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(2009-06-05收稿　责任编辑徐春燕)
反相高效液相色谱法测定青荚叶中表儿茶素含量＊
刘利娥 1)■ ,李红萍 2),吴予明 1),刘 　洁 1),于　斐 1),张洪权 1)
1)郑州大学公共卫生学院卫生化学教研室 郑州 450001　2)郑州大学化工与能源学院 郑州 450001
■女 , 1966年生 ,硕士 , 副教授 ,研究方向:天然产物开发与应用 , E-mail:zzdxle66@zzu.edu.cn
　　关键词　青荚叶;高效液相色谱法;表儿茶素
　　中图分类号　R927.2
　　摘要　目的:采用反相高效液相色谱法建立青荚叶中表儿茶素含量的测定方法。方法:用甲醇-水(体积比 1:
1)为溶剂 , 超声波法提取青荚叶中的表儿茶素。采用反相高效液相色谱法。 色谱条件为:色谱柱:ZorbaxXDB-C
18
柱(4.6 mm×250 mm, 5μm);流动相组成:流动相 A, 400 mL0.04 mol/L柠檬酸 +80 mLN, N-二甲基甲酰胺 +20
mL四氢呋喃;流动相 B,甲醇;流动相的洗脱方式为等强度洗脱:流动相 A+B(体积比 85:15);流速 1.0 mL/min;柱
温:35℃;检测器为二极管阵列检测器 , 检测波长 280 nm。采用外标法定量。结果:表儿茶素线性范围为 0 ～ 364.
00 mg/L(r=0.999 9),平均回收率为 98.4%, RSD为 2.08%(n=3)。青荚叶中表儿茶素含量为(5.334 ±0.111)
mg/g。结论:该方法简便 、准确且灵敏 , 适用于青荚叶中表儿茶素含量测定。
DeterminationofepicatechininHelwingiajaponicausingreversedphase
high-performanceliquidchromatrography
LIULi′e1), LIHongping2), WUYuming1), LIUJie1), YUFei1), ZHANGHongquan1)
1)DepartmentofSanitaryChemistry, ColegeofPublicHealth, ZhengzhouUniversity, Zhengzhou450001
2)SchoolofChemicalandEnergyEngineering, ZhengzhouUniversity, Zhengzhou450001
　　Keywords　Helwingiajaponica;high-performanceliquidchromatrography;epicatechin
　　Abstract　Aim:Toestablishamethodofreversedphasehigh-performanceliquidchromatrography(RP-HPLC)tode-
terminethecontentofepicatechininHelwingiajaponica.Methods:RP-HPLCwasadopted, onacolumnofZorbaxXDB-
C18(4.6mm×250 mm, 5 μm), usingthemobilephaseofA(400 mL0.04 mol/Lcitricacid+80 mLN, N-dimethyl-
formamide+20 mLtetra-hydrofuran)+B(methanol)(85:15), ataflowrateof1.0mL/min, andthedetectionwavelength
of280nm.Results:Thecalibrationcurveofepicatechinwaslinearovertherangeof0 ～ 364.00mg/L(r=0.999 9).The
averagerecoveryratewas98.4%, andRSDwas2.08%(n=3).ThecontentofepicatechininHelwingiajaponicawas(5.
334±0.111)mg/g.Conclusion:Themethodissimple, accurate, andsensible, andissuitableforthedeterminationof
epicatechininHelwingiajaponica.
　　青荚叶 [ Helwingiajaponica(Thunb.)Dietr.]为
山茱萸科青荚叶属植物 ,又称叶上珠 ,甘南群众俗称
＊河南省教育厅自然科研基金资助项目　 2007330009;郑州大学青
年骨干教师基金资助项目
叶里开花 ,又名大部参 、阴证药与叶长花 ,因花着生
于叶上面的中脉(近于基部)而得名。青荚叶 “性
凉 ,味苦 ,无毒(《四川中药志 》)” ;“性平 ,味辛微甘
(《贵州草药 》)” ;“辛微苦 , 平 (《贵州药植调
·132· 郑州大学学报(医学版)　2010年 1月　第 45卷　第 1期DOI :10.13705/j.issn.1671-6825.2010.01.007
查 》)”。青荚叶根可镇咳 、活血 、化淤 、止痛及调经 ,
青荚叶的叶和果实具有清热除湿 、解毒消肿 、行气止
痛 、凉血止血及清肺止咳等功效 [ 1-2] 。表儿茶素是青
荚叶中重要的生理活性成分 ,是优良的抗氧化自由
基清除剂 、除臭剂 ,具有防蝺 ,抑制血压 、血糖 、胆固
醇上升 ,抗癌 、抗突变及抗辐射的功效 。河南省三门
峡市卢氏县有大面积野生青荚叶资源 ,对野生青荚
叶有效成分的研究可为发展河南地方特产药食两用
植物的栽培以及开发新药提供理论依据。作者首次
对河南省三门峡市卢氏县老界岭上野生青荚叶中表
儿茶素含量进行了分析 ,报道如下。
1　材料与方法
1.1　仪器与试剂　HP1100高效液相色谱仪(四元
泵 ,在线真空脱气机 , G1316A柱温箱 , Agilent1024
二极管阵列检测器),色谱柱:ZorbaxXDB-C18(4.6
mm×250 mm, 5 μm), RE-2000旋转蒸发仪 ,索氏提
取器 ,超声波提取器 ,恒温水浴锅;无水乙醚 、体积分
数 95%乙醇及柠檬酸均为分析纯;甲醇 、四氢呋喃
及 N, N-二甲基甲酰胺均为色谱纯;实验用水为高纯
水;表儿茶素标准样品(中国药品生物制品检定所 ,
批号 110878-200102)。
1.2　样品的制备
1.2.1　样品的来源和预处理　青荚叶样品于 2007
年 6月采自河南省三门峡市卢氏县老界岭 ,用纯水
洗净后 ,自然晾干。用万能植物粉碎机粉碎 ,过 40
目筛。称取一定量的青荚叶 ,移入滤纸筒内 ,将滤纸
筒放入脂肪提取器的抽提筒内 ,由抽提器冷凝管上
端加入 100 mL无水乙醚 ,于 70℃水浴加热 ,使乙醚
不断回流提取 ,抽提 6 h,除去样品中的脂类物质。
1.2.2　样品溶液的制备　准确称取一定量的脱脂
样品 ,置于 25 mL容量瓶中 ,加入 20 mL体积分数
50%甲醇 ,混匀 , 20 ℃下超声波提取 20 min。取出
过滤 ,滤液再过 0.45 μm滤膜 ,滤液转入 25 mL容
量瓶中 ,并用体积分数 50%甲醇稀释至刻度 。
1.3　实验方法
1.3.1　色谱条件[ 3-5] 　色谱柱:ZorbaxXDB-C18
(4.6 mm×250 mm, 5 μm);二极管阵列检测器:检
测波长 280 nm。流动相组成:流动相 A, 400 mL
0.04mol/L柠檬酸 +80mLN, N-二甲基甲酰胺 +20
mL四氢呋喃;流动相 B,甲醇 。流动相的洗脱方式
为等强度洗脱:A+B(体积比 85:15)。流动相流速
1.0mL/min。色谱柱的柱温 35℃,进样体积20 μL。
1.3.2　标准曲线的制备　精密称取表儿茶素标准
品 36.4mg置于 10 mL容量瓶中 ,加入 10mL体积
分数 50%甲醇 , 20℃下超声溶解 20 min,稀释至刻
度 , 摇匀 , 作为标准品贮备液。配制浓度为 0、
22.75、45.50、91.00、182.00和 364.00mg/L的表儿
茶素标准系列溶液 ,在选定的色谱条件下分别进样 ,
每个浓度平行进样 3次 ,以峰面积的平均值(A)对
浓度(C)进行回归 。
1.4　精密度试验　取同一样品 5份 ,在选定的色谱
条件下分别测定 ,考察组分的色谱峰的保留时间和
峰面积比值的一致性。求出表儿茶素峰面积的相对
标准偏差(RSD)。
1.5　稳定性试验　取制备好的样品溶液分别在不
同时间(0、2、4和 8 h)进样分析 ,同一时间的样品平
行进样 3次 ,比较组分的保留时间和色谱峰峰面积
的一致性 。
1.6　回收率试验　精密称取 5份脱脂青荚叶 ,加入
一定量的表儿茶素标准品 ,按 1.2.2方法处理并测
定 ,计算回收率 。
1.7　样品测定　取制备好的样品溶液 ,经 0.45 μm
滤膜过滤 ,在最佳色谱条件下 20μL进样 ,采用保留
时间与样品加标增加峰高相结合的方法进行定性分
析 ,外标法定量 ,以峰面积计算被测试液中表儿茶素
的含量。
1.8　青荚叶中表儿茶素的提取方法　分别采用体
积分数 50%甲醇超声提取 、体积分数 95%乙醇沸水
浴提取 、沸水提取及体积分数 80%丙酮常温浸泡提
取的方法进行表儿茶素提取率的测定。
2　结果
2.1　表儿茶素标准品及青荚叶提取液的色谱图　
结果见图 1、图 2。
2.2　标准曲线的线性范围与检测限　回归方程为
A=11.091 1C+4.490 3, r=0.999 9。表儿茶素在
0 ～ 364.00 mg/L范围内有良好的线性关系 。在
95%置信度下 , 表儿茶素的检测限为 3.36mg/L。
图 1　表儿茶素标准品色谱图
·133·JournalofZhengzhouUniversity(MedicalSciences)　Jan.　2010　Vol.45　No.1
图 2　青荚叶提取物色谱图
2.3　精密度试验结果　表儿茶素的 RSD为 1.55%。
2.4　样品溶液稳定性试验结果　样品中表儿茶素
的色谱峰的相对保留时间一致性好 ,组分色谱峰峰
面积的 RSD在 0、 2、 4和 8 h时分别为 1.97%、
2.46%、3.26%和 9.21%。
2.5　回收率试验结果　表儿茶素的平均回收率为
98.4%。
2.6　青荚叶中表儿茶素测定结果　3次测量结果
分别为 5.458、5.245和 5.299 mg/g,青荚叶中表儿
茶素的平均含量为(5.334±0.111)mg/g。
2.7　青荚叶中表儿茶素的提取率　体积分数 50%
甲醇超声提取 、体积分数 95%乙醇沸水浴提取 、沸
水提取及体积分数 80%丙酮常温浸泡提取方法进
行表儿茶素提取 ,表儿茶素的提取率分别为 5.455、
1.240、2.573及 3.823mg/g。
3　讨论
表儿茶素标准品溶液最好临用时配制 ,配好的
溶液应在 24 h内使用 ,因为放置时间过长溶液由无
色变为黄色 ,并且表儿茶素含量降低。
表儿茶素易溶于水和醇 ,根据其溶解性分别以
水 、体积分数 50%甲醇 、丙酮和体积分数 95%乙醇
为提取溶剂进行试验 ,结果表明在体积分数 50%甲
醇中的提取率最高 ,而且以水为提取溶剂时很难过
滤 ,因此选择体积分数 50%甲醇为提取溶剂。
河南省三门峡市卢氏县老界岭上的青荚叶中表
儿茶素含量为(5.334 ±0.111)mg/g,该分析结果
为野生青荚叶开发为新资源食品提供了科学的
依据 。
该研究建立的测定方法简便 、快速 、灵敏且准
确 ,测定结果可靠 ,适用于野生青荚叶中表儿茶素含
量的分析 。
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(2009-09-23收稿　责任编辑姜春霞)
毛细管气相色谱法测定扎托洛芬中有机溶剂的残留量
吴春丽■ ,张俊霞 ,史云涛 ,李 　攀 ,李 　幸 ,雷　伟 ,张振中
郑州大学药学院 郑州 450001
■女 , 1970年生 ,博士研究生 , 副教授 ,研究方向:新药开发
　　关键词　毛细管气相色谱法;非甾体抗炎药;扎托洛芬;有机溶剂残留量
　　中图分类号　R917
　　摘要　目的:采用毛细管气相色谱法测定扎托洛芬原料药中四氯化碳 、三氯甲烷 、甲醇及乙醇 4种有机溶剂的
残留量。方法:使用 HP-5毛细管色谱柱(0.32 mm×30 m×0.25 μm), 柱温分别为 60和 80 ℃, 氢火焰检测器和电
子捕获检测器 , 以 N, N-二甲基甲酰胺为溶剂 ,载气为氮气 , 进样口温度 200℃, 检测器温度 250℃, 分流比为 50:
·134· 郑州大学学报(医学版)　2010年 1月　第 45卷　第 1期