全 文 ：药物分析杂志 h Ci nJh Pr m a A na lZX ) (5
,
25 ( 1 1 ) 一 139 1 一
H P L C 法测定芜英籽中的绿原酸
李锋 , 解成喜 ’ , 张丽静 , 范维刚
(新疆大学理化测试中心 乌鲁木齐 83 0( )4 6 )
摘要 目的 :采用 PH L C 法测定芫姜籽中绿原酸的含量 。 方法 : 色谱柱为 HyeP sr il 一 O D S 柱 ( 6
.
0
~
x 125 ~
,
5 卿 ) , 以甲
醉 一 0 . 4 % 乙酸 ( 25 : 75 )为流动相 ,流速为 1 . o mL · 而 n 一 ’ ,柱温为室温 ,检测波长 328 nl ,进样量 5 卜L 。 结果 :在上述色谱条
件下 ,绿原酸对照品的峰面积与其质量在 0 . 0巧 一 0 . 106 卜g 范围内线性关系良好 , 回归方程为 Y = 更刃 3 . 85 x + 12 . 72 , r =
0
. 卯兴 ,平均回收率为 98 . 3% ( n = 3 ) 。 结论 :此方法简单快速 ,结果准确 。
关健词 :芫姜籽 ;绿原酸 ; lH, cL
Q u a int at it ve D
e et r m in a it o n o f C ih o r o g e ul c A c i d i n
C o ir a dn
u
mr S
e e d b y H P L C
1 eF n g
,
XI E Ch
e n g 一 x i * , Z H A N G iL 一 j in g
,
FA N W
e i 一 g an g
bP y
s i e s C h e面 sytr D e tec ti叱 C e n t e r , X inj ian g U垃ve rs i ty , U ru m中 83以抖 6 , C肠朋
bA
s t r a c t o bj e c廿v e : A n H p LC m e ht o d fo r ht e 甲 an it t iat v e d e t e mr i n iat o n of hcl o r o g e in e ac id in C o ir an dun se e d
was
i n v e s it g at e d
.
M e t hod
:
hT
e s
am P l
e w a s ext acr
t e d 杭 t h 5 0 % m e ht an ol s o lu t i o n an d het n an a l y z e d 场 HP L C . T卜e
o p e r a t i n g e o n d it i o n s w e er H即 e sr il 一 O DS e o l u mn ( 6 . 0 m m x 1 2 5 m m , 5 林m ) at or o m t e呷 e r a t u r e , mo b i le 户as e of
。 ht an o z 一 0 . 4 % a e e 6 C a e id ( 2 5 : 7 5 ) a t 2 . 0 m L · 而 n 一 ’ an d u v d e et e桩o n at 3 2 5 mn . R es ul 坛 : hT e er was a 即od
il n e ar er l iat
o n s h i p b e wet
e n ht e aer
a
of
e il o or g e in e a e id an d ht
e m as s Of s a m p l e i n ht e arn 罗 Of 0
.
0 1 5 一 0
.
106 林g
for
e il o or 罗 n i e ac id . hT e e o er s p o n d i n g er 笋 s s i o n e卿 at i o n w as y = 9 9 0 3 . 8 5X + 12 . 7 2 , r = 0 . 9 9 9 6 . hT e va e r a g e er -
e o ve 叮 was 9 8
.
3% (
n 二 3 )
.
C o n c lus io n : hT i
s m e ht od 1
5 5 1哪 l e , s p e e币 e an d a e e u art e ·
K e y wo
r ds
: C o ir an d
u
mr se
e d ; e il o o g e n i e a e id ; H PCL
芫姜 ( oC iar n d rU m ;以动“ m L )又名香菜 、 胡萎 ,
为伞形科芫要属一年或二年生草本植物 。 在我国东
北 、 山东 、江苏 、广西 、贵州 、西藏 、新疆等许多省区均
有栽培 。 全草具有浓烈的香气 , 其籽有驱风 、 透疹 、
健胃 、 祛痰之效川 , 还能促进 胃肠腺分泌 、 胆汁分
泌 ,有镇咳 、平喘作用 z[] , 目前在新疆维药中已得到
应用 。 绿原酸是它的有效成分之一 , 具有抗菌 、 利
胆 、降压的活性 s[] , 临床上用于治疗急性细菌感染
等引起的疾病 。 H PCL 对绿原酸的分析测定已得到
广泛的应用 [’] ,但对芫萎籽中绿原酸的分析测定还
未见报道 ,本实验采用 HPL C 法测定新疆芫婪籽中
绿原酸的含量 ,方法简便 、快速 、准确 , 为维药芫婪籽
的其他研究奠定了基础 。
1 仪器和试剂
A igl
e in H P 1 10 液相色谱仪 ,二极管阵列检测
器 。 B RAN SO N SB 32X() 一 T 超声波振荡器 ( 20 k ZH ) 。
绿原酸对照 品 ( 中国药品生物制品检定所 ) , 甲醇
(优级纯 ) , 乙酸 (分析纯 ) ,超纯水 , 芫萎籽 (购于新
疆维吾尔医医院 ) 。
2 色谱条件
色谱柱为 Hyp e sr il 一 O D S 柱 ( 6 . 0 m x 12 5
m m
,
5 叩 ) , 流动相为甲醇 一 0 . 4% 乙酸 ( 2 5 : 75 ) ,流速为 1 . 0 m L · 而 n 一 ` , 柱温为室温 , 检测波长 328
urn
,进样量 5 林L 。 色谱图见图 1 。
* 通讯作者 ( co , s op n id gn a u ht or )
一 13 9 2一 药物分析杂志 h C i nJ外 ~AI a n Z() X 5, 25 ( 1 1)
八 , 八一
图 1 对照品 ( A ) 、样品 ( B )色谱图
iF g 1 IP L C
e腼m a t o g 丑m s Of r e fe er n e e s u b satn e e ( A ) an d 日刃旧 p l e ( B )
1
. 绿原酸 ( e hl o or 罗 in e ac id )
3 溶液的制备
3
.
1 对照 品溶液 精确称取绿原酸 9 . 5 m g , 置
2 5 m L量瓶中 ,用 50 % 甲醇溶解后稀释至刻度 。 精
确移取该溶液 2 m L ,用甲醇定容于 5 m L 量瓶中 , 摇
匀 ,配成浓度为 巧 . 2 林g · m L 一 ` 的对照品溶液 , 备
用 。
3
.
2 样品溶液 精确称取 80 ℃下干燥 3 h 并粉碎
的芫姜籽粉末 2 . 0 9 ,置 50 m L 量瓶中 , 加 50 % 甲醇
45 m L 超声提取 30 面n ,冷却至室温 , 用 50 % 甲醇定
容 , 摇匀 ,经 0 . 45 林m 的微孔滤膜过滤 ,备用 。
4 线性关 系考察
在“ 2 ” 项色谱条件下 ,分别取对照品溶液进样
1
·
0
,
.2 0
,
.3 0
,
5
.
0
,
7
.
0 林L ,测定峰面积 。 以峰面积
( )Y 为纵坐标 ,对应的绿原酸的质量 ( X , 林g )为横坐
标 ,进行回归 , 回归方程为 :
Y = 9 90 3
,
85 X + 12
.
7 2 r 二 0
.
9 9 9 6
线性范围为 0 . 0 15 一 0 . 10 6 此 ,检出限为0 . 6 3 n g 。
5 精密度试验
精确吸取对照 品溶液 5 卜L , 在上述色谱条件
下 , 连续进样 5 次 , 测得峰面积的 SR D 为 0 . 5 %
(
n = 5 )
。
6 回收率试验
向已知含量的样品中分别添加绿原酸对照品
0
.
0 13 6 8
,
0
.
0 2 0 5 2
,
0
.
0 2 7 3 6 林g , 按 “ 3 . 2 ” 项制备溶
液 , 分别精确吸取 5 协L 进样 ,根据测得的样品中绿
原酸的含量计算 ,平均回收率为 98 . 3% ( n = 3 ) 。
7 重复性试验
精密称取芫萎籽粉末样品 5 份 , 按 “ 3 . 2 ” 项制
备样品溶液 ,进样 5 林L ,测定峰面积 ,计算得峰面积
的 SR D 为 1 . 3% ( n = 5 ) 。
8 样品测定
精密吸取样品溶液 5 林L ,在上述色谱条件下进
样 , 根据色谱峰面积计算绿原酸的含量 ,样品中绿原
酸的含量为 2 3 1 . 4 林g · g 一 ’ , R S D 为 0 . 7 0% ( n = 3 ) 。
9 讨论
,
.
1 检测波长的确定 用二极管阵列检测器分析
比较了绿原酸对照品色谱峰和所测样品相应色谱峰
的紫外光谱 ,试验证明 , 二者的紫外光谱一致 ,最大
吸收峰为 328 n m ,故选择检测波长为 328 ln 。
,
.
2 流动相的选择 以甲醇 一 水作流动相 , 绿原酸
峰严重拖尾 , 峰形不对称 。 加人少量乙酸后 , 分离
度 、峰形得到良好的改善 , 因此选甲醇 一 0 . 4% 乙酸
为流动相 。
,
.
3 提取方法的选择 绿原酸易溶于极性溶剂 ,故
采用 5 0% 甲醇提取 ,超声 30 m in 。
参考文献
1 D el ec it s R o aer eR i pub il
e ae OP p
u】面 5 5而 e ae , A罗n dae A e ad e面ae
is in c ae E id ts ( 中国植物志编委会 ) . lF oar eR 币u b licae oP p日 iar 。
is in c ae (中国植物志 ) . V ol 5 (第五十五卷 ) , Fasc i e u 】e l (第一分
册 ) . B e ij in g (北京 ) : cS i e nc e p er s s (科学出版社 ) , 19 7 9 . 59
2 u u y ong
一 面 n (刘勇民 ) . hP
~
0脚 ph y of io hgo r (维吾尔药
志 ) . V ol 1( 上册 ) . U ur m q l (乌鲁木齐 ) : 刀 inj an g cS ie nc e & eT hc -
n ol o留 & H y ig en e uP b il s hi n g H o u se (新疆科技卫生出版社 ) , 19 99 .
2 17
3 z H A O Yo n g 一 。he n g (赵永成 ) . Qu朋 it iat ve d at e画ant ion o f e hl o-r
罗 in c ` id i n eu c im m i a le gf b y ih gh 伴 rfO~
ce il咖d e hrD amt o g 旧 -
p h y (高效液相色谱法测定杜仲叶中的绿原酸 ) . ch in J hC ~
-
吻 r (色谱 ) , 2以刃 , 18 ( 3 ) : 2 6 3
4 s u N u an (孙莲 ) , z H A N G U 一 jin g (张丽静 ) , M EN G 肠 i (孟磊 ) ,
et a l
.
D e t e r in n iat
o n Of e hl or 罗 in e ac i d i n m u胶 ry lvae e o b y RP -
H PLC ( RP
一
HP LC 法测定桑叶中绿原酸的含量 ) . ch 讯 几司自
价汤 刀几邵 (中草药 ) , 2 00 3 , 3 4 ( l ) : 7 8
(本文于 2 0 5 年 2 月 2 日修改回 )