全 文 ：北京农学院学报　２０１６，３１ （１）：
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ
ｈｔｔｐ：／／ｂｎｘｂ．ｃｂｐｔ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ
ｄｏｉ：１０．１３４７３／ｊ．ｃｎｋｉ．ｉｓｓｎ．１００２－３１８６．２０１５．０２１０
　　收稿日期：２０１５－１０－２９
　　基金项目：国家 “十二五”科技支撑计划项目 （２０１３ＢＡＤ１０Ｂ０４－４）；公益性行业 （农业）科研专项项目 （２０１４０３０５１－０７）；
国家自然科学基金项目 （３１２７２４７８）
　　第一作者：许磊，男，硕士在读，从事中兽医研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｕｌｅｉ０１３１＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
　　通信作者：蒋林树，男，博士，教授，研究方向：反刍动物营养与免疫，通讯地址：１０２２０６北京市昌平区北农路７号
北京农学院，Ｔｅｌ：０１０－８０７９６３６８，Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｌｓ＠ｂａｃ．ｅｄｕ．ｃｎ
刘凤华，女，博士，教授，研究方向：中兽医药，通讯地址：１０２２０６北京市昌平区北农路７号北京农学
院，Ｔｅｌ：０１０－８０７９７３０１，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｕｆｅｎｇｈｕａ１２０９＠１２６．ｃｏｍ
安石榴苷对热应激后ＩＥＣ－６细胞ＨＳＰｓ表达及凋亡影响
许　磊，梅　晨，李德银，宫　平，吕　安，张志聪，张　彤，蒋林树＊，刘凤华＊
（北京农学院动物科学技术学院／奶牛营养学北京市重点实验室，北京１０２２０６）
摘　要：【目的】本试验旨在研究安石榴苷对热应激大鼠肠上皮细胞 （ＩＥＣ－６）损伤的预防作用。 【方法】通过
ＭＴＴ法检测细胞活力，倒置显微镜观察细胞形态学变化；ＲＴ－ＰＣＲ检测 ＨＳＰ２７、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０的 ｍＲＮＡ变
化；ＡＯ／ＥＢ检测细胞凋亡。【结果】筛选热应激最佳时间为４２℃６ｈ，安石榴苷预处理细胞低中高浓度分别为
２．５、５、１０μｍｏｌ／Ｌ；药物预处理细胞后细胞损伤及凋亡程度减轻，能够显著抑制 ＨＳＰ２７、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０的
高表达。【结论】安石榴苷对ＩＥＣ－６细胞热应激损伤具有显著预防作用，ＨＳＰ２７、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０参与安石榴苷
对ＩＥＣ－６细胞热损伤预防作用的调控。
关键词：安石榴苷；ＩＥＣ－６细胞；热应激；热休克蛋白
中图分类号：Ｓ８５２．４　文章编号：１００２－３１８６（２０１６）０１－００００－０４　文献标志码：Ａ　网络出版时间：２０１５－１２－１６　９：２８
网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／１１．２１５６．Ｓ．２０１５１２１６．０９２８．０１０．ｈｔｍｌ
Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｐｕｎｉｃａｌａｇｉｎ　ｏｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＩＥＣ－６　ＨＳＰｓ　ａｎｄ
ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｈｅａｔ　ｓｔｒｅｓｓ
ＸＵ　Ｌｅｉ，ＭＥＩ　Ｃｈｅｎ，ＬＩ　Ｄｅｙｉｎ，ＧＯＮＧ　Ｐｉｎｇ，ＬüＡｎ，ＺＨＡＮＧ　Ｚｈｉｃｏｎｇ，
ＺＨＡＮＧ　Ｔｏｎｇ，ＪＩＡＮＧ　Ｌｉｎｓｈｕ＊，ＬＩＵ　Ｆｅｎｇｈｕａ＊
（Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｎｉｍａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ／Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｆｏｒ　Ｄａｉｒｙ　Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０２２０６，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ　ｗａｓ　ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ａｌｅｖｉａｔｉｏｎ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｐｕｎｉｃａｌａｇｉｎ　ｏｎ　ｒａｔ　ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ　ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌ（ＩＥＣ－６）ｉｎ－
ｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｈｅａｔ　ｓｔｒｅｓｓ．【Ｍｅｔｈｏｄｓ】Ｃｅｌ　ｖｉａｂｉｌｉｔｙ　ｗａｓ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｂｙ　ＭＴＴ，ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　ｃｅｌ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ　ｗａｓ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｂｙ　ｉｎｖｅｒｔｅｄ
ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ，ｔｈｅ　ｍＲＮＡ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ＨＳＰ２７、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｅｄ　ｂｙ　ＲＴ－ＰＣＲ，ｃｅｌｓ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｗａｓ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｂｙ　ＡＯ／
ＥＢ．【Ｒｅｓｕｌｔｓ】４２℃６ｈｗａｓ　ｓｃｒｅｅｎｅｄ　ｏｕｔ　ａｓ　ｔｈｅ　ｔｈｅｒｍａｌ　ｓｔｒｅｓｓ　ｍｏｄｅｌ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｕｎｉｃａｌａｇｉｎ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｗａｓ　２．５，５，１０μｍｏｌ／
Ｌ．Ａｌｓｏ，ｔｈｅ　ｉｎｊｕｒｙ　ａｎｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｏｆ　ＩＥＣ－６ｃｅｌｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｒｅｄｕｃｅｄ，ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　ＨＳＰ２７、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０ｓｉｇｎｉｆｉ－
ｃａｎｔｌｙ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ａｆｔｅｒ　ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｗｉｔｈ　ｐｕｎｉｃａｌａｇｉｎ．ｐｕｎｉｃａｌａｇｉｎ　ｈａｄ　ａ　ｒｅｍａｒｋａｂｌｙ　ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ＩＥＣ－６ｃｅｌ　ｉｎｊｕｒｙ　ｉｎ－
ｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｈｅａｔ　ｓｔｒｅｓｓ．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】Ｔｈｅ　ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｕｎｉｃａｌａｇｉｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｔｈｅｒｍａｌ　ｄａｍａｇｅ　ｏｆ　ＩＥＣ－６ｉｎｊｕｒｙ　ｗａｓ　ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｂｙ
ＨＳＰ２７、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｕｎｉｃａｌａｇｉｎ；ＩＥＣ－６ｃｅｌ；ｈｅａｔ　ｓｔｒｅｓｓ；ｈｅａｔ　ｓｈｏｃｋ　ｐｒｏｔｅｉｎ
　　热应激是指机体应对环境高温所产生的非特
异性应答反应［１］。研究表明，高温下动物机体通过
加速外周血液循环进行散热，造成机体组织器官缺
血损伤，动物胃肠道最先缺血而又最晚得到恢复，
２０１６年第１期 许磊 等：安石榴苷对热应激后ＩＥＣ－６细胞 ＨＳＰｓ表达及凋亡影响 ４７　
胃肠道的缺血缺氧导致肠道严重损伤［２］。热休克蛋
白（ｈｅａｔ　ｓｔｒｅｓｓ　ｐｒｏｔｅｉｎ，ｈｅａｔ　ｓｈｏｃｋ　ｐｒｏｔｅｉｎ，ＨＳＰ）
是在热应激反应中保护细胞的蛋白质，是一组高度
保守的蛋白质家族，它们主要起分子伴侣功能［３］。
正常生理条件下，ＨＳＰｓ处于低表达状态，在高温条
件下能够被激活表达，从而增加细胞耐热性，降低
细胞热损伤程度和抵抗细胞凋亡［４］。ＨＳＰｓ在细胞
中持续合成并且不断高表达，细胞其他蛋白合成就
会受到抑制，维持细胞生存的蛋白不能及时合成，
细胞存活将会受到严重威胁［５］。在热应激过程中调
节 ＨＳＰｓ持续高表达可以促进细胞存活。
石榴皮性酸、味涩、具有涩肠、止血、杀虫之功
效［６］。研究表明，石榴皮提取物能够改善束缚浸水
应激大鼠胃肠的运动机能［７］。安石榴苷（Ｐｕｎｉｃａｌａ－
ｇｉｎ，ＰＵＮ）是石榴科植物石榴（Ｐｕｎｉｃａ　ｇｒａｎａｔｕｍ
Ｌ．）干燥果皮提取物主要活性成分之一，具有抗凋
亡［８］、抗氧化、抗炎、抑制肿瘤细胞增殖等活性［９］。
本试验采用ＩＥＣ－６细胞建立细胞热损伤模型，研究
安石榴苷对ＩＥＣ－６细胞热应激后 ＨＳＰｓ基因表达水
平以及凋亡影响。
１　材料与方法
１．１　试验材料
细胞系：大鼠肠上皮细胞（ＩＥＣ－６），北京协和细
胞资源中心。药品：ＤＭＥＭ，ＧＩＢＣＯ公司；胎牛血
清，ＧＩＢＣＯ公司；０．２５％胰酶－ＥＤＴＡ溶液，ＧＩＢＣＯ
公司；溴化乙锭（ＥＢ），中国北京科昊泽生物技术有
限公司；吖啶橙（ＡＯ），Ｓｉｇｍａ公司；反转录试剂盒，
美国伯乐公司；荧光定量ＰＣＲ试剂盒，安捷伦公司。
主要试验仪器：ＣＯ２培养箱，Ｔｈｅｒｍｏ，３１００型；
单人双面净化工作台，中国苏州净化设备有限公
司；倒置生物显微镜，ＯＬＹＭＰＵＳ，ＩＸ７１／ＩＸ２。
１．２　试验方法
１．２．１　细胞培养　培养液成分为８９．２％含酚红
ＤＭＥＭ、１０％胎牛血清（ＦＢＳ）、０．７％胰岛素、０．１％
青链霉素混合液，４℃保存备用。当ＩＥＣ－６细胞融
合率达到９０％以上时，用０．２５％的胰酶－ＥＤＴＡ进
行消化，然后加入细胞培养液，进行传代。
１．２．２　ＭＴＴ筛选热应激时间及安石榴苷作用浓
度　胰酶－ＥＤＴＡ消化并收集ＩＥＣ－６细胞，调整细胞
密度为１×１０５ｃｅｌ／ｍＬ，９６孔培养板每孔加入２００
μＬ细胞悬液，３７℃、５％ ＣＯ２培养。细胞８０％融合
后，弃掉上清，ＰＢＳ清洗２遍后，加入不含血清无色
培养基２００μＬ，细胞置于４２℃、５％ＣＯ２培养箱中，
分别作用１、３、６、９、１２ｈ后加入１０μＬ　ＭＴＴ（５ｍｇ／
ｍＬ），培养４ｈ后弃去上清，加入１００μＬ　ＤＭＳＯ溶
解，震荡混匀，酶标仪４９０ｎｍ读取各孔的吸光值。
按照上述方法培养细胞，分别加入２．５、５、１０、２０、４０
μｍｏｌ／Ｌ的安石榴苷（不含血清的无色培养基配制）
作用４８ｈ后，ＭＴＴ法测定细胞活力。
１．２．３　总ＲＮＡ的提取及ＲＴ－ＰＣＲ测定　细胞分
为空白对照组、模型组和２．５、５、１０μｍｏｌ／Ｌ药物剂量
组。用药组预防给药６ｈ后弃去培养基，ＰＢＳ清洗２
遍，加入不含血清的无色培养基，４２℃、５％ＣＯ２热应
激６ｈ，生物学倒置显微镜下观察并拍照。弃去培养
基，ＰＢＳ洗２遍，采用Ｔｒｉｚｏｌ一步提取法提取细胞总
ＲＮＡ，核酸蛋白仪测定总ＲＮＡ浓度，按照反转录试
剂盒说明将 ｍＲＮＡ反转录成ｃＤＮＡ，－２０℃保存。
ＨＳＰ２７、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０引物序列见表１。
表１　基因引物序列
Ｔａｂ．１　ｇｅｎｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｐｒｉｍｅｒｓ
名称
ｎａｍｅ
序列
Ｐｒｉｍｅｒ　Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
产物／ｂｐ
Ｐｒｏｄｕｃｔ
β－ａｃｔｉｎ
Ｆｏｒｗａｒｄ：５′－ＴＴＧＴＣＣＣＴＧＴＡＴＧＣＣＴＣＴＧＧ－３′
Ｒｅｖｅｒｓｅ：５′－ＡＴＧＴＣＡＣＧＣＡＣＧＡＴＴＴＣＣＣ－３′
２１８
ＨＳＰ２７
Ｆｏｒｗａｒｄ：５′－ＡＧＧＡＧＣＧＧＣＡＧ　ＧＡＴＧＡＧ－３′
Ｒｅｖｅｒｓｅ：５′－ＧＧＡＣＡＧＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＡＣ－３′
１０１
ＨＳＰ７０
Ｆｏｒｗａｒｄ：５′－ＧＴＧＧＣＴＣＴＡＣＣＣＧＣＡＴＣＣＣ－３′
Ｒｅｖｅｒｓｅ：５′－ＧＣＡＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＡＴＡＧＧＣ－３′
１１４
ＨＳＰ９０
Ｆｏｒｗａｒｄ：５′－ＣＧＣＴＧＡＧＡＡＡＧＴＧＡＣＣＧＴＴＡＴＣ－３′
Ｒｅｖｅｒｓｅ：５′－ＡＣＣＴＴＴＧＴＴＣＣＡＣＧＡＣＣＣＡＴＡＧ－３′
１２６
１．２．４　荧光染色　细胞分为空白对照组、模型组、
１０μｍｏｌ／Ｌ药物剂量组。盖玻片经过高压灭菌后置
于６孔板中，每孔加入密度为１×１０５ｃｅｌ／ｍＬ细胞２
ｍＬ，置于３７℃含有５％ＣＯ２培养箱中培养，细胞融
合率达到８０％后，分别作相应处理，取出盖玻片，
ＰＢＳ洗３遍，ＡＯ／ＥＢ避光染色１０ｍｉｎ，荧光显微镜
下观察并照相，最终双色图像叠加处理。
１．２．５　数据处理　结果采用ＳＰＳＳ　１１．５软件对数
据进行分析。
２　结果分析
２．１　热应激时间及安石榴苷药物浓度筛选结果
如图１所示，ＩＥＣ－６细胞分别热应激１、３、６、９、
１２ｈ后，在１ｈ和３ｈ细胞活力变化不显著，随时间
延长，细胞活力在６ｈ后显著下降（Ｐ＜０．０１），热应
激６ｈ时细胞存活率在７０％左右，最终选择４２℃热
应激６ｈ为本试验模型。
如图２所示，不同浓度安石榴苷２．５、５、１０、２０、
４０μｍｏｌ／Ｌ作用ＩＥＣ－６细胞４８ｈ后，细胞活力变化
４８　 北　京　农　学　院　学　报 第３１卷
图１　热应激对细胞活力的影响
Ｆｉｇ．１　Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｈｅａｔ　ｓｔｒｅｓｓ　ｏｎ　ｃｅｌ　ｖｉｔａｌｉｔｙ
不显著，因此安石榴苷药物浓度在４０μｍｏｌ／Ｌ无明
显细胞毒性，本试验最终选择２．５、５、１０μｍｏｌ／Ｌ为
安石榴苷药物作用浓度。
２．２　安石榴苷对细胞热应激后形态学的影响
如图３所示，对照组（Ｃ）细胞生长正常、多角形、
细胞贴壁紧密、排列不规则、呈现典型的“铺路石样
图２　安石榴苷对细胞活力的影响
Ｆｉｇ．２　Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＰＵＮ　ｏｎ　ｃｅｌ　ｖｉｔａｌｉｔｙ
（ｐａｖｅｍｅｎｔ－ｌｉｋｅ）”。热应激组（ＨＳ）４２℃６ｈ大量
细胞皱缩、脱落、漂浮于细胞培养上清液中，剩余贴
壁细胞生长分散、细胞边缘模糊不清、“铺路石样
（ｐａｖｅｍｅｎｔ－ｌｉｋｅ）”形态被破坏。细胞用药组（ＨＳ＋
ＰＵＮ）预防给药６ｈ后，能够显著减缓热应激造成的
细胞损伤，并呈现剂量依赖性。
图３　细胞形态学变化
Ｆｉｇ．３　Ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｃｅｌ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ
２．３　安石榴苷对细胞热应激后ＨＳＰｓ表达的影响
由图４可知，与对照组相比，ＨＳＰ２７、ＨＳＰ７０与
ＨＳＰ９０表达量在热应激组、２．５、５、１０μｍｏｌ／Ｌ药物预防
组均极显著升高（Ｐ＜０．０１）；与热应激组相比，ＨＳＰ２７、
ＨＳＰ７０与ＨＳＰ９０表达量在５、１０μｍｏｌ／Ｌ药物预防组
均极显著降低（Ｐ＜０．０１），且 ＨＳＰ７０表达量在２．５
μｍｏｌ／Ｌ药物预防组也极显著降低（Ｐ＜０．０１）。
图４　ＨＳＰｓ　ｍＲＮＡ的表达
Ｆｉｇ．４　Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆＨＳＰｓ　ｍＲＮＡ
注：与对照组相比，＃为Ｐ＜０．０５，＃＃为Ｐ＜０．０１；与热应激组
相比，＊为Ｐ＜０．０５，＊＊为Ｐ＜０．０１
Ｎｏｔｅ：＃ａｎｄ＃＃ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｍｅａｎ　Ｐ＜０．０５ａｎｄ　Ｐ＜０．０１ｃｏｍ－
ｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ；＊ａｎｄ ＊＊ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｍｅａｎ　Ｐ＜
０．０５ａｎｄ　Ｐ＜０．０１ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｈｅａｔ　ｓｔｒｅｓｓ－ｔｒｅａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ
２．４　安石榴苷对细胞热应激后凋亡的影响
经ＡＯ／ＥＢ双染后，荧光显微镜下观察，对照组
（Ｃ）细胞呈现均一的绿色荧光，热应激（ＨＳ）后，细
胞染色增强，细胞呈现几种不同状态，呈现绿色固
缩状为早期凋亡细胞，呈现橘黄色的为晚期凋亡细
胞，呈现红色的为死亡细胞，安石榴苷预处理（ＨＳ＋
ＰＵＮ）后，能够显著抑制热应激引起的细胞凋亡（见
图５）。
图５　观察药物预处理对ＩＥＣ－６细胞热应激后凋亡的影响
Ｆｉｇ．５　Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＰＵＮ　ｏｎ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ａｆｔｅｒ　ｈｅａｔ　ｓｔｒｅｓｓ
３　讨　论
肠道是动物吸收营养物质的主要场所，对动物
生长发育至关重要。ＩＥＣ－６细胞系属于未分化的上
２０１６年第１期 许磊 等：安石榴苷对热应激后ＩＥＣ－６细胞 ＨＳＰｓ表达及凋亡影响 ４９　
皮干细胞，来源于新生正常大鼠的小肠，同时具有
隐窝样上皮细胞的特征，在一定条件下能够分化成
为成熟的肠上皮细胞［１０］。栾伟丽和郭凯军等人发
现高温可以诱导大鼠肠上皮细胞（ＩＥＣ－６）活力降低
和凋亡［１１］。本试验采用 ＭＴＴ法筛选细胞热应激
模型，在４２℃热应激６ｈ后，与对照组相比细胞活
力极显著降低，并随热应激时间增加，细胞活力进
一步降低，热应激６ｈ时细胞活力虽有降低但不会
影响细胞正常生长，最终确定４２℃６ｈ作为本试验
热应激模型。研究显示，安石榴苷对小鼠巨噬细胞
无明显细胞毒性作用［１２］。本试验中，ＭＴＴ筛选药
物作用的最佳浓度时，结果显示安石榴苷在０～４０
μｍｏｌ／Ｌ无显著细胞毒性作用，最终选择药物作用
的低、中、高浓度分别为２．５、５、１０μｍｏｌ／Ｌ。
高温能够诱导细胞形态学发生变化［１１］，本研究
发现在热应激条件下，细胞皱缩、脱落、漂浮于细胞
培养上清液中，剩余的贴壁细胞生长分散、细胞边
缘模糊不清、“铺路石样（ｐａｖｅｍｅｎｔ－ｌｉｋｅ）”形态被破
坏。不同剂量安石榴苷预处理细胞后，随剂量增
加，细胞形态逐渐趋于正常。ＨＳＰｓ作为细胞内最
重要的分子伴侣，在帮助蛋白质正确折叠、移位、维
持和降解中发挥重要作用，应激状态下能够增强机
体耐受能力［１３］。Ａｆｓｈｉｎ、Ｓａｍａｌｉ等人发现 ＨＳＰｓ高
表达可抑制应激引起细胞凋亡［１４］。研究发现，
ＨＳＰｓ持续过量表达将使其他维持细胞存活的蛋白
合成受阻，威胁细胞生存［１５］。高志民、王亚芳等发
现香苇二石口服液能够显著降低 ＨＳＰｓ的表达，进
而缓解热应激对大鼠的影响［１６］。本试验中，安石榴
苷预处理细胞后，ＨＳＰ７０在不同剂量组均可降低，
并呈现剂量依赖性，然而 ＨＳＰ２７和 ＨＳＰ９０只有在
中剂量和高剂量时能够降低其ｍＲＮＡ的表达水平，
这可能是由于不同基因对药物的敏感性不同，这些
结果证明安石榴苷能够使 ＨＳＰｓ表达量降低，进而
使其不会持续过高表达，促进细胞存活。ＡＯ／ＥＢ
染色更进一步证明，安石榴苷预处理细胞后，细胞
凋亡显著减少，安石榴苷能够显著缓解热应激造成
的细胞损伤。安石榴苷如何调控 ＨＳＰｓ的表达与细
胞凋亡之间的关系还有待于进一步研究。
综上所述，安石榴苷预处理细胞能够显著减少
热应激造成的细胞损伤，显著降低由热应激诱导升
高的 ＨＳＰｓ　ｍＲＮＡ表达量，并呈现剂量依赖性，同
时安石榴苷能够显著降低热应激诱导的细胞凋亡。
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ｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ｉｎｓｕｌｔ　ｖｉａ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｃｙｔｏ－
ｋｉｎｅｓ，ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｂｃｌ－２，ｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｂａｘ，ａｎｄ
ｃａｓｐａｓｅ－３［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ａｎｄ　ｃｅｌｕｌａｒ　ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１５，
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ｏｉｄ　ｃｅｌ　ｃｕｌｔｕｒｅｓ　ｆｒｏｍ　ｒａｔ　ｓｍａｌ　ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｂｙ
ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃ　ａｎｄ　ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ　ｃｒｉｔｅｒｉａ［Ｊ］．Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｃｅｌ
ｂｉｏｌｏｇｙ，１９７９，８０（２）：２４８－２６５
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温应激诱导ＩＥＣ－６产生凋亡［Ａ］．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ
Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｃｅｎｔｅｒ，Ｈｏｎｇ　Ｋｏｎｇ，Ｗｕｈａｎ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｔｅｃｈ－
ｎｏｌｏｇｙ，２０１０：４８５－４８８
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Ｌｉｕ　Ｆ，Ｘｕ　Ｊ．Ｐｕｎｉｃａｌａｇｉｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｓ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ　ｉｎ　ＬＰＳ－ｉｎ－
ｄｕｃｅｄ　ＲＡＷ２６４．７ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ　ｖｉａ　ｔｈｅ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＴＬＲ４－
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