全 文 ：HPLC法测定梅花草中山柰酚 、槲皮素的含量
蔡　颖
(南京市白下建中中医院 , 江苏 南京 210004)
　　摘要:目的　建立高效液相色谱法测定梅花草中山柰酚 、槲皮素的含量。方法　采用 ThermoHyperailBDSC18(4.6
mm×250 mm, 5μm)色谱柱 , 流动相为甲醇 -0.4%磷酸(47∶53);检测波长为 360nm, 流速为 1.0 mL· min-1;柱温为 30
℃。结果　山柰酚 、槲皮素分别在 0.010 4 ～ 0.052μg· mL-1、 0.025 4～ 0.127 0 μg· mL-1范围内峰面积与进样量呈良
好的线性关系 , r分别为 0.999 7、0.999 8。结论　该方法简便 ,准确 , 可以用于梅花草药材的质量控制。
关键词:高效液相色谱法;梅花草;山柰酚;槲皮素
中图分类号:R927.2　文献标识码:A　文章编号:1672-7738(2011)06-0322-03
Determinationofkaempferol, quercetininwidewordparnassiaherbbyHPLC
CAIYing
(NanjingBaixiaJianzhongHospitalofChineseMedicine, Nanjing21004 , China)
　　Abstract:Objective　ToestablishanHPLCmethodforthedeterminationofkaempferol, quercetininwidewordparnassia
herb.Methods　ThermoHyperailBDSC18 Column(4.6 mm×250 mm, 5 μm)wasadopted, themethanol-0.4% phosphoric
acid(47∶〗53)wasusedasmobilephase, thedetectionwavelengthwas360 nm, theflowratewas1.0 mL· min-1.Thecolumn
temperaturewas30 ℃.Results　Thelinearrangeofkaempferolwas0.010 4 ～ 0.052 μg(r=0.999 7), thelinearrangeof
quercetinwas0.025 4 ～ 0.127 0μg(r=0.999 8).Conclusion　Themethodwassimpleandaccurate.Itcanbeusedforquali-
tycontrolofwidewordparnassiaherb.
　　Keywords:HPLC;Widewordparnassiaherb;Kaempferol;Quercetin
　　梅花草 (parnassiapalastrisL.)又称白侧草 、马蹄草 、黄
草 小白花 , 为虎耳草科梅花草属植物突隔梅花草的全草或
根。具有清热解毒 、消肿 、排脓之效 ,临床主要用于黄疸型肝
炎 、肺结核 、喉炎 、腮腺炎 、脉管炎等疾病 [ 1] 。目前 , 文献记载
梅花草 , 其主要化学成分为黄酮 、生物碱类化合物 , 但无质量
控制方法。其中山柰酚 、槲皮素是梅花草中黄酮化合物主要
成分。而山柰酚 , 槲皮素的抗菌作用 [ 2] 、对免疫功能增强作
用 [ 3] 、抗病毒作用 [ 4]和梅花草的 “抗菌 、抗炎”药理作用相吻
合。为控制梅花草的质量 , 确保药材疗效 , 本文采用高效液
相色谱法测定其中山柰酚 、槲皮素的含量 , 对梅花草的质量
进行控制。
1　仪器与试药
1.1　仪器　Aglilent1100 高效液相色谱议 , Agilent1100
VWD检测器 Chem-stations工作站(Agilent公司 , 美国);梅
特勒 -托利多 AB135-S电子分析天平(瑞士);SG1200H超
声波清洗器(上海冠特超声仪器厂), DL-1溶剂过滤器(天
津市东康科技有限公司)。
1.2　试药　山柰酚对照品(中国药品生物制品检定所提供 ,
供含量测定用 , 批号:110861 -200808)。槲皮素对照品(中
国药品生物制品检定所提供 ,供含量测定用 , 批号:100081 -
200106)。梅花草药材由内蒙古蒙药股份有限公司提供 , 经
南京市中医药大学中药鉴定教研室鉴定。甲醇为色谱纯 ,水
为高纯水 , 所用其他试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　色谱条件　色谱柱:ThermoHyperailBDSC18(4.6 mm
×250mm, 5 μm);流动相:甲醇 -0.4%磷酸(47∶53);流速:
1.0 mL· min-1;柱温:30 ℃;检测波长为 360 nm;进样量:10
μL;理论板数按山柰酚峰计算应不低于 1 500,槲皮素峰计算
应不低于 3 000。采用此色谱条件 , 供试品及对照品色谱分
离度良好 , 见图 1。
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图 1　梅花草中山柰酚 、檞皮素测定的HPLC图谱
1.檞皮素　 2.山柰酚
2.2　溶液的制备
2.2.1　对照品溶液的制备　精密称取经五氧化二磷减压干
燥 36h的山柰酚对照品 、槲皮素对照品适量 , 分别置于 100
mL量瓶中 ,加入甲醇溶解 , 并稀释至刻度 , 振荡摇匀。分别
精密量取上述山柰酚对照品 、槲皮素对照品各 5.0 mL, 置 50
mL量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 , 即得山柰酚对照品溶
液 , 浓度为 0.104 μg· mL-1;槲皮素对照品溶液 , 浓度为 0.
254μg· mL-1。
2.2.2　供试品溶液的制备　取梅花草粉末约 1 g, 过 40目
筛 , 精密称定 ,置具塞锥形瓶中 , 精密加甲醇 50 mL, 密塞 , 称
定重量 , 超声处理(250W, 40 kHz)提取 30 min, 冷却 ,再称定
重量 , 加甲醇补足减失重量 ,摇匀。精密量取该溶液 5mL,置
50 mL量瓶中 ,加甲醇稀释到刻度 ,摇匀 ,经 0.45 μm微孔滤
膜滤过 , 取续滤液作为供试品溶液。
2.2.3　线性关系　分别精密吸取山柰酚对照品溶液贮备液
(0.104 μg· mL-1)、槲皮素对照品贮备液 (0.254 μg·
mL-1)1, 2, 3, 4, 5 mL置 10 mL量瓶中 , 加甲醇稀释至刻度 ,
摇匀 , 各分别精密吸取 10 μL,按照上述色谱条件进行测定 ,
并以各对照品峰面积为纵坐标 Y, 进样量(μg)为横坐标 X,
绘制标准曲线 ,得回归方程为:山柰酚 Y=36 47.6X+4.92,
r=0.999 7;槲皮素 Y=3 765.2X-10.23, r=0.999 8。
结果表明 , 在上述色谱条件下 , 山柰酚 、槲皮素分别在 0.
010 4 ～ 0.052 μg· mL-1、0.025 4 ～ 0.127 μg· mL-1范围内
与峰面积呈良好的线性关系。
2.2.4　精密度试验　精密量取上述对照品溶液 10 μL,按上
述色谱条件重复进样 5次测定 ,结果山柰酚 、槲皮素的 RSD
分别为 0.61%(n=5)、0.52%(n=5), 表明精密度良好。
2.2.5　稳定性试验　取梅花草粉末 0.5 g, 按 “ 2.2.2”项下
方法制备供试品溶液 ,按 “ 2.1”项下色谱条件于 0、2、 4、6、8 h
分别精密吸取供试品溶液 10 μL进行测定 , 计算山柰酚 、槲
皮素的峰面积其 RSD分别为 0.8%、0.7%, 表明供试品在 8
h内稳定性。
2.2.6　重复性试验　取梅花草粉末 5份 , 每份 1 g,过 40目
筛 , 分别按 “ 2.2.2”项下方法制备供试品溶液 , 按 “ 2.1”项下
色谱条件测定峰面积 , 计算山柰酚 、槲皮素的平均含量分别
为 0.163 5 mg· g-1、0.076 5 mg· g-1 , RSD分别为 1.04%、
0.83%。表明该方法的重复性较好。
2.2.7　加样回收试验　精密称取已知含量的样品 6份 , 精
密测定后 , 分别加入山柰酚对照品溶液 (0.229 5 mg·
mL-1)、槲皮素对照品溶液(0.092 4 mg· mL-1)各 1 mL, 按
供试品溶液制备方法制成供试品溶液 , 并按上述色谱条件进
行分析 , 分别测定山柰酚 、槲皮素含量 、结果见表 1、2。
表 1　山柰酚加样回收试验结果 (n=6)
编号 取样量(g) 样品中含量(mg) 加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%)
1 1.086 9 0.177 7 0.229 5 0.403 9 98.56
2 1.087 5 0.177 8 0.229 5 0.403 2 98.21
3 1.087 7 0.177 8 0.229 5 0.402 1 97.73
4 1.087 8 0.177 9 0.229 5 0.401 6 97.47 98.9 0.46
5 1.088 2 0.177 9 0.229 5 0.400 5 96.99
6 1.088 4 0.177 9 0.229 5 0.405 8 99.30
表 2　槲皮素加样回收试验结果 (n=6)
编号 取样量(g) 样品中含量(mg) 加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%)
1 1.086 9 0.083 1 0.092 4 0.175 3 99.78
2 1.087 5 0.083 2 0.092 4 0.173 7 97.94
3 1.087 7 0.083 2 0.092 4 0.174 6 98.92
4 1.087 8 0.083 2 0.092 4 0.173 1 97.29 98.20 1.12
5 1.088 2 0.083 2 0.092 4 0.172 6 96.75
6 1.088 4 0.083 3 0.092 4 0.174 3 98.49
　　试验结果表明 ,该测定方法回收率良好。
2.2.8　样品测定　取梅花草药材粉末样品 3批 , 按 “ 2.2.2”
项下方法制备供试品溶液 ,取 10 μL进样(平均进行 3次),
精密测定 , 并按外标法计算山柰酚 、槲皮素含量 , 测得 3批中
山柰酚 、槲皮素的含量 , 结果见表 3。
表 3　样品含量测定结果
序号 山柰酚平均含量(mg· g-1)槲皮素平均含量(mg· g-1)
1 0.163 5±0.005 0.076 0±0.005
2 0.162 7±0.007 0.076 3±0.003
3 0.163 0±0.005 0.076 4±0.002
3　讨论
3.1　超声提取时间的选择　以超声 10, 20, 30和 45 min进
行对比 , 结果表明 , 超声 30 min已经提取完全 , 故选择超声
30 min作为本方法提取时间。
3.2　流动相的筛选　甲醇 -1%冰醋酸水溶液(37∶63)[ 5] ,甲醇
-0.4%磷酸液(50∶50)[ 6] ,甲醇 -0.1%甲酸水溶液(30∶70)[7] ,
甲醇 -0.4%磷酸(47∶53),实验结果表明 ,以甲醇 -0.4%磷酸
(47∶53)为流动相时,分离效果较好 ,确定为流动相系统。
3.3　柱温的选择　通过文献检索 , 发现在分离过程中 ,不同
文献采用室温 、35 ℃等柱温条件 , 虽然柱温对分离效果影响
较小 , 随着柱温的升高 , 保留时间有所缩短 , 峰的扩散有所改
善 , 但如果柱温过高 ,容易对色谱柱造成损伤 ,影响其使用寿
命 , 故选择 30 ℃作为柱温。
参考文献:
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·323·齐鲁药事· QiluPharmaceuticalAfairs2011 Vol.30 , No.6
更使有害物质 SO2残留。据资料显示 ,李月茹等 [ 5]对市售人
参 3个品种共 8批的样品进行了 SO2残留测定 , 其中 4批样
品 SO2含量为 0.161 ～ 1.090 g· kg-1。王兆基等 [ 6]对香港 30
种常用中药材 42个样本测定 ,发现 24个样本含有 SO2 ,其中
9个样本 SO2超过 0.5 g· kg-1。从表 1可见 ,在此次检测的
11个中药品种共 24个样本中 ,山药 、玉竹 、党参 、百合 、麦冬 、
平贝 、川贝 7个样本的 SO2 含量偏高(0.107 ～ 1.234 g·
kg-1),均超过国家食品卫生标准 GB2760 -86规定的两倍
(0.05 g· kg-1)。
3.3　目前国家有关中药材(饮片)SO2残留标准的制定还处
于摸索的阶段 , 只在《中国药典》一部(2010年版)正式收载
了二氧化硫残留量测定方法 , 但未建立中药材(饮片)SO
2
残
留量限度的国家标准 。根据我国食品卫生标准 GB2760-86
规定 , 以 SO2作为防腐剂使用不得超过 0.05 g· kg-1;国际
食品添加剂专家委员会(JECFA)对 SO2类物质作为食品添
加剂的危险性评估为:SO
2
的日容许摄入量(ADI)为 0 ～ 0.7
mg· kg-1;韩国食品医药品安全厅规定了 266种中药饮片中
SO2残留量不得超过 30 ppm(即 0.03 g· kg-1)。我国药典
标准可以参考以上标准尽早出台相关中药 SO2 含量限度标
准(建议定为不超过 50mg· g-1),才能全面控制中药材饮片
质量 , 遏制硫黄熏蒸中药材(饮片)的违法行为。
3.4　在日常中药监督抽样工作中　可以从药材颜色和气味
初步判断硫黄熏蒸情况。对于颜色过分鲜白的药材 , 如:麦
冬 、天麻 、苦杏仁等 , 它们的外观应是白中稍带淡黄色 , 若色
泽特别鲜白则可能经过硫黄熏蒸。对于小包装饮片 , 可在拆
开包装的瞬间嗅其味道;对于散装饮片可以抓一小把 , 先用
手热捂几分钟 ,再嗅其味道 , 初步确定是否有硫黄的刺激性
气味 , 最后通过实验检测 , 从而辨别出是否有经超量硫黄熏
制。
参考文献:
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