全 文 ：魏艺聪，陈建雄，黄泽豪，等．ＰＣＲ方法快速鉴别绞股蓝与乌蔹莓 ［Ｊ］．福建农业学报，２０１６，３１ （３）：２６５－２６７．
ＷＥＩ　Ｙ－Ｃ，ＣＨＥＮ　Ｊ－Ｘ，ＨＵＡＮＧ　Ｚ－Ｈ，ｅｔ　ａｌ．Ｒａｐｉｄ　ＰＣＲ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇｙｎｏｓｔｅｍｍａ　ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌｕｍａｎｄ　Ｃａｙｒａｔｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ ［Ｊ］．Ｆｕｊｉａｎ
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１６，３１ （３）：２６５－２６７．
ＰＣＲ方法快速鉴别绞股蓝与乌蔹莓
魏艺聪，陈建雄，黄泽豪，车苏容＊，梁一池
（福建中医药大学药学院，福建　福州　３５０１２２）
收稿日期：２０１６－０１－２５初稿；２０１６－０２－２７修改稿
作者简介：魏艺聪 （１９８１－），男，讲师，硕士，研究方向：中药生物技术 （Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｉｃｏｎｇｗｅｉ＠１２６．ｃｏｍ）
＊通讯作者：车苏容 （１９７４－），男，副教授，主要从事中药材鉴定研究 （Ｅ－ｍａｉｌ：８６１２０４０＠ｑｑ．ｃｏｍ）
基金项目：中医药公益性行业专项 （２０１４０７００２）
摘　要：建立绞股蓝与乌蔹莓２种中药相互鉴别的特异性ＰＣＲ方法，利用ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　Ｉ染料法建立对绞股蓝与
乌蔹莓的快速鉴别方法。采集不同产地的绞股蓝与乌蔹莓各９份，通过对其叶绿体ＤＮＡ中ｔｒｎＬ－Ｆ片段进行扩
增、测序，进行多重序列比对后，根据其变异位点设计相互鉴别的特异性引物，建立特异ＰＣＲ鉴别方法，并通
过加入ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　Ｉ染料法建立对２种中药进行快速检测方法，本研究建立了对绞股蓝与乌蔹莓２种中药进行
分子鉴别方法，并建立了荧光快速检测方法。
关键词：绞股蓝；乌蔹莓；特异性ＰＣＲ；荧光检测
中图分类号：Ｒ　２８６ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００８－０３８４ （２０１６）０３－２６５－０３
Ｒａｐｉｄ　ＰＣＲ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇｙｎｏｓｔｅｍｍａ　ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌｕｍａｎｄ　Ｃａｙｒａｔｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ
ＷＥＩ　Ｙｉ－ｃｏｎｇ，ＣＨＥＮ　Ｊｉａｎ－ｘｉｏｎｇ，ＨＵＡＮＦＧ　Ｚｅ－ｈａｏ，ＣＨＥ　Ｓｕ－ｒｏｎｇ＊，ＬＩＡＮＧ　Ｙｉ－ｃｈｉ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｆｕｊｉａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｆｕｚｈｏｕ，Ｆｕｊｉａｎ　３５０１２２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ　ｒａｐｉｄｌｙ　ａｎｄ　ａｃｃｕｒａｔｅｌｙ　ｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ｔｗｏ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ，Ｇｙｎｏｓｔｅｍｍａ
ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌｕｍａｎｄ　Ｃａｙｒａｔｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ，ａ　ＰＣＲ　ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ＳＮＰ　ｉｎ　ｔｒｎＬ－Ｆ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．
Ｔｈｅ　ｈｅｒｂａｌ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｒｅｇｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｌｅｃｔｅｄ　ｆｏｒ　ｔｏｔａｌ　ＤＮＡ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｒｎＬ－Ｆ　ｇｅｎｅ
ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．Ｔｈｅ　ＳＮＰｓ　ｉｎ　ｔｒｎＬ－Ｆ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ＣｌｕｓｔｕｌＸ　２．１ｐｒｏｇｒａｍ．Ｔｈｅ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ
ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｃｏｍｐａｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ＳＮＰ　ｓｉｔｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｈｅｒｂｓ　ｔｏ　ｄｅｓｉｇｎ　ＰＣＲ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｔｏ　Ｇ．
ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌｕｍａｎｄ　Ｃ．ｊａｐｏｎｉｃａ．ｂｙ　ａｄｄｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　Ｉ　ｄｙｅ　ｔｏ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＰＣＲ，ａ　ｒａｐｉｄ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｓ
ａｃｈｉｅｖｅｄ　ｔｏ　ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ　ｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈ　ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｐｌａｎｔ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｇｙｎｏｓｔｅｍｍａ　ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌｕｍ；Ｃａｙｒａｔｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ；ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ＰＣＲ；ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
　　 绞 股 蓝 Ｇｙｎｏｓｔｅｍｍａ　ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌｕｍ （Ｔｈｕｎｂ）
Ｍａｋｉｎｏ 是 葫 芦 科 Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｅａｅ 绞 股 蓝 属
ＧｙｎｏｓｔｅｍｍａＢＬ．多年生草质藤本植物，是五加科以
外的植物中发现有人参皂苷成分的药用植物，也被
称为 “南方人参”，且绞股蓝只含二醇组皂苷而无三
醇组皂苷，因此被认为无人参皂苷作用的双重性。
现代药理和临床方面的研究证实绞股蓝具有抗肿瘤，
抗心肌缺血、缺氧作用，降低血脂、抑制肥胖作用，
抗应激作用，护肝作用，镇静、止痛、抗紧张，增
强机体免疫功能，抗衰老等多种作用［１］。由于绞股
蓝具有多种药效及保健功效，已经开发成一系列药
用或药食两用的产品，具有非常广阔的开发前景。
目前，药材市场上绞股蓝主要混淆品为乌蔹莓，
由于绞股蓝和乌蔹莓的生长环境相似，而且全草有
具有相似的形态特征，鲜品都较难分辨，而干品由
于比较松脆，容易被压碎，更加难于辨别，因此，
民间常有把乌蔹莓误认为绞股蓝，甚至有书籍上也
把乌蔹莓与绞股蓝相互混淆。目前主要从植物的显
微鉴别、化学成分等方法对绞股蓝与乌蔹莓进行鉴
定，而这些方法较为繁琐，且容易被误导。
随着分子生物学的发展，ＤＮＡ条形码鉴别技术
因不受被检测对象形态特征及发育阶段的影响，通
用性强，重复性和稳定性高，有统一易于掌握的操
作标准和流程，方便于推广，已经成为中药鉴定有
福建农业学报３１（３）：２６５～２６７，２０１６ ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｆｊｎｙｘｂ．ｃｎ
Ｆｕｊｉａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　 ｄｏｉ：１０．１９３０３／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８－０３８４．２０１６．０３．０１０
效工具，本研究分析来源于不同居群的绞股蓝与乌
蔹莓植物叶绿体ＤＮＡ　ｔｒｎＬ－Ｆ区的ＳＮＰ位点，基于
这些位点设计引物，利用该特异引物分别建立特异
扩增绞股蓝与乌蔹莓的ＰＣＲ体系，并在ＰＣＲ产物
中加入ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　Ｉ染料法对真伪结果进行快速检
测。结合ＤＮＡ快速提取技术，可大大提高检测效
率，从而建立便捷地区分２种药材的鉴定方法。
１　材料与方法
１．１　仪器与材料
ＰＣＲ仪 （Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ，型号５３３２），低温冷冻
离心机 （Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ，型号５８１０Ｒ），微量移液器
（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ），电泳系统 （北京市六一仪器厂，型
号 ＤＹＹ－１２）， 凝 胶 成 像 分 析 仪 （ＢＩＯ－ＲＡＤ
ＣｈｅｍｉＤｏｃ　ＸＲＳ），手持式紫外灯。
ＣＴＡＢ 提 取 液，ＴＡＥ 缓 冲 液， 琼 脂 糖
（Ｐｒｏｍｅｇａ公司），Ｇｏｌｄｖｉｅｗ （北京索莱宝科技有限
公司），ＤＮＡ　Ｔａｑ聚合酶 （Ｔａｋａｒａ公司），１　０００
＊ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　Ｉ染料 （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司），三氯甲
烷、无水乙醇、异丙醇均为国产分析纯。
本研究试验样品是由福建中医药大学鉴定并收
集的 采 自 不 同 产 地 的 ９ 批 样 品，为 绞 股 蓝
Ｇｙｎｏｓｔｅｍｍａ　ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌｕｍ （Ｔｈｕｎｂ．）Ｍａｋｉｎｏ。９
份乌蔹莓Ｃａｙｒａｔｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ（Ｔｈｕｎｂ．）Ｇａｇｎｅｐ。
详见表１。
表１　试验材料概况
Ｔａｂｌｅ　１　Ｂａｓｉｃ　ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ｔｅｓｔｅｄ
编号 物种 原产地
１　 Ｇｙｎｏｓｔｅｍｍａ　ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌｕｍ 福建建阳
２　 Ｇｙｎｏｓｔｅｍｍａ　ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌｕｍ 福建建阳
３　 Ｇｙｎｏｓｔｅｍｍａ　ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌｕｍ 福建建阳
４　 Ｇｙｎｏｓｔｅｍｍａ　ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌｕｍ 福建建阳
５　 Ｇｙｎｏｓｔｅｍｍａ　ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌｕｍ 福建安溪
６　 Ｇｙｎｏｓｔｅｍｍａ　ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌｕｍ 福建安溪
７　 Ｇｙｎｏｓｔｅｍｍａ　ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌｕｍ 福建漳州
８　 Ｇｙｎｏｓｔｅｍｍａ　ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌｕｍ 福建漳州
９　 Ｇｙｎｏｓｔｅｍｍａ　ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌｕｍ 福建漳州
１０　 Ｃａｙｒａｔｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ 福建建阳
１１　 Ｃａｙｒａｔｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ 福建建阳
１２　 Ｃａｙｒａｔｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ 福建永春
１３　 Ｃａｙｒａｔｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ 福建永春
１４　 Ｃａｙｒａｔｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ 福建永春
１５　 Ｃａｙｒａｔｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ 福建漳州
１６　 Ｃａｙｒａｔｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ 福建漳州
１７　 Ｃａｙｒａｔｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ 福建漳州
１８　 Ｃａｙｒａｔｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ 福建漳州
１．２　方法
１．２．１　样品基因组ＤＮＡ 的提取　采取本课题组
优化的ＣＴＡＢ法提取干燥样品的基因组ＤＮＡ，所
提ＤＮＡ稀释后作为ＰＣＲ模版用于后续试验检测。
１．２．２　扩增受试样品的ｔｒｎＬ－Ｆ序列　利用引物
ＧｃＦ与ＧｃＲ扩增ｔｒｎＬ－Ｆ序列：总体积２０μＬ，其
中包括Ｔａｑ酶１Ｕ，１０×ｂｕｆｆｅｒ缓冲液２．０μＬ，２
μｍｏｌ·Ｌ
－１引物各２μＬ，ｄＮＴＰ　２０ｎｍｏｌ，ｄｄＨ２Ｏ
补足２０μＬ。ＰＣＲ 反应程序：９４℃预变性３ｍｉｎ
后，９４℃变性 ３０ｓ，５５℃退火 ３０ｓ，７２℃ 延伸
２ｍｉｎ，３０个循环后７２℃延伸８ｍｉｎ。ＰＣＲ产物用
１．２％ 的琼脂糖凝胶电泳，以Ｇｏｌｄｖｉｅｗ染色观察。
１．２．３　引物设计　对ｔｒｎＬ－Ｆ序列的ＰＣＲ 产物进
行测序，获得１５条序列；用ＣｌｕｓｔａｌＸ　２．１软件对
所有序列进行多重序列比对，筛选绞股蓝与乌蔹莓
的鉴别位点，根据基于ＳＮＰ位点设计特异引物的
优化原则，通过鉴别位点设计绞股蓝与乌蔹莓的相
互鉴别的特异引物。
１．２．４　特异性ＰＣＲ鉴别受试绞股蓝与乌蔹莓样品
　利用可鉴别绞股蓝与乌蔹莓的特异性引物ＧｐＦ、
ＣｊＦ分别与通用引物反向ＧｃＲ构建２个ＰＣＲ体系，
反应体系同上，应用Ｔａｑ　ＤＮＡ聚合酶热反应体系，
通过退火温度梯度试验 （５０．０、５０．５、５１．６、５３．２、
５５．１、５６．７、５７．６、５８．０℃）考查不同退火温度对该
ＰＣＲ扩增体系扩增效果的影响。为了建立更加简
便的方法，在２０μＬ　ＰＣＲ产物中加入２μＬ　ＳＹＢＲ
Ｇｒｅｅｎ　Ｉ染料于３６５ｎｍ紫外波长下检测荧光。
２　结果与分析
２．１　引物设计
经测序，获得绞股蓝与乌蔹莓的ｔｒｎＬ－Ｆ序列，用
ＣｌｕｓｔａｌＸ　２．１软件对所有序列进行多重序列比对，筛
选获得绞股蓝与乌蔹莓的特异鉴别位点，发现在该
８８４ｂｐ的序列区中，位于该序列第８８～９７位点间乌
蔹莓的ｔｒｎＬ－Ｆ序列缺失，而第５８７～５９９位点间绞股
蓝ｔｒｎＬ－Ｆ序列缺失，根据第８８～９７位点间的绞股蓝
ｔｒｎＬ－Ｆ序列设计绞股蓝的鉴别引物ＧｐＦ。另外根据
第５８７～５９９位点间乌蔹莓的ｔｒｎＬ－Ｆ序列设计乌蔹莓
特异的鉴别引物ＣｊＦ，这２个特异引物可与共同反向
引物ＧｃＲ分别构建特异ＰＣＲ（图１、表２）。
２．２　特异性ＰＣＲ快速鉴别受试绞股蓝与乌蔹莓
样品
利用绞股蓝与乌蔹莓的特异性鉴别引物ＧｐＦ、
ＣｊＦ分别与共同的反向引物ＧｃＲ构建２个ＰＣＲ反
应体系，通过设计退火温度梯度测试试验，分析不
６６２ 福建农业学报 第３１卷
同退火温度对ＰＣＲ 反应效率的影响，结果显示，
这２个反应体系在退火温度５０～５５℃条件下均能
扩增出绞股蓝８０９ｂｐ的特征鉴别条带，乌蔹莓３６３
ｂｐ的特征鉴别条带。
图１　绞股蓝与乌蔹莓鉴别方法
Ｆｉｇ．１　 Ｔｈｅｏｒｙ　ｂｅｈｉｎｄ　ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ　ｆｏｒ　ｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇ　Ｇ．
ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌｕｍａｎｄ　Ｃ．ｊａｐｏｎｉｃａ
表２　试验所用引物
Ｔａｂｌｅ　２　Ｐｒｉｍｅｒｓ　ａｐｐｌｉｅｄ
名称 序列（５′～３′）
ＧｃＦ　 ＣＴＡＡＧＴＧＡＴＡＡＣＴＴＴＣＡＡＡＴＴＣＡＧ
ＧｐＦ　 ＧＡＡＡＡＣＡＡＡＴＣＡＡＡＴＡＡＧＧＧＣＴＴ
ＣｊＦ　 ＣＣＣＣＡＡＡＡＡＡＧＣＣＴＡＣＴＴＧＡ
ＧｃＲ　 ＡＧＡＴＧＧＡＣＴＧＡＧＴＣＴＡＴＧＴＣＡＡＴＴＡ
以退火５０℃，应用以上建立的ＰＣＲ反应体系，
分别对来源于不同居群的绞股蓝与乌蔹莓样品进行
测试，受试９个绞股蓝样品，９个乌蔹莓样品均能检
测到相应的阳性特征条带（图２～３），而相对应的阴
性样品则扩增不到条带。表明该ＰＣＲ体系具有特
异性，可以用于鉴别绞股蓝与乌蔹莓样品。
图２　特异性ＰＣＲ鉴别绞股蓝与乌蔹莓凝胶电泳与荧光
检测 （电泳图上方为荧光检测图）
Ｆｉｇ．２ 　 Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｇ．ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌｕｍ　ａｎｄ　Ｃ．
ｊａｐｏｎｉｃａ
注：Ｍ为ＤＬ２０００ＤＮＡ　ｍａｋｅｒ；１～９：来源不同产地的绞股蓝样
品，１０～１５为不同产地乌蔹莓样品。
图３　特异性ＰＣＲ鉴别乌蔹莓与绞股蓝凝胶电泳与荧光
检测 （电泳图上方为荧光检测图）
Ｆｉｇ．３　Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇ．ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌｕｍａｎｄ　Ｃ．ｊａｐｏｎｉｃａ
注：Ｍ为ＤＬ２０００ＤＮＡ　ｍａｋｅｒ；１～９为来源不同产地的乌蔹莓
样品，１０～１５为不同产地绞股蓝样品。
为了建立更加快捷简便的检测方法，添加２μＬ
ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　Ｉ染料于２０μＬ　ＰＣＲ产物中，然后放
置于３６５ｎｍ紫外波长下检测荧光，所建立的２个
ＰＣＲ鉴别体系所检测的阳性样品均可见荧光，而阴
性样品均无荧光（图２～３，电泳图上方为荧光检测
图）。表明该方法可用于对受试样品的快捷鉴别。
３　讨论与结论
近年来，基于条形码ＳＮＰ位点的特异性ＰＣＲ
方法对中药基源进行鉴定为解决药材的识别提供了
有效的分子手段，位点特异性ＰＣＲ 方法已被越来
越多应用于中药的鉴别，比如陈皮、人参、金银花
等［２－４］。经典ＰＣＲ检测方法，需经过多个步骤才
能完成检测，特别是完成ＰＣＲ反应后还需要进行
制胶，凝胶，电泳与成像等步骤，比较繁琐，近期
蒋超等［５］与陈康等［６］应用ＳＹＢＲ　Ｇｒｅｅｎ　Ｉ染料法对
ＰＣＲ产物荧光快速检测，可对样品的阳性与阴性
检测进行快速识别，大大提高了检测速度，为本研
究借鉴该方法建立了快速简便的检测体系。
本研究建立了特异性ＰＣＲ方法的简易检测方
法，结果显示特异性ＰＣＲ方法检测灵敏高，２０μＬ
ＰＣＲ体系中２０ｎｇ模板 ＤＮＡ即可检测到阳性条
带，试验重复性好，可用于绞股蓝与乌蔹莓植物及
其药材的简便鉴别，也将为今后有关绞股蓝与乌蔹
莓的相互鉴别提供思路。由于二者的两者功效和主
治均不相同，本技术也可有效防止药材混用误用。
参考文献：
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ｔｈｅ　ｏｒｉｅｎｔａｌ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ｐｌａｎｔ　Ｌｉｇｕｓｔｉｃｕｍ　ｔｅｎｕｉｓｓｉｍｕｍ （Ｎａｋａｉ）
Ｋｉｔａｇａｗａ（Ｋｏｒｅａｎ　Ｇｏ－Ｂｏｎ）ｂｙ　ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ　ＰＣＲ ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔａ
Ｍｅｄ，２０１０，７６（６）：６４８．
［３］ＷＡＮＧ　Ｈ，ＫＩＭ　Ｍ　Ｋ，ＫＩＭ　Ｙ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ａｕｔｈｅｎｔｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｏｒｉｅｎｔａｌ　ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ　Ｐｅｒｉｃａｒｐｉｕｍ　ｃｉｔｒｉ
ｒｅｔｉｃｕｌａｔａｅ　ａｎｄ　Ｃｉｔｒｉ　ｕｎｓｈｉｕｓ　ｐｅｒｉｃａｒｐｉｕｍ　ｕｓｉｎｇ　ＳＮＰ　ｍａｒｋｅｒｓ
［Ｊ］．Ｇｅｎｅ，２０１２，４９４ （１）：９２．
［４］ ＷＡＮＧ　Ｈ，ＫＩＭ　Ｍ　Ｋ，ＫＷＯＮ　Ｗ　Ｓ，ｅｔ　ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ａｕｔｈｅｎｔｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐａｎａｘ　ｇｉｎｓｅｎｇ　ａｎｄ　ｇｉｎｓｅｎｇ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｕｓｉｎｇ
ｒｏｂｕｓｔ　ＳＮＰ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｉｎ　ｒｉｂｏｓｏｍａｌ　ｅｘｔｅｒｎａｌ　ｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ　ｓｐａｃｅｒ
ｒｅｇｉｏｎ ［Ｊ］．Ｊ　Ｐｈａｒｍ　Ｂｉｏｍｅｄ　Ａｎａｌ，２０１１，５５ （５）：９７２．
［５］蒋超，候静怡，黄璐琦，等．快速ＰＣＲ方法在金银花真伪鉴别中
的应用［Ｊ］．中国中药杂志，２０１４，３９（１９）：３６６８－３６７２．
［６］陈康，蒋超，袁媛，等．快速ＰＣＲ方法在蛇类要药材真伪鉴别中
的应用［Ｊ］．中国中药杂志，２０１４，３９（１９）：３６７３－３６７７．
（责任编辑：林海清）
７６２第３期 魏艺聪等：ＰＣＲ方法快速鉴别绞股蓝与乌蔹莓