全 文 ：高效液相色谱法同时测定保健食品中的安石榴甙和鞣花酸———赵海燕，等 —333—
实验技术与方法
高效液相色谱法同时测定保健食品中的安石榴甙和鞣花酸
赵海燕，杨永红，刘泰然，陈忠辉，罗仁才
(北京市疾病预防控制中心，北京 100013)
摘 要:目的 建立同时测定保健食品中安石榴甙、鞣花酸的高效液相色谱法(HPLC)方法。方法 采用迪马 钻
石Ⅱ(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)色谱柱，乙腈 + 0. 2%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱，在波长 256 nm 下进行检测。
结果 方法的线性范围:α 安石榴甙 24 ～ 240 μg /ml;β 安石榴甙 56. 0 ～ 560 μg /ml;鞣花酸 60. 0 ～ 600 μg /ml。相关
系数 r 为 0. 999 7 ～ 0. 999 9;检出限:α 安石榴甙、β 安石榴甙、鞣花酸分别为 2. 36、2. 78、2. 67 μg / g;定量限:7. 08、
8. 34、8. 01μg / g。高低两个浓度水平加标回收率 97. 5% ～ 104%;相对标准偏差(RSD)均 ＜ 2. 5%。结论 本方法
简便、快速、准确、重现性好，适用于保健食品中安石榴甙和鞣花酸的测定。
关键词:安石榴甙;鞣花酸;高效液相色谱法;保健食品;功效成分
中图分类号:O657. 72 文献标识码:A 文章编号:1004-8456(2012)04-0333-03
Simultaneous determination of ellagic acid and punicalagins in health food by HPLC
Zhao Haiyan，Yang Yonghong，Liu Tairan，Chen Zhonghui，Luo Rencai
(Beijing Center for Disaese Control and Prevention，Beijing 100013，China)
Abstract:Objective To establish a method for the simultaneous determination of ellagic acid and punicalagins in health
food by high performance liquid chromatography (HPLC)． Methods Chromatographic separation was carried out by using
a Diamonsil C18 (Ⅱ)column (4. 6 mm × 250 mm，5 μm)． The mobile phases were acetonitrile and 0. 2% H3 PO4
aqueous solution with an optimized gradient elution． The detective wavelength was 256 nm． Results The detection limits
of α ellagic acid，β ellagic acid and punicalagins were 2. 36，2. 78 and 2. 67 μg / g，respectively． The linear range for α
ellagic acid，β ellagic acid and punicalagins were 24-240 μg /ml，56. 0-560 μg /ml and 60. 0-600 μg /ml，respectively，
and all of which showed a correlation coefficient of over 0. 999 7. The recoveries of three analytes at two spiked levels were
ranged from 97. 5% -104% and all of the relative standard deviation (RSD)were less than 2. 5% ． Conclusion This
method was validated to be simple，rapid，accurate and reproducible for the determination of Ellagic Acid and punicalagins
in health food．
Key words:Ellagic acid;punicalagins;HPLC;functional foods;functional components
收稿日期:2012-04-23
作者简介:赵海燕 女 工程师 研究方向为分析化学
从石榴皮和石榴籽中提取的成分被用作保健
食品原料，含有鞣花酸(ellagic acid) ，安石榴甙
(punicalagins:α + βPunicalagin)和其他酚类化合物
等。安石榴甙和鞣花酸是其中两个主要的有效成
分，安石榴甙为鞣花酸聚合化合物，人体吸收后，降
解形成鞣花酸。鞣花酸可用于防治结肠癌，食管
癌、肝癌、肺癌、舌及皮肤肿瘤等病症。还可增强人
体免疫功能，并起到降压、镇静功效。国内外已开
发以其为原料的保健食品及药品。目前，鞣花酸的
测定方法文献已有报道［1］，而安石榴甙的测定方法
还未见报道。本文建立了 HPLC 同时测定石榴提取
物中安石榴甙(α + β)和鞣花酸含量的方法，可用于
石榴提取物及相关产品中的测定。
1 材料与方法
1. 1 仪器与试剂
高效液相色谱仪，配备有 Waters Allains2695 泵
控及自动进样系统，以及 Waters 2996 二极管阵列检
测器、离心机、超声震荡器。
乙腈、甲醇、磷酸(色谱纯) ;二甲基亚砜(分析
纯) ;试验用水均为超纯水。破壁液:400 ml 二甲基
亚砜 + 100 ml10%柠檬酸。
安石榴甙对照品购自同田生物公司 (纯度
99%，α 安石榴甙 30%;β 安石榴甙 70%，批号
P100923) ;鞣花酸对照品购自 Sigma 公司(纯度
99%，批号 093k1374)。
对照品储备液的配制:分别精密称取安石榴
甙、鞣花酸对照品 0. 020 0 g 于两个 10. 00 ml 容量
瓶中，用甲醇溶解，并定容至刻度。α 安石榴甙浓度
为 600 μg /ml;β 安石榴甙浓度为 1 400 μg /ml;鞣花
DOI:10.13590/j.cjfh.2012.04.002
—334—
中国食品卫生杂志
CHINESE JOURNAL OF FOOD HYGIENE 2012 年第 24 卷第 4 期
酸浓度为 2 000 μg /ml。
标准系列的配制:分别移取 0. 4，1. 0，2. 0，
4. 0 ml安石榴甙储备液和 0. 3、0. 75、1. 5、3. 0 ml 鞣
花酸储备液于 10. 00 ml 容量瓶中，用甲醇稀释并定
容至刻度。 α 安 石榴 甙 的 浓 度 为 24，60，120，
240 μg /ml;β 安石榴甙的浓度为 56，140，280，560
μg /ml;鞣花酸的浓度为 60，150，300，600 μg /ml。
1. 2 液相色谱条件
色谱柱:迪马 钻石Ⅱ4. 6 mm × 250 mm，5 μm;
流动相:A:0. 2%磷酸水溶液;B:乙腈;
梯度洗脱: A B
0 min 95 5
15 min 70 30
17 min 70 30
18 min 95 5
检测 波 长 256 nm;流 速 1. 0 ml /min;柱 温
35 ℃。
1. 3 样品前处理
准确称取石榴粉样品 0. 20 ～ 2. 00 g 于 50. 0 ml
离心管中，加入 10 ml 破壁液及 10 ml 甲醇，超声提
取 30 min 后冷却至室温，用甲醇定容至刻度，摇匀，
再以 10 000 r /min 离心 10 min，取上清液 10 μl 液相
色谱仪测定。
1. 4 定性及定量
分别取标准和样品各 10 μl 进样，HPLC 测定。
以保留时间和扫描光谱图定性，外标法定量。
1. 5 计算公式
C = c × V
1 000 m
式中 C:样品中待测组分的含量，mg / g;
c:样品中待测组分的测定浓度，μg /ml;
m:样品重量，g;
V:定容体积，ml;
1 000:单位转换，μg / g 变为 mg / g。
2 结果与讨论
2. 1 流动相中酸的选择
分别选择纯水和 0. 05%，0. 1%，0. 2% 的磷酸
作为流动相进行试验，在纯水时安石榴甙和鞣花酸
峰型拖尾很严重，而且 α 安石榴甙和 β 安石榴甙无
法完全分离;并且在色谱柱上保留强度比较弱，出
峰时间过早，不能够与杂质分离。随着酸度的增
加，当在 0. 2%磷酸为流动相时，有效地改善了 3 个
组分的峰型，而且增强了组分的保留时间，更有效
地与杂质分离开(图 1 和图 2)。
2. 2 检测波长的选择
根据 3 种组分的紫外光谱图(见图 3) ，两种安
图 1 标准色谱图
Figure 1 The chromatogram of standards
图 2 样品色谱图
Figure 2 The chromatogram of sample
石榴甙的最佳吸收波长均为 258. 7 nm，而鞣花酸的
最佳吸收波长为 254. 0 nm，本文选择 256. 0 nm 作
为检测波长可以满足 3 种组分较高的灵敏度测定
要求。
2. 3 样品提取液的选择
3 种组分均极易溶于甲醇，而破壁液具有极强
渗透性，可以更有效地提取出组分，实验证明加入
破壁液可使提取效率提高 40%。选择加入不同体
积的破壁液进行试验，当加入 10. 0 ml 破壁液时可
以完全提取样品中的组分。
2. 4 线性关系及检出限
3 种个组分在线性范围内与响应值呈良好的线
性关系，其结果见表 1。
高效液相色谱法同时测定保健食品中的安石榴甙和鞣花酸———赵海燕，等 —335—
图 3 3 种组分的光谱图
Figure 3 The spectrogram of there components
表 1 方法的线性范围、回归方程及检出限
Table 1 The linear range，regression equation and the
limits of detection of the method
组分
线性范围
(μg /ml)
标准曲线 r
定性检
出限
(μg / g)
定量检
出限
(μg / g)
α 安石榴甙 24 ～ 240 y = 7080x － 16800 0. 9999 2. 36 7. 08
β 安石榴甙 56 ～ 560 y = 6270x － 53800 0. 9997 2. 78 8. 34
鞣花酸 60 ～ 600 y = 9900x － 102000 0. 9999 2. 67 8. 01
2. 5 回收率试验
称取同类粉末空白样品 2. 00 g 为本底做加标
回收试验，其结果见表 2。
表 2 加标回收实验
Table 2 The recovery of standard addition
组分
加标量
(mg / g)
测定值
(mg / g)
平均回收率
(%)
α 安石榴甙 1. 00 1. 04 104. 0
4. 50 4. 53 101. 0
β 安石榴甙 2. 00 1. 96 98. 0
9. 00 9. 02 100. 0
鞣花酸 2. 00 1. 95 97. 5
9. 00 8. 87 98. 6
2. 6 精密度试验
对同一石榴粉样品取样 6 份。按 1. 3 方法处理
后进样测定，3 个组分的 RSD 分别为 1. 8%、2. 5%、
1. 9%。结果见表 3。
表 3 方法精密度试验
Table 3 The precision of the method (n = 6)
组分 测定结果(mg / g) RSD(%)
α 安石榴甙 35. 9、35. 8、34. 9、35. 9、34. 7、34. 5 1. 8
β 安石榴甙 42. 7、43. 7、41. 6、43. 6、42. 4、41. 1 2. 5
鞣花酸 41. 6、42. 3、40. 6、41. 3、40. 1、40. 7 1. 9
2. 7 实际样品的测定
对同一样品 3 个批次进行试验，其结果见表 4。
表 4 样品测定结果
Table 4 The detected results of samples (mg / g)
样品批次 α 安石榴甙 β 安石榴甙 鞣花酸
20110613 35. 0 41. 8 41. 6
20110615 35. 7 40. 3 41. 7
20110617 34. 9 40. 2 41. 3
3 结论
经方法学研究及实际样品测定结果表明，本文
所建方法简便易行、快速、准确，而且重现性很好。
可以用于石榴提取物及相关产品中安石榴甙(α +
β)和鞣花酸的测定。
参考文献
［1］ 李鸿飞，陈蕾，李明，等 ． 石榴皮中鞣花酸的测定［J］． 新疆中
医药，2008，26(6) :43.
［2］ 周本宏，吴振华，刘春，等 ． 高效液相色谱法测定石榴皮中鞣
花酸含量［J］．广东药学院学报，2005，21(6) :693-694.
［3］ 李小萍，梁琪，辛秀兰，等 ． 高效液相色谱法测定红树莓中鞣
花酸含量［J］．安徽农业科学，2009，37(24) :11345-11346.
［4］ 贝玉祥，杨阳，郭英，等 ． 高效液相色谱法测定诃子中鞣花酸
的含量［J］．时珍国医国药，2009，20(9) :2178-2179
［5］ 刘艳，宋立秋，范俊娟，等 ． HPLC 法测定蓝莓中鞣花酸含量
［J］．江苏农业科学，2008，3:217-219.
［6］ 袁永兵，张兰珍，郭亚健，等 ． RP-HPLC 法测定叶下珠中没食
子酸、柯里拉京和鞣花酸的含量［J］． 北京中医药大学学报，
2009，32(1) :56-58
［7］ 王予祺，斯建勇，刘新民，等 ． 蛇莓中鞣花酸和短叶苏木酚羧
酸的分离鉴定及含量测定［J］． 天然产物研究与开发，2008，
20(4) :667-671.
［8］ 曲文娟，张渭洁，徐敏瑶，等 ． 高效液相色谱测定石榴皮水提
取物中 4 种多酚化合物的含量［J］． 分析测试学报，2011，30
(12) :1425-1429.
［9］ 刘玉革，王松标，刘胜辉，等 ． 高效液相色谱法测定芒果果皮
中游离鞣花酸含量［J］．广东农业科学，2011(18) :128-129.