全 文 ：2015 年 11 月第 22 卷第 11 期 中国中医药信息杂志 ·79·
安石榴苷在 Caco-2 细胞的摄取特性研究
谢莉 1,田莉 1,2,高晓黎 3
1.新疆医科大学中医学院,新疆 乌鲁木齐 830011；
2.新疆名医名方与特色方剂学重点实验室,新疆 乌鲁木齐 830011；3.新疆医科大学药学院,新疆 乌鲁木齐 830011
摘要：目的 研究安石榴苷在 Caco-2细胞的摄取特性。方法 采用 Caco-2细胞单层模型研究安石榴苷在
不同时间、浓度、pH 值、温度、P-糖蛋白抑制剂条件下对细胞摄取的影响。采用高效液相色谱法测定安石榴
苷在细胞中的含量。结果 安石榴苷在 0.024 8～0.992 µg范围内呈良好线性关系(r＝0.997 9)。安石榴苷在
Caco-2细胞上的摄取呈现一定的时间、浓度和 pH值依赖性,且 P-糖蛋白抑制剂能显著增加安石榴苷的摄取量。
结论 该方法操作简单、灵敏,安石榴苷在 Caco-2细胞上的摄取主要是被动转运,P-糖蛋白参与安石榴苷的转
运过程。
关键词：安石榴苷；Caco-2细胞；摄取；高效液相色谱法
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2015.11.022
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2015)11-0079-04
Uptake Property Study on Punicalagin in Caco-2 Cells XIE Li1, TIAN Li1,2, GAO Xiao-li3 (1.College
of TCM, Xinjiang Medical University, Urumqi 830011, China；2.Xinjiang Key Laboratory of Famous Prescription and
Science of Formula, Urumqi 830011, China；3.College of Pharmacy, Xinjiang Medical University, Urumqi 830011,
China)
Abstract：Objective To study the uptake property of punicalagin in Caco-2 cells. Methods Caco-2
cell monolayer model was used to research the effects of punicalagin on cell uptake in different
times, concentrations, pH values, temperatures and P-gp inhibitors. HPLC was used to determine
the content of punicalagin in cells. Results The linearity of punicalagin concentration curve was
found in the range of 0.024 8-0.992 μg (r＝0.997 9). Uptake determination of punicalagin in
Caco-2 cells absorbed a certain amount of time, concentration and pH dependence and P-gp
inhibitors could significantly increase the punicalagin uptake. Conclusion This method is simple
and sensitive to determine the punicalagin concentration in Caco-2 cells, which is mainly
passively transported. P-gp is involved in punicalagin transport process.
Key words：punicalagin；Caco-2 cells；uptake；HPLC

安石榴苷为石榴皮中的一种特异性多酚成分,约
占石榴皮总多酚含量的 65.75%,作为一种可水解的单
宁物质,其体内外均具有很强的抗氧化、抑制肿瘤及
抗动脉粥样硬化等作用[1-3]。安石榴苷极性大、分子量
大,本试验采用Caco-2细胞对安石榴苷摄取特性进行
考察,以期为口服药物临床抗肿瘤中药新制剂的研制
提供药物动力学依据。
1 细胞、仪器与试药
Caco-2 细胞株购自于武汉博士德生物工程有限
公司,细胞代数为 50 代以内。

基金项目：国家自然科学基金(81260668)
通讯作者：田莉,E-mail：304578990@qq.com
1220LC 高效液相色谱仪(美国 Aglient 公司),细
胞培养箱(美国 Thermo 公司),倒置显微镜(北京舜宇
有限公司),CO2细胞培养箱(德国Heraeus公司),超净
工作台(北京昌平长城空气净化工程公司),XS105 型
电子天平(德国梅特勒-托利多公司),电子天平(北京
赛多利斯仪器系统有限公司),电热恒温水浴锅(HHS,
上海博迅实业有限公司医疗设备厂)。
DMEM 培养基(Gibico),胎牛血清(Gibico),非必
需氨基酸(Hyclone),青霉素-链霉素双抗液(Hyclone),
胰蛋白酶(Gibico),Hanks 平衡盐溶液(Hyclone),24
孔培养板(美国 Costar 公司)。
BCA 蛋白分析试剂盒(美国 Thermo 公司),安石榴
苷对照品(成都曼思特生物科技有限公司,批号
·
MUS
品
130
研
谱
2
2.
2.
250
洗脱
20
370
板
低于
2.
适量
49
6、
行
为横
2.2
2.2
在
清
5%C
用含
心
细
内,
液,
2.2
取
表面
反
超声
液一
倍
清
含量
结果
2.2
培养
每孔
间
80·
T-13010903
标准物质,
495-201303
究院,批号 1
甲醇(Sigma
方法
1 细胞样品
1.1 色谱条
mm,5 μm)；
(0～10 mi
～30 min,70
nm；流速
数按安石榴
2000。
1.2 标准曲
,用 pH 7.
.6 µg/mL 贮备
8、10、20 µ
定量,以安石
坐标制备标
安石榴苷
.1 细胞培
T-25 培养瓶
、1%青霉素-
O2 培养箱中
0.25%胰蛋
5 min,弃上
胞密度,使细
24 h后更换
培养 14 d。
.2 样品处
出,用平衡盐
杂质。再向
复冻融3次,
粉碎(20 s
部分用 BC
甲醇,涡旋 l
液 20 μL,以
。计算单位
以 mg(药物
.3 细胞摄
14 d 后,
各加入含药
(10、20、30
C
,HPLC 纯度≥
中国食品
),盐酸维拉
00223-20010
公司)。
中安石榴苷
件 YMC-Tr
流动相：甲
n,95%→85%B
%→95%B)；
：1 mL/min；
苷的α-苷和
线的制备
4 Hanks 平
液。分别吸
L,按上述色
榴苷峰面积
准曲线。
在 Caco-2 细
养 参照文
中,用 10%
链霉素、1%非
培养。当细
白酶将细胞
清液,加入适
胞以 8×1
培养液,1周

理 参照文
溶液轻柔冲
每个孔内加
用细胞刮取
/次,25 次)
A 法测定细
min,14 500
高效液相色
剂量蛋白中
)/g(蛋白)表
取影响因素
吸去培养液
的平衡盐溶
、60、90、
hinese Jo
98%),环孢
药品检定研
帕米(中国
2),二甲基亚
含量测定
iart C18 色谱
醇(A)-0.1%
；10～20 mi
柱温：30 ℃
进样量：1
β-苷峰面
精密称取安
衡盐缓冲液
取贮备液 0
谱条件进行
(A)为纵坐标
胞的摄取特
献[4],将Ca
完全培养基
必需氨基酸
胞达到 80%
消化下来,
当的 10%完
04 个/cm2 接
内隔日换液
献[5],将细
洗细胞表面
入 1 mL 蒸馏
器刮下细胞
后振摇混匀,
胞蛋白含量
r/min 离心
谱法(HPLC)
吸收药物的
示。
考察 参照
,用平衡盐溶
液 1 mL,分
120 min)、
urnal of
菌素A(国家
究院,批
食品药品检
砜(DMSO)、
柱(4.6 mm
磷酸(B),梯
n,85%→70%
；检测波长
0 µL。理论
积总和计算
石榴苷对照
溶解稀释,
.5、1、2、
分析,外标法
,进样量(µ
性
co-2细胞培
(含 10%胎牛
等)置 37 ℃
～90%融合时
1000 r/min
全培养基调
种于 24 孔
,1周后每日
胞从培养箱
3次,去除细
水,在-80
,置于Ep管中
所得细胞裂
,另一部分加
10 min,取
测定安石榴
量,即摄取量
文献[6],细
液洗涤细胞
别考察培养
浓度(25、5
Informatio
药
号
定
色
×
度
B；
：
塔
不
品
得
4、
进
g)
养
血
、
,
离
整
板
换
中
胞
℃
,
解
2
上
苷
,
胞
。
时
0、
100、
8.0)、
维拉帕
2.3
采
表示,
计学意
3 结
3.1
3.1.1
白细胞
榴苷细
悬液＋
特征峰
扰,表
注
3.1.2
6 765
安石榴
的线性
3.1.3
苷对照
每次
明仪器
样品于
峰面积
3.1.4
(49.6
浓度安
别进样
榴苷
n on TCM
200、400、
温度(4、2
米、环孢菌
统计学方法
用 SPSS18
组间比较采
义。
果
方法学考察
专属性
悬液、空白
胞摄取的样
安石榴苷对
保留时间
明此方法可
A
：A.空白细胞悬
C.安石榴苷
图 1
线性范
368.72X＋4
苷进样量在
关系。
精密度与
品溶液按“
10 µL,记录
精密度良好
0、30、60
,RSD＝3.5
回收率试
µg/mL)、
石榴苷对照
3 次,记录
对照液的回
5 10 15
5
Nov
500 µg/mL)、
5、37 ℃)、
素 A)对安石

.0 统计软件
用 t 检验。

在“2.1.1”
细胞悬液＋
品,色谱图
照品与安
一致,空白溶
行。
C
液；B.空白细胞
细胞摄取的样品
细胞样品中安石
围 安石榴
04 023.82(
0.024 8～

稳定性试验
2.1.1”项下
峰面积,计算
。将提取出
、90、120 m
7%,表明样品
验 将用
中(24.7 µg
液,按“2.
峰面积,计算
收率分别为
1
20 25
10 15
.2015 Vol
pH 值(5.0、
P-糖蛋白抑
榴苷摄取的
进行分析。
P＜0.05 表
项色谱条件
安石榴苷对
见图 1。可见
石榴苷细胞
液在此保

B

悬液＋安石榴苷
；1.α-苷；2.β
榴苷 HPLC图
苷回归方
r 2＝0.995 8
0.992 µg 范
将配制
色谱条件重复
峰面积 RSD
的安石榴苷
in分别进样
在 2 h 内基
平衡盐溶液
/mL)、低(1
1.1”项下色
高、中、低
105.77%
1
2
5 10 15
20 25
.22 No.11
6.0、7.4、
制剂(盐酸
影响。
数据以—x±s
示差异有统
下,比较空
照品、安石
,空白细胞
摄取的样品
留时间无干

对照品；
-苷
程为 A ＝
),结果表明
围内呈良好
好的安石榴
进样 5次,
＝2.24%,表
细胞裂解液
10 µL,记录
本稳定。
配制的高
0.3 µg/mL)
谱条件,分
浓度的安石
、99.98%、
t/min
2
20 25

2015 年 11
95.62%,RSD
3.2 不同培
3.2.1 时间
Caco-2 细胞
加而迅速增
因此,后续试
图 2
3.2.2 浓度
安石榴苷的平
考察药物浓
25～200 µg
一定的线性
动扩散。因
图 3
3.2.3 pH
值含安石榴
养。结果在
苷的摄取量
境不利于细
值确定为 6.
图 4
3.2.4 温度
含安石榴苷
后分别测定
影响。结果
摄
取
量
/m
g·
g-1
2.0
1.8
1.6
1.4
1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0
1.8
1.6
1.4
1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0
摄
取
量
/m
g·
g-1
摄
取
量
/m
g·
g-1
3.5
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0
月第 22 卷
＝5.06%。符
养条件对 C
对Caco-2细
中的摄取量
加,时间超过
验确定摄取
时间对细胞摄取
对Caco-2细
衡盐溶液加
度对细胞摄
/mL 范围内细
关系(见图 3
此,后续试验
浓度对细胞摄取
值对 Caco-2
苷的平衡盐
溶剂 pH 值为
远高于 pH 值
胞对安石榴
0。
pH值对细胞摄取
对Caco-2细
的平衡盐溶
不同温度对
表明,随温度
5.0 6
第 11 期
合测定要求
aco-2 细胞摄
胞摄取的影
在开始阶段
60 min 后摄
时间为 60
安石榴苷的影响
胞摄取的影
入Caco-2细
取的影响。
胞摄取速率
),符合一级
确定给药浓
安石榴苷的影响
细胞摄取的
溶液,加入
6.0 时 Cac
8.0 时,见
苷的吸收。
安石榴苷的影响
胞摄取的影
液,在 pH 值
Caco-2 细胞
的升高,安石
浓度/µg·mL
pH 值
.0 7.4
时间/min

。
取特性的影
响 安石榴
随培养时间
取量逐渐降
min,见图 2。
(—x±s,n＝3)
响 取不同
胞中,培养6
结果药物浓
与药物浓度
动力学,被视
度为 200 µg
(—x±s,n＝3)
影响 取不
Caco-2 细胞
o-2 细胞对安
图 4。说明碱
后续试验溶
(—x±s,n＝3)
响 取200
6.0、给药 6
摄取安石榴
榴苷的摄取
-1
8.0
中国中医药
响
苷在
的增
低。


浓度
0 min,
度在
具有
为被
/mL。

同 pH
中培
石榴
性环
液 pH

µg/mL
0 min
苷的
量随
之
3.
按
溶
定
Ca
糖
增

环
维
对
注
4

特
间
摄
和
25
表
pH
石
低
基
式
显
升

白
的
皮
是
抑
其
信息杂志
增加,见图 5
图 5 温
2.5 P-糖蛋
上述摄取方
液、37 ℃、
P-糖蛋白抑
co-2 细胞摄
蛋白抑制剂
加,见表 1。
表 1 P-糖蛋白
组别
孢菌素 A 组
拉帕米组
照组
：与对照组比较
讨论
本试验考
性,结果表明
、浓度、温度
取量呈时间
。Caco-2 细
～200 µg/m
明安石榴苷
值条件的摄
榴苷的摄取
,可能因为安
结构而显弱
,使细胞膜渗
示,摄取量随
高,细胞内酶
Caco-2细
、多药耐药
胃肠道上皮
细胞[7],是多
与底物结合
制剂可抑制
中环孢菌素
1.8
1.6
1.4
1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0
摄
取
量
/m
g·
g-1

。
度对细胞摄取安
白抑制剂对
法,在 200 µ
pH 6.0、给
制剂(环孢
取安石榴苷
后 Caco-2 细

抑制剂对 Caco-
浓度(µmo
50
100

,*P＜0.05
察了安石榴苷
,安石榴苷在
、pH 值及
依赖性增加
胞的摄取量
L 范围内表
的摄取机制可
取情况比较
,在弱碱性条
石榴苷分子
酸性,在偏碱
透性降低,摄
温度上升而
活性增加。
胞能够表达
相关蛋白等
细胞、肝实质
药耐药基因
后将其从细胞
其外排作用
和维拉帕米是

石榴苷的影响(—x±
Caco-2 细胞
g/mL 含安石
药 60 min
菌素 A、盐
的影响。结果
胞对安石榴
2细胞摄取安石榴
l/L) 摄
1
1
1
在 Caco-2
Caco-2 细
P-糖蛋白抑
,60 min 后
与药物浓度
现出一级速
能为被动扩
发现,弱酸性
件下药物的
量较大,具
性环境中易
取量减少。
增加,可能

出多种转运载
,P-糖蛋白广
细胞、肾、
调控的外排
浆中排出细
,增加其底物
典型的 P-
温度/℃
·81
s,n＝3)
摄取的影响
榴苷的平衡
条件下,分别
酸维拉帕米)
表明,加入
苷摄取量明
苷的影响(—x±s)
取量(mg/g)
.846±0.109*
.989±0.203*
.353±0.373
细胞中的摄
胞的摄取受
制剂的影响,
摄取量逐渐
呈线性关系,
率过程的特征
散。通过不
条件有利于
摄取量明显
有较多的酚
水解成盐的
温度考察结
因为随着温
体,如P-糖
泛分布在人
血脑屏障的
蛋白,主要功
胞。P-糖蛋
的细胞浓度
糖蛋白抑制剂
·

盐
测
对
P-
显
取
时
其
饱
在
,
同
安
降
羟
形
果
度
蛋
体
内
能
白
,
。
·82· Chinese Journal of Information on TCM Nov.2015 Vol.22 No.11
红芪药材性状及鉴别研究
张平 1,黄聪琳 2,3,张明童 1,杨静 1,王晓琳 2,3
1.甘肃省药品检验研究院,甘肃 兰州 730070；2.甘肃省中医院,甘肃 兰州 730050；
3.甘肃省中医药研究院,甘肃 兰州 730050
摘要：目的 研究红芪药典标准,优化红芪药材的质量标准。方法 从性状、薄层色谱鉴别、高效液相色
谱(HPLC)测定、水分、总灰分、醇溶性浸出物等方面对 8批红芪药材质量标准进行研究。结果 红芪药材性状
描述有别于以往文献记载,薄层色谱鉴别采用乙酸乙酯-三氯甲烷-水(4∶9∶1)展开系统,效果优于 2010 年版
《中华人民共和国药典》红芪标准。以芒柄花素为对照,建立了红芪 HPLC特征图谱。结论 本研究所建立的红
芪薄层鉴别方法简单易行、准确可靠。
关键词：红芪；薄层色谱；芒柄花素；高效液相色谱法；特征图谱
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2015.11.023
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2015)11-0082-04
Study on Properties and Identification of Hedysari Radix Medicinal Materials ZHANG Ping1,
HUANG Cong-lin2,3, ZHANG Ming-tong1, YANG Jing1, WANG Xiao-lin2,3 (1.Drug Inspection Institute in Gansu
Province, Lanzhou 730070, China；2.Gansu Province Hospital of Traditional Chinese Medicine, Lanzhou 730050；
3.Gansu Institute of Traditional Chinese Medicine, Lanzhou 730050, China)
Abstract：Objective To study the pharmacopoeia standards of Hedysari Radix；To optimize the
quality standards of Hedysari Radix medicinal materials. Methods Quality standards of eight
batches of Hedysari Radix medicinal materials were studied from the aspects of properties, TLC
identification, HPLC determination, the content of water and total ash, alcohol soluble extract, etc.
Results The property description was different from the previous literature. The effects of TLC
identification using ethyl acetate-chloroform-water (4∶9∶1) system is better than the standards
in 2010 edition of Chinese Pharmacopoeia. With formononetin as reference, the HPLC
characteristic spectrum of Hedysari Radix was established. Conclusion The TLC identification
method is simple, accurate and reliable.
Key words：Hedysari Radix；TLC；formononetin；HPLC；characteristic spectrum

基金项目：甘肃省科技重大专项(1002FKDA048)
通讯作者：王晓琳,E-mail：wlhw1210@163.com

本研究表明,环孢菌素 A 和盐酸维拉帕米能明显促进
Caco-2 细胞对安石榴苷的摄取,说明安石榴苷摄取过
程中有 P-糖蛋白的参与,安石榴苷是 P-糖蛋白的底
物。
参考文献：
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中国农业科学,2009,42(11)：4035-4041.
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外摄取、转运及外排动力学[J].药学学报,2004,39(10)：839-843.
(收稿日期：2015-05-12)
(修回日期：2015-05-28；编辑：陈静)