全 文 ：第 44 卷第 6 期
2015 年 6 月
应 用 化 工
Applied Chemical Industry
Vol． 44 No． 6
Jun． 2015
收稿日期:2015-01-26 修改稿日期:2015-03-21
基金项目:国家自然科学基金(81202492)
作者简介:梁春辉(1975 －) ，女，陕西西安人，西安市儿童医院副主任药师，从事中药有效成分提取分离研究。电话:
13379267263，E － mail:1140917672@ qq． com
HPLC法测定青荚叶中的木犀草素和肉桂酸的含量
梁春辉1，张寒2，李雪宁3
(1．西安市儿童医院，陕西 西安 710003;2．西安医学院 药学院，陕西 西安 710021;3．兴平 408 医院，陕西 咸阳 713100)
摘 要:建立测定青荚叶中木犀草素、肉桂酸含量的 HPLC测定方法。采用反相高效液相色谱法(ＲP-HPLC) ，色谱
柱为 Thermo C18柱(250 mm × 4． 6 mm，5 μm) ，测定木犀草素:流动相为甲醇 ∶ 0． 2%磷酸水溶液(55 ∶ 45) ，流速
1． 0 mL /min，进样量 20 μL，检测波长 350 nm;测定肉桂酸:流动相为甲醇 ∶ 1． 67%冰醋酸水溶液(50 ∶ 50) ，流速
1． 0 mL /min，进样量 20 μL，检测波长 270 nm。结果表明，木犀草素进样量在 3． 4 ～ 54． 4 μg范围内，其峰面积与浓
度呈良好的线性关系(Ｒ2 = 0． 999 9) ，样品回收率为 99． 67%，肉桂酸进样量在 0． 24 ～ 2． 4 μg范围内，其峰面积与浓
度呈良好的线性关系(Ｒ2 = 0． 999 4) ，样品回收率为 93． 64%。方法专属性强，准确可靠，可用于青荚叶中木犀草
素、肉桂酸的含量测定。
关键词:青荚叶;木犀草素;肉桂酸;HPLC;紫外检测器
中图分类号:TQ 464． 2 文献标识码:A 文章编号:1671 － 3206(2015)06 － 1140 － 03
Determination of luteolin and cinnamic acid in
Helwingia with HPLC method
LIANG Chun-hui1，ZHANG Han2，LI Xue-ning3
(1． Children’s Hospital of Xi’an ，Xi’an 710003，China;2． Pharmaceutical College，
Xi’an Medical University，Xi’an 710021，China;3． 408 Hospital of Xingping，Xianyang 713100，China)
Abstract:To establish a HPLC method for content determination of luteolin in Helwingia and cinnamic
acid． Using reversed-phase high performance liquid chromatography (ＲP-HPLC) ，the chromatographic
column was Thermo C18 column (250 mm ×4． 6 mm，5 μm) ，mobile phase of methanol determination of
luteolin∶ 0． 2% phosphoric acid solution (55∶ 45) ，the flow rate was 1． 0 mL /min，the injection volume
was 20 μL，the detection wavelength was 350 nm;determination of cinnamic acid ∶ the mobile phase of
methanol∶ 1． 67% glacial acetic acid aqueous solution (50∶ 50) ，the flow rate was 1． 0 mL /min，the injec-
tion volume was 20 μL，the detection wavelength was 270 nm． Ｒesults showed that luteolin in the range of
3． 4 ～ 54． 4 μg，there was a good linear relationship between the peak area and concentration (Ｒ2 =
0． 999 9) ，sample recovery rate was 99． 67%，cinnamic acid was in the range of 0． 24 ～ 2． 4 μg，there was
a good linear relationship between the peak area and concentration (Ｒ2 = 0． 999 4) ，sample recovery rate
was 93． 64% ． This method is specific，accurate and reliable，and can be used for content determination of
luteolin in Helwingia and cinnamic acid．
Key words:Helwingia;luteolin;cinnamic acid;HPLC;UV detector
青荚叶［Helwingia japonica(Thunb) ］为山茱萸
科青荚叶属植物，又名叶上花、叶上果，全株入药，其
根味辛、微甘、性平，能驱风除湿、祛瘀活血。可治胃
痛、痢疾、便血、子宫脱出等病症。其叶入药，可治小
儿高烧，外用治烧烫伤，毒咬伤，也有清热解毒，消肿
止痛的功效。其干燥茎髓入药，药名小通草，具有清
热利尿、下乳等作用。国内外有关青荚叶的研究较
少。有文献报道关于青荚叶的化学成分有:谷甾醇、
β-胡萝卜苷、羽扇豆醇、桦木醇、桦木酸、棕榈酸甘油
酯、桂皮酸、木犀草素 7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷［1］、表
儿茶素［2］、肉桂酸、α-香树脂醇、木犀草素 7-O-β-D-
葡萄糖苷［3］、4-羟基-7-O-葡萄糖-2，3-二羟黄酮甙、
黄豆甙、5-葡萄糖芹菜甙、7-O-葡萄糖芹菜甙、4-O-葡
萄糖香豆酸、葡萄糖咖啡酸［4］等。国内外现有文献
记载中未见青荚叶中肉桂酸和木犀草素的含量测
定，因此本文采用 HPLC 法对青荚叶中肉桂酸和木
DOI:10.16581/j.cnki.issn1671-3206.2015.06.043
第 6 期 梁春辉等:HPLC法测定青荚叶中的木犀草素和肉桂酸的含量
犀草素含量进行测定。在选定的色谱条件下，供试
溶液中肉桂酸和木犀草素与相邻组分分离度良好。
经方法学考察，方法的重复性、稳定性、精密度、加样
回收率均符合有关规定，可用于该药材的质量控制。
1 实验部分
1． 1 材料与仪器
木犀草素对照品(上海金穗生物科技有限公
司，JS90108-20 mg) ;肉桂酸对照品，西安医学院化
学合成室制;甲醇，色谱纯;磷酸、乙醚、甲酸均为分
析纯;青荚叶采自秦岭太白山。
Agilent高效液相色谱仪;KQ-300B 型超声波清
洗器;GＲ-202 型分析天平。
1． 2 实验方法
1． 2． 1 色谱条件 色谱柱 Thermo C18柱(250 mm ×
4． 6 mm，5 μm) ，柱温为室温，进样量 20 μL。木犀
草素:流动相为甲醇-0． 2%磷酸水溶液(55∶ 45) ，检
测波长 350 nm;流速 1． 0 mL /min;肉桂酸:流动相为
甲醇-1． 67% 冰醋酸水溶液(50 ∶ 50) ，检测波长
270 nm，流速 1 mL /min，在以上色谱条件下，理论塔
板数为 2 000 以上，木犀草素和肉桂酸峰的分离度
均符合要求。
1． 2． 2 对照品溶液的配制
1． 2． 2． 1 木犀草素对照品溶液的配制 精密称定
木犀草素对照品 3． 4 mg，置 10 mL容量瓶中用甲醇
溶解并定容，制成每 1 mL含 0． 34 mg的木犀草素对
照品溶液。
1． 2． 2． 2 肉桂酸对照品溶液的配制 精密称定肉桂
酸对照品6． 0 mg，置 10 mL容量瓶中用甲醇溶解并定
容，制成每 1 mL含 0． 6 mg的肉桂酸对照品溶液。
1． 2． 3 供试品溶液的配制
1． 2． 3． 1 木犀草素供试品溶液的配制 称取青荚
叶药材 5 g(3 份) ，置 250 mL 带塞锥形瓶中，加
150 mL甲醇浸泡 140 min，再超声提取 1． 5 h，抽滤，
取滤液，残渣再加 100 mL 甲醇超声提取 1 h，抽滤，
取滤液，合并滤液，旋转蒸发仪蒸干，加 50 mL 水溶
解，用乙醚萃取 3 次(每次加乙醚 30 mL)萃取液水
浴蒸干，甲醇溶解，移至 25 mL容量瓶，甲醇定容，得
供试品溶液。
1． 2． 3． 2 肉桂酸供试品溶液的配制 称取青荚叶
药材 5 g(3 份) ，置 150 mL 索氏提取器中，加入
100 mL甲醇∶甲酸(95∶ 5) ，浸泡 18 h，然后用加热回
流提取 2 次，第 1 次提取 2 h，第 2 次提取 1 h，合并
两次提取液，抽滤，旋转蒸发仪蒸干，加甲醇溶解并
转移至 50 mL容量瓶中，甲醇定容，得供试品溶液。
1． 2． 4 测定方法 分别取对照品溶液和供试品溶
液 5 mL，用 0． 45 μm有机微孔滤膜过滤至微量离心
管中，精密吸取 20 μL，注入高效液相色谱仪，按
1． 2． 1节色谱条件测定。
2 结果与讨论
2． 1 木犀草素测定
分别吸取微量离心管中对照品溶液，供试品溶
液，注入高效液相色谱仪，按 1． 2． 1 节色谱条件测
定，结果见图 1、图 2。
图 1 木犀草素对照品液相色谱图
Fig． 1 Luteolin control liquid chromatogram
图 2 青荚叶供试品液相色谱图
Fig． 2 Helwingia sample liquid chromatogram
由图 1、图 2 可知，在供试品中木犀草素与对照
品色谱峰保留时间一致，达到基线分离。
2． 2 肉桂酸测定
分别吸取微量离心管中对照品溶液，供试品溶
液，注入高效液相色谱仪，按 1． 2． 1 节色谱条件测
定，结果见图 3、图 4。由图 3、图 4 可知，在供试品中
肉桂酸与对照品色谱峰保留时间一致，达到基线
分离。
图 3 肉桂酸对照品液相色谱图
Fig． 3 Cinnamic acid standard HPLC chromatogram
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应用化工 第 44 卷
图 4 青荚叶供试品液相色谱图
Fig． 4 Helwingia sample liquid chromatogram
2． 3 线性关系的考察
2． 3． 1 木犀草素线性关系 精密量取 1． 2． 2． 1 节
对照品溶液 0． 05，0． 1，0． 2，0． 4，0． 8 mL至 5 mL容量
瓶中，用甲醇溶液定容至刻度，摇匀，即得。按上述色
谱条件，分别进样20 μL，测定。以对照品进样浓度为
横坐标(X) ，峰面积积分值为纵坐标(Y)分别绘制标
准曲线，得木犀草素回归方程为 Y = 12 637X +
11． 479，Ｒ2 =0． 999 9(n = 5)。结果表明，木犀草素进
样量在 0． 003 4 ～0． 054 4 mg线性关系良好。
2． 3． 2 肉桂酸线性关系 精密量取 1． 2． 2． 2 节对
照品溶液 0． 1，0． 2，0． 4，0． 8，1． 0 mL至 5 mL容量瓶
中，用甲醇溶液定容至刻度，摇匀，即得。按上述色
谱条件，分别进样 20 μL，测定。以对照品进样浓度
为横坐标(X) ，峰面积积分值为纵坐标(Y)分别绘
制标准曲线，得肉桂酸回归方程为 Y = 1． 5E + 5X －
509． 10，Ｒ2 = 0． 999 4(n = 5)。结果表明，肉桂酸进
样量在 0． 000 24 ～ 0． 002 4 mg线性关系良好。
2． 4 重复性实验
精密量取 1． 2． 2 节木犀草素、肉桂酸及对照品
溶液各 6 份(20 μL) ，分别进样，测定峰面积。结果
木犀草素的 ＲSD = 0． 034 9%，肉桂酸的 ＲSD =
1． 98%。表明本实验重复性良好。
2． 5 稳定性实验
精密量取 1． 2． 2 节木犀草素和肉桂酸对照品溶
液，分别在 0，2，4，8，12，24 h 各进样 20 μL，分别测
定它们的峰面积。结果木犀草素和肉桂酸的 ＲSD分
别为 0． 058 7%和 1． 49%。表明二者在 24 h内稳定。
2． 6 加样回收率实验
2． 6． 1 木犀草素 取木犀草素供试液 6 份，精密量
取 500 μL，分别加入对照品溶液 100 μL，混匀，即
得。分别进样 20 μL 测定，计算加样回收率。结果
平均回收率为 99． 67%，ＲSD为 0． 26%。
2． 6． 2 肉桂酸 取肉桂酸供试液 6 份，精密量取
1 000 μL，分别加入对照品溶液 200 μL，混匀，即得。
分别进样 20 μL 测定，计算加样回收率。平均回收
率为 93． 64%，ＲSD为 1． 45%。
2． 7 样品测定
取 1． 2． 3节的供试品溶液，用 0． 45 μL 微孔滤膜
过滤至微量离心管中，取 20 μL在 1． 2． 1 节色谱条件
下分别进样测定，计算各个成分含量，结果见表 1。
表 1 样品测定结果
Table 1 Samples for the determination of results
测定项
进样量
/μL
峰面积
积分值
含量 /
mg
含量 /
(g·g － 1)
木犀草素
肉桂酸
20 60． 428 788． 5
0． 101 8
9． 765 9
2． 04 × 10 －5
1． 95 × 10 －3
3 结论
(1)有相关文献记载［5-6］，木犀草素的检测波长
有 269，283，350 nm，实验中发现在 350 nm 处木犀
草素的峰型和峰面积均十分理想，故本实验采用
350 nm对木犀草素进行检测;肉桂酸的检测波长有
270，280 nm，实验中发现在 270 nm［7-8］处肉桂酸的
峰型和峰面积均十分理想，故本实验采用 270 nm对
肉桂酸进行检测。
(2)采用高效液相色谱法测定青荚叶药材中总
黄酮(以木犀草素为指标)、肉桂酸的含量。该法灵
敏、简单易行，专属性、重复性、回收率均符合要求。
实验结果表明，在青荚叶中，木犀草素的含量太低，
实际检测意义不大。而肉桂酸的含量较高，可以考
虑用检测肉桂酸的含量来作为控制青荚叶的质量指
标成分之一。
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