89 ,附录 63-64.
[ 2] 　孟宪生 ,沙明,曹爱民 ,等.HPLC法测定紫草及其制剂紫金油
中左旋紫草素的含量[ J] .中草药 , 2003 , 34(7):615-616.
[ 3] 　伍毅.HP LC法测定紫草油中左旋紫草素的含量[ J] .中药新药
与临床药理 , 2005, 16(1):66-68.
[收稿日期] 2008-09-10
高效液相色谱法测定神农香菊中木犀
草素的含量
朱雪松 ,郑芳 ,李志浩　(郧阳医学院附属东风汽车公司
总医院 , 湖北 十堰 442008)
[摘要] 　目的:采用 HPLC法测定神农香菊中木犀草素的含
量。方法:采用 Kromasil-C18(4.6 mm×250 mm , 5 μm),以甲
醇-乙腈-0.8%磷酸溶液(45∶15∶40)作为流动相 , 流速为 0.5
mL·min-1 , 柱温:30 ℃,检测波长为 350 nm。结果:木犀草素
在0.0105～ 0.21 mg·mL-1范围内有良好的线性关系 ,平均加
样回收率为99.24%, RSD为1.85%。结论:本方法简便准确 ,
重复性好, 可用于神农香菊中木犀草素的含量测定。
[关键词] 　木犀草素;神农香菊;H PLC-DAD
[ 中图分类号] R927.2　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-
·1054· 中国医院药学杂志 2009年第 29卷第 12期 Chin H osp Pharm J , 2009 Jun , Vol 29 , No.12
5213(2009)12-1054-03
　　神农香菊[ Dendranthema indicum(L.)Des Monl.var.
aromaticum Q.H.Liu e t S.F.Zhang] 系菊科菊属(Dendran-
thema)的一个新变种[ 1] ,产于湖北省神农架林区 , 分布于海
拔 2000 m 以上向阳开阔的空旷地 , 全株具有特殊的浓郁香
气[ 2] 。鄂西北山区将神农香菊用于防治感冒 、头痛 、菌痢 、肠
炎 、便秘 、冠心病和高血压等疾病。其提取物已用于医药 、香
烟及化妆品方面。姜从良等[ 3]曾以杭白菊 、贡菊作对照对神
农香菊中的挥发油和总黄酮进行了定性定量分析 , 但单一成
分的定量分析未见报道。木犀草素为黄酮类成分具有明显
保肝利胆和止咳平喘的作用[4-5] , 本实验选择以木犀草素为
指标 ,研究其药材的质量 ,为神农香菊更进一步开发和利用
建立了专属性强 、灵敏度高的含量测定分析方法。
1　材料
德国 Dionex-U3000 液相色谱仪;SK5200H 超声波清洗
机(上海科导超声仪器有限公司)。木犀草素对照品(中国药
品生物检定所 , 供含量测定用 , 批号 111520-200201);甲醇 ,
乙腈均为色谱纯;水为纯化水 , 其他试剂均为分析纯。
6份神农香菊药材分别来自湖北神农架 ,经湖北中医学
院药学院中药鉴定教研室陈科力教授鉴定为菊科植物菊属
神农香菊 Dend ranthema indicum(L.)Des Monl.var.aro-
maticum Q.H .Liu et S.F.Zhang 的头状花序。
2　方法与结果
2.1　对照品溶液的制备　取经五氧化二磷减压干燥 36 h
的木犀草素对照品适量 , 精密称定 , 加甲醇制成 0.21 mg ·
mL-1 , 即得。
2.2　供试品溶液的制备　取本品粗粉0.25 g , 精密称定 , 置
具塞锥形瓶中 ,精密加入甲醇 100 mL , 精密称定 , 超声处理
(功率 300 W , 频率 50 kHz)30 min , 放冷 , 精密称定 ,用甲醇
补足减失的质量 ,摇匀 , 滤过 ,取续滤液 , 即得。
2.3　色谱条件[6] 　采用 Kromasil-C18(4.6 mm ×250 mm ,
5μm)色谱柱;流动相:甲醇-乙腈-0.8%磷酸溶液(45∶15∶
40);流速:0.5 m L·min -1 ;柱温:30 ℃;进样量:10 μL;检测
波长 350 nm ,此色谱条件下木犀草素与相邻色谱峰的分离
度良好 ,理论塔板数按木犀草素色谱峰计算为 4500。
2.4　标准曲线与线性范围　精密吸取“ 2.1”项下对照品溶
液0.5 , 1.0 , 2.0 , 5.0 , 8.0 , 10.0 m L , 分别以甲醇定容至 10
mL 量瓶中 , 摇匀 , 得到质量浓度分别为 0.0105 , 0.021 ,
0.042 , 0.105 , 0.168 , 0.210 mg·mL-1的木犀草素对照品溶
液。各精密吸取 10 μL 注入液相色谱仪 ,按上述色谱条件测
定峰面积 ,以峰面积对浓度进行线性回归 , 得到回归方程:Y
=3.5387X-0.1332 , r=0.999 8 , 表明木犀草素在0.010 5
～ 0.210 mg·mL -1范围内线性关系良好。
2.5　精密度试验　精密吸取质量浓度为0.105 mg·mL -1木
犀草素对照品溶液 10 μL ,按上述色谱条件 , 重复进样 6 次 ,
其相对保留时间稳定 ,测得的平均峰面积值为12.473 , 计算
RSD为0.75%。表明仪器精密度良好。
2.6　稳定性试验　精密吸取“2.2”项下的供试品溶液 10
μL , 分别在 0 , 2 , 4 , 6 , 8 , 10 h 进样 , 测得的平均峰面积值为
12.651 , 计算 RSD 为1.37%, 表明处理后的供试品溶液在
10 h 内稳定性良好。
2.7　重复性试验　称取同一批药材(产地:神农架 , 批号
071103)6 份 ,每份约0.25 g ,精密称定。照“ 2.2”项下平行制
备供试品溶液 , 按上述色谱条件测定样品中木犀草素的平均
含量为3.71%(g·g -1), RSD为2.33%。
图 1　HP LC色谱图
A.对照品;B.供试品;C.空白;1-木犀草素
Fig 1　HPLC chromatogram
A.reference sub stance;B.sam ple;C.b lank;1-lureolin
2.8　加样回收率试验　精密称取已知含量的神农香菊药材
(含量3.71%)6 份 ,每份 0.1 g , 分为 3 组 , 每组 2 份 , 分别精
密加入木犀草素对照品储备液(0.21 mg·mL -1)10 , 20 , 30
mL ,按“ 2.2”项下的方法制备供试品溶液 ,进样 10μL。测定
回收率 , 结果见表 1。
表 1　加样回收率试验结果
Tab 1　Result of recovery experiment
编号 取样量/ g
测得量
/mg
原有含量
/mg
加入量
/mg
回收率
/ %
平均值
/ %
RSD
/ %
1 0.1022 5.9500 3.7916 2.10 102.78
2 0.0995 5.7787 3.6915 2.10 99.39
3 0.0997 7.8086 3.6989 4.20 97.85
4 0.0995 7.8512 3.6915 4.20 99.04
5 0.1032 9.9964 3.8287 6.30 97.90
6 0.1013 9.9618 3.7582 6.30 98.47
99.24 1.85
2.9　样品测定　取不同产地采集的神农香菊药材 , 按“ 2.2”
项下方法制备供试品溶液 , 每种药材平行 3 份溶液 , 在上述
色谱条件下各进样 10 μL , 测定 , 计算样品中木犀草素的含
量 ,色谱图见图 1 , 含量测定结果见表 2。
表 2　样品测定结果(n=3)
Tab 2　Result of sample de te rmination(n=3)
批号(产地:神农架) 百分含量/ g·g -1 RSD/ %
071004 4.12 1.38
071018 2.98 2.19
071103 3.71 1.74
081026 3.57 2.83
081117 3.26 1.09
·1055·中国医院药学杂志 2009年第 29卷第 12期 Chin H osp Pharm J , 2009 Ju n , Vol 29 , No.12
3　讨论
考察甲醇 、70%乙醇 、95%乙醇和水不同溶剂对木犀草
素的提取率。结果表明水提取率最低 , 甲醇比 70%乙醇提
取率稍高。并考察了超声 、回流提取的提取效果 , 结果表明
两者的提取效率差别不大。综合考虑选择使用甲醇超声提
取效果最佳。考察了甲醇-水 , 乙腈-水 , 不同浓度的磷酸溶
液-甲醇及不同浓度的磷酸溶液-乙腈-甲醇流动相系统的分
离效果 ,结果表明甲醇-水体系分离效果较差 , 很难将样品中
的木犀草素与其他成分分开 ,甲醇-水系统用磷酸溶液调 pH
后分离效果明显改善 , 经试验发现以甲醇-乙腈-0.8%磷酸
溶液(45∶15∶40)时分离效果最好。
目前 ,神农香菊虽在神农架分布区内形成群落 , 有一定
数量 ,但分布范围不大 , 资源有限 , 应加强保护 ,本实验的药
材均采自神农架地区 ,主要对神农香菊中的黄酮类成分—木
犀草素进行了研究 ,其他类成分还有待更进一步地研究 , 建
立统一的药材质量标准。为积极进行人工繁殖和栽培 , 合理
地开发利用奠定基础 , 并为药材的质量控制的规范化 、标准
化提供了依据。
参考文献:
[ 1] 　刘启宏 ,张树藩.神农架菊属一新变种[ J] .武汉植物学研究 ,
1983 , 11(2):237-236.
[ 2] 　何俊 ,袁萍 ,王国亮.神农香菊干花精油化学成分的研究[ J] .
天然产物研究与开发 , 2000 , 12(4):71-73.
[ 3] 　姜从良 ,芦金清 , 李俊 ,等.神农香菊中挥发油 、总黄酮与杭菊
花 、贡菊花的比较研究[ J] .湖北中医学院学报 , 2001 , 3(3):48-
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用[ J] .中国临床康复 , 2006 , 10(47):82-84.
[ 5] 　赵稳兴 , 陈忠明 , 候辉 ,等.木犀草素降低 CCl4 诱导的大鼠肝
纤维化[ J] .世界华人消化杂志 , 2002 , 10(7):779.
[ 6] 　孔令钰 ,于治国.RP-HPLC 测定苦碟子药材中木犀草素的含
量[ J] .中成药 , 2007 , 29(7):1063-1064.
[ 收稿日期] 2008-11-17
[作者简介] 罗定强 ,男 ,硕士研究生,主管药师 ,电话:029-85239848 , E-mail:luodq@sina.com
高效液相色谱法测定光泡桐叶不同生
长期齐墩果酸的含量
罗定强1 ,王锡领2 ,吕桌1 　(1.陕西省食品药品检验所 ,
陕西 西安 710061;2.西安市第五医院 , 陕西 西安 710082)
[ 摘要] 　目的:测定不同生长期光泡桐叶中齐墩果酸含量。
方法:采集西安 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 和 11 月光泡桐叶进行高效液
相色谱含量测定 , 色谱条件:色谱柱为 HIMADZU VP-ODS
(250 mm ×4.6 mm , 5μm), 流动相为乙腈-水-磷酸-三乙胺
(80∶20∶0.02∶0.03), 流速为 1 mL·min-1 ,检测波长为 210
nm。结果:不同生长期光泡桐叶在 10 月份齐墩果酸含量最
高。结论:光泡桐叶不同生长期齐墩果酸的含量是不同的 ,
故在实际应用时应根据不同需要适时采收。
[ 关键词] 　光泡桐叶;齐墩果酸;生长期
[中图分类号] R927.2　　[ 文献标识码] A 　　[ 文章编号] 1001-
5213(2009)12-1056-02
　　玄参科光泡桐 Paulownia tomentosa (Thunb.)S teud.
var.tsing lingensis(Pai)Gong Tong 为我国特有的高大落
叶乔木 , 生于海拔 250 ～ 1250(1700)米 , 分布在河北 、陕西 、
山西 、甘肃等省 ,叶及木材具有止咳 、利尿 、降压等功效。近
年来发现光泡桐叶中含有齐墩果酸 、熊果酸 、芹菜素等成
分[ 1] 。其中齐墩果酸对肝损伤有一定的保护作用 , 可使升高
的血清丙氨酸氨基转移酶下降 ,加速坏死组织的修复 、促进
肝细胞再生;其制剂齐墩果酸胶囊在临床上用于急 、慢性肝
炎的辅助治疗[ 2] 。有文献报道了女贞子中齐墩果酸的含量
测定方法[ 3-5] , 光泡桐叶中齐墩果酸的含量未见报道。本实
验测定西安不同生长期光泡桐叶中齐墩果酸的含量 ,对于充
分利用其资源 、指导采收时间具有实际意义。
1　材料
LC -2010CH T 高效液相色谱仪(日本岛津公司),
LCSOLUTION 工作站;齐墩果酸对照品(中国药品生物制
品检验所 , 批号 110709-200304);供试样品经鉴定为光泡桐
叶;乙腈为色谱纯;其他试剂为分析纯;水为纯化水。
2　方法与结果
2.1　色谱条件　SHIMADZU VP-ODS 柱(4.6 mm ×250
mm , 5μm);流动相:乙腈-水-磷酸-三乙胺(80∶20∶0.02∶
0.03);体积流量:1.0 mL·min -1;检测波长 210 nm;柱温:
30℃;理论板数以齐墩果酸计算应不低于 3000。
2.2　溶液的制备
2.2.1　对照品溶液的制备　精密称取齐墩果酸对照品
8.96 mg , 加无水乙醇制成每 1 mL 含0.358 4 mg的溶液 ,作
为对照品储备液。精密吸取对照品储备液 5 mL 置 10 mL
量瓶中 , 用无水乙醇稀释至刻度 , 摇匀 , 作为对照品溶液
(0.179 2 g·L-1)。
2.2.2　供试品溶液的制备　取本品细粉约 0.5 g , 精密称
定 ,置索氏提取器中 ,加乙醚适量 , 连续回流提取 6 h , 滤过 ,
滤液挥干溶剂 , 残渣加无水乙醇溶解并转移至 10 m L 容量
瓶中 , 摇匀 ,用0.45 μm 微孔滤膜滤过 , 取续滤液 ,即得。
2.3　样品测定法　分别精密吸取对照品溶液 、供试品溶液
和无水乙醇各 5 μL ,按上述色谱条件测定 , 即得。样品中齐
墩果酸分离情况见图 1。
2.4　线性关系　分别精密吸取上述对照品溶液 2 , 4 , 6 , 8 , 10
μL ,在上述条件下测定峰面积 ,以进样量(X)对峰面积(Y)作
标准曲线, 计算回归方程为Y =506 700.892 9X+95 158 , r=
0.999 9 ,在0.358 4～ 1.792 μg 范围内线性关系良好。
2.5　精密度试验　精密吸取0.179 2 g·L-1齐墩果酸对照
品溶液 5 μL , 重复进样 5 次 , 测定峰面积积分值 , 色谱峰面
积 RSD 为0.36%。
2.6　重复性试验　分别精密取同一批样品(10 月份采集)6
份 ,按供试品溶液制备方法同法制备 ,分别测定 , 平均含量为
2.886 mg·g -1 , RSD 为1.32%。
2.7　稳定性试验　取同一供试品溶液(10 月份采集)分别
在 0 , 2 , 4 , 8 , 12 , 24 h 进样 , 记录色谱峰面积 , RSD 为1.22%,
表明稳定性良好。
2.8　加样回收率试验　分别精密称取已知含量光泡桐叶细
粉(10 月份采集)约 0.25 g , 平行 6 份 , 分别精密加入齐墩果
酸对照品储备液 2m L , 挥干溶剂后 , 按供试品溶液同法制
·1056· 中国医院药学杂志 2009年第 29卷第 12期 Chin H osp Pharm J , 2009 Jun , Vol 29 , No.12