全 文 ：北方药学 2016年第 13卷第 9期
蒙药梅花草乙醇提取物体外抗肿瘤实验研究△
辛 颖 达拉胡 红 艳（内蒙古民族大学蒙医药学院 通辽 028000）
摘要：目的：研究蒙药梅花草乙醇提取物对人宫颈癌细胞（Hela细胞）的体外增殖抑制作用。方法：采用 MTT法检测梅花草乙醇提
取物的不同剂量组对 Hela细胞增殖的抑制作用；以单克隆抗体 ELISA法检测凋亡细胞。结果：梅花草乙醇提取物处理 Hela细胞
24h后，可以明显抑制 Hela细胞的增殖。与对照组相比，梅花草乙醇提取物可以明显促进 Hela细胞的凋亡。结论：蒙药梅花草的乙
醇提取物体外对 Hela细胞的增殖有抑制作用，其作用机制可能与诱导肿瘤细胞的凋亡有关。
关键词：梅花草乙醇提取物 Hela细胞 细胞凋亡 ELISA法
中图分类号：R29 文献标识码：B 文章编号：1672-8351（2016）09-0128-02
梅花草（Parnassis palustris L.），又称白侧草、马蹄草、黄草小
白花，为虎耳草科梅花草属植物突隔梅花草的全草或根，蒙古名
为那木戛纳、乌力地格和那木日因查干-其其格等，是蒙古族历
代民间常用的特色蒙药，在现代蒙医临床应用中是治疗肿瘤及
其相关疾病的常用蒙药材之一。梅花草气味甘、苦，无毒，具有
清热解毒、消肿排脓、破痞、抑希日等功效，临床主要用于黄疸型
肝炎、肺结核、喉炎、腮腺炎、脉管炎等，也可治疗腑器热性希日
病和热性痞症，即治疗肝、胆肿瘤及部分肠道肿瘤（如结肠肿瘤）
等[1，2]。
“破痞”属于一种蒙药功效，相当于现代医学中的抗肿瘤作
用。现代蒙药药理学[3]认为具有破痞功效的蒙药具有抗肿瘤活
性。蒙医理论认为“痞症”可发生于人体的各个器官，多属于继
发于各种疾病的郁结性痼疾，发病原因主要是维持人体生命的
“三根”（赫依、希日、巴达干）由于某种原因失去平衡，使“七素”
（食物精华、血、肉、脂、骨、骨髓、精液）的转化过程中因积聚凝结
而成浑浊、恶血激增、黄水淤积，在赫依的促动作用下，在人体的
某一部位形成痞块。医治痞病，不但要破痞瘤也要判明发病原
因，对症施治。长期以来，蒙医药学对于“痞症”的治疗方面积累
了非常丰富的治疗方法和传统用药经验，临床疗效显著，副作用
小，资源丰富。但存在的挑战在于如何利用现代医药学理念解
释蒙医药“破痞”功效的机制。
近年来国内外学者对中药抗肿瘤作用机制及其有效物质基
础进行了大量的研究，实验结果证实我国的传统中药具有良好
的抗肿瘤效果，副作用较小[4，5，6]。据文献查阅，目前未见国内外
专家和学者对蒙药梅花草活性化学成分和作用机制等方面的研
究报道。从天然药物的发展趋势来看，应该将化学成分和药效
学研究结合起来进行研究，应该以天然药物的有效部位为切入
点，对其有效部位进行提取分离，了解其主要活性成分，进一步
寻找其作用机制。本研究沿着天然药物研究的这一思路，首先
拟用活性追踪法对蒙药梅花草的乙醇提取物的抗肿瘤作用进行
研究，旨在通过体外实验初步评价梅花草乙醇提取物对人宫颈
癌细胞（Hela细胞）的增殖是否具有抑制作用，进一步研究梅花
草的抗肿瘤效果。
1 实验材料
1.1 细胞：人宫颈癌细胞系（Hela细胞）购自上海博谷生物科技
有限公司。
1.2 仪器：倒置相差显微镜（TS100型，日本尼康）；双人双面净化
工作台（SW-CJ-2F型，苏州智净有限公司）；酶标仪（DNM-9602
型，北京普朗责任有限公司）；水套式 CO2培养箱（3110系列，美
国 Thermo Scientific）；超纯水机（GYJ1/2-40L-S型，重庆华创责
任有限公司）；立式压力蒸汽灭菌器（YXQ-LS-100A型，上海博
讯有限公司）；鼓风干燥箱（DHG-9203A 型，上海精宏有限公
司）；电子调温电热套（98-1B型，天津市秦斯特仪器有限公司）；
超声波清洗器（KQ-100型，昆山市超声仪器有限公司）；旋转蒸发
仪（德国 Heidolph集团）；循环水式多用真空泵（SHZ-DIII型，郑
州长城仪器有限公司）；96孔培养板及培养瓶（美国 Corning公司）。
1.3 试剂：DMEM培养基（美国 Gibco公司）；胎牛血清（美国
Gibco公司）；MTT（北京索莱宝科技有限公司）；胰酶（北京索莱
宝科技有限公司）；生理盐水、乙醇、二甲基亚砜（DMSO）等试剂
均购自天津科密欧公司。
2 实验方法
2.1 药物制备：取一定量的梅花草（500g），用 95%的乙醇浸泡后
放于大圆底烧瓶中加热浸煮，每次煮 3h，提取 3次，每次所得的
煮液合并为提取液，减压浓缩干燥后得浸膏，备用。经计算得提
取率为 33.26%。用 DMSO作为梅花草乙醇提取物的溶剂用于细
胞实验。
2.2 MTT实验：用 0.08%的胰酶消化 Hela细胞后，将细胞浓度调
整为 1×105/mL，每孔 100μL细胞悬液分别接种于 96孔板中，培
养 24h后，分别加入不同浓度的梅花草乙醇提取物处理细胞，在
CO2培养箱内继续培养 24h，小心吸弃每孔内的培养液，每孔再
加入 MTT工作液（5mg/mL）50μL，继续恒温（37℃）培养 4h，终止
培养后小心吸弃孔内 MTT，每孔加入 100μL DMSO，振荡 2～
3min后使用酶标仪（选择 490nm波长）检测各孔的 OD值，记录
各组结果并计算抑制率。抑制率=（对照组 OD值-实验组 OD
值）/对照组 OD值×100%，实验重复 3次，取平均值。
2.3 ELISA检测凋亡细胞：Hela细胞加入梅花草的乙醇提取物
处理 24h后，用 PBS洗涤 2次，使用抗组蛋白和抗 DNA的单克
隆抗体 ELISA法早期检测细胞凋亡，按试剂盒的说明方法进行
操作，在酶标检测仪上于波长 405nm处测定各孔 OD值。凋亡
细胞率以富集系数 EF表示，EF值=（待测样品 OD值-本底 OD
值）/阴性对照 OD值×100%。
2.4 统计学方法：应用 SPSS17.0统计学软件进行分析，所有数据
用均数±标准差表示，多组间均数差异性比较采用单因素方差
分析，P<0.05或 P<0.01为差异具有统计学意义。
3 实验结果
3.1 梅花草乙醇提取物对 Hela细胞的增殖抑制作用：梅花草乙
醇提取物在浓度为 12.5mg/mL时对 Hela细胞表现出抑制其增
殖的作用，结果见表 1。
表 1 梅花草乙醇提取物对 Hela细胞增殖的作用
注：与对照组相比，＊＊P<0.1。
3.2 梅花草乙醇提取物对 Hela细胞凋亡的影响：与对照组相比，
梅花草乙醇提取物浓度为 12.5mg/mL 的剂量组中凋亡细胞率
（EF）明显升高（P<0.05），结果见表 2。
组别 剂量（mg/mL） OD值 抑制率（%）
对照组 —
3.125
4.617
6.25
12.5
0.76±0.1085
1.11±0.0909
1.10±0.1391
0.74±0.1368
0.45±0.0649＊＊
—
0.00
0.00
2.63
40.79
梅花草乙醇提取物
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北方药学 2016年第 13卷第 9期
表 2 梅花草乙醇提取物对 Hela细胞凋亡的影响
注：与对照组相比，＊P<0.05。
4 讨 论
肿瘤已经成为危害人类健康和幸福的杀手，防治肿瘤依然
是世界性难题。目前对肿瘤采取的手术治疗、化学药物治疗和
放射线治疗等手段的结合应用使多种肿瘤的治愈率有了极大的
提高，但肿瘤细胞的多重耐药性和抗肿瘤药物的毒副作用使寻
找新的抗肿瘤药物的研究刻不容缓。蒙药治疗肿瘤有独特的经验
和方法，临床治疗时采用辨治施治的方法。蒙药用药剂量小，有高
效、低毒、发挥复合药理作用、疗效可靠等优点，其有效成分的抗
肿瘤作用及其机理的研究已成为当今医药学领域研究的重点。
本实验研究的结果显示，梅花草乙醇提取物的不同剂量组
对 Hela细胞可以表现出不同程度的抑制作用，且呈现剂量反应
关系。细胞凋亡可以维持机体内细胞数量的动态平衡，进一步
加强机体内环境的稳定，是细胞的一种基本生物学现象[7]。实验
结果表明，梅花草乙醇提取物可以促进 Hela细胞发生早期凋
亡。综上所述，梅花草乙醇提取物在体外对 Hela细胞有抑制作
用，且其作用机制与诱导肿瘤细胞的凋亡有关。
参考文献
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疗[J].国外医学（肿瘤学分册），2000，27（5）：266-269.
△基金项目：内蒙古自治区自然科学基金资助（2016MS0817）；内蒙
古自治区高等学校科学研究项目（NJZZ16184）。
组 别 剂量（mg/mL） EF（U/mL）
对照组 —
3.125
4.617
6.25
12.5
10.5±1.45
11.8±1.68
11.6±1.32
12.4±1.81
16.2±1.57＊
梅花草乙醇提取物
注射用头孢噻肟钠无菌检查方法的适用性试验探讨
罗 丹（东北制药集团沈阳第一制药有限公司 沈阳 110027）
摘要：按照《中华人民共和国药典》（2015年版四部）通则 1101无菌检查法中适用性试验的要求，采用薄膜过滤法，对注射用头孢噻
肟钠无菌检查方法的适用性试验进行实验室研究。研究发现，以 80，000IU头孢菌素酶作为中和剂，冲洗量为 300mL，注射用头孢
噻肟钠抑菌作用可以完全消除。可以采用薄膜过滤法对注射用头孢噻肟钠进行无菌检查。
关键词：头孢噻肟钠 无菌检验 头孢菌素酶
中图分类号：R978.1+1 文献标识码：B 文章编号：1672-8351（2016）09-0129-03
头孢噻肟钠（Cefotaxime Sodium，CTX）是第三代半合成头孢
类广谱抗生素，对铜绿假单胞菌、不动杆菌、沙雷杆菌、某些厌氧
球菌，以及部分脆弱拟杆菌等具有不同程度的抑制作用[1]。对嗜
血杆菌的作用与第二代头孢菌素产品接近，对大肠埃希菌及变
型杆菌等头孢菌素敏感的革兰阴性菌也有较好的抑制作用[2]。
《中华人民共和国药典》（2015年版四部）通则 1101无菌检
查法要求，无菌制剂必须进行无菌检查。在对具有抗菌活性药
品进行无菌检查时，应首先消除其抗菌活性，并通过试验验证其
抗菌活性去除是否彻底，保证检验结果的有效性。头孢噻肟钠
对革兰阴性菌有较强的抑菌作用，如何有效地去除抑菌作用，是
其方法验证的关键。通则 1101无菌检查法中提出为消除 β-内
酰胺类抗生素的抑菌性，采用薄膜过滤法可以加入中和剂 β-内
酰胺酶，去除残留在滤膜上的头孢菌素。本文作者对注射用头
孢噻肟钠无菌检查方法的验证进行了实验室研究，为将来对其
建立系统的无菌检查方法提供技术参考。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌种：金黄色葡萄球菌 Staphylococcu aureus CMCC（B）
26003、大肠埃希菌 Escherichia coli CMCC（B）44102、枯草芽孢
杆菌 Bacillus subtilis CMCC（B）63501、生孢梭菌 Clostridium
sporogenes CMCC（B）64941、黑曲霉 Aspergillus niger CMCC（F）
98003、白色念珠菌 Candida albicans CMCC（F）98001（均来自中
国药品生物制品检定所）。
1.1.2培养基：胰酪大豆胨液体培养基（批号 20151016，北京奥博
星生物技术有限责任公司）、硫乙醇酸盐流体培养基（批号
20160406，青岛高科园海博生物技术有限公司）、沙氏葡萄糖琼
脂培养基（批号 20150316，北京奥博星生物技术有限责任公
司）、沙氏葡萄糖液体培养基（批号 1405072，北京三药科技开发
有限公司），灵敏度试验均符合《中华人民共和国药典》（2015年
版四部）通则 1101无菌检查法规定。
1.1.3试剂及缓冲液：注射用头孢噻肟钠（批号 150214，规格
1.0g，东北制药集团沈阳第一制药有限公司），青霉素酶（批号：
130441-201401，规格：3，000，000IU/mL，中国药品生物制品检
定所），头孢菌素酶（批号：20151204，规格：2，000，000IU/支，杭
州北望生物技术有限公司），0.9％无菌氯化钠溶液：氯化钠 9g，
溶解于 1L蒸馏水中。
1.1.4仪器及培养器：HTY-2000B型智能集菌仪及一次性全封
闭集菌培养器 KDGB330（杭州泰林生物技术设备有限公司）；培
养箱（型号 SHP-150，上海精宏试验设备有限公司）；电热恒温
鼓风干燥箱（型号 DHG-9246A，上海精宏试验设备有限公司）；
立式压力蒸汽灭菌器（型号 YXQ-LS-100SII，上海博讯实业有限
公司医疗设备厂）。
1.2方法
1.2.1 试验菌悬液的制备：接种 S. aureus CMCC（B）26003、B.
subtilis CMCC（B）63501 和 E. coli CMCC（B）44102 至胰酪大豆
胨液体培养基中，30℃～35℃恒温培养 18～24h；接种 C. sporo－
genes CMCC（B）64941至硫乙醇酸盐流体培养基中，30℃～35℃
恒温培养 18～24h；接种 C. albicans CMCC（F）98001 至沙氏葡
萄糖液体培养基中，20℃～25℃培养 24～48h。上述培养物用 0.9%
氯化钠溶液制成每 1mL含菌数小于 100cfu的菌悬液。接种 A.
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