全 文 ：２０ １６ 第十八卷 第一期 ★ Ｖｏｌ ． ｌ ８ Ｎｏ ． ｌ
鸣血慕 、 滇鸣血慕 、大血藤等血慕类 药材 的
ＰｓｂＡ－ｔｒｎＨ备形碼分子鉴
周 红 、 马双姣 ＼ 陈 贝 贝 ２ ， 韩正洲 ２ ，姚 辉 卜 ＊
（ １ ． 中 国医学科学院 北京协和医学院 药用植物研究所 北京 １ ００ １ ９３ ；
２ ． 华润三九医药股份有限公司研发中心 深圳 ５ １ ８ １ １ ０ ）
摘 要 ： 目 的 ： 中 国 药 典收载 的 鸡血藤 、 大血藤 、滇鸡血藤及相 关物种均 有 “血藤” 之称 ， 其各 自 的 来源
不 同 ，功效主治 不 同 ， 不 能混用 。 为 确保其临床用 药 的 安全 、有效 ， 本研究应 用 ＤＮＡ 条形码序列
对鸡 血藤 、 大血藤 、滇鸡血藤及其混伪 品进行鉴定研 究 。 方 法 ： 通过对样本进行基 因 组 ＤＮＡ 提取 ， ＰＣＲ 扩
增 序列 。 所得序列 经拼接后 ， 用 ＭＥＧＡ５ ．０ 和 ＤＮＡＭＡＮ 进行种 内种 间序 列 分析 ， 构建 ＮＪ 树 ， 对
序列 在血藤类 药 材 中 的鉴定能力进行评估 。 结果 ：鸡血藤、 大血藤和漠■鸡血藤序列 长度和 ＧＣ 含
量各不相 同 ， 种 内序 列相似度尚 ， 均 兩于 它们与 混伪品 间 的序列 相似性。 鸡血藤 、 大血藤 、 ＇凑鸡血
藤与 其他非 药 典收栽的 血藤类 药材的 种 间 最小 Ｋ２Ｐ 距 离 分别 为 ０ ． １ ３７ 、 ０ ． ４２６ 和 ０ ．００３ ， 均 大于其种 内 最大
遗传距 离 ０ ．０ １４ 、 ０ ．０ ０４ 和 ０ 。 在 ＮＪ 树 中 ， 鸡血藤 、 大血藤均单 独聚为 一支 ， 能明 显的 与 其他混伪品 区 分开 ，
滇鸡 血藤与 异形 南五味子聚为 一 支 。 结论 序 列 能准确鉴定鸡血藤 、滇鸡血藤 、大血藤药材及其
混伪品 ，该条形码分子鉴定方法可作为传统鉴定方法的有效补充 。
关键词 鸡血藤 大血藤 滇鸡血藤 ＤＮＡ 条形码
ｄｏ ｉ ：１ ０． １ １ ８４２／ｗｓ ｔ ． ２０ １ ６ ．０ １ ． ００７中 图 分类 号 ： Ｒ９３ １ ．５文献标识码 ： Ａ
就藤类药材而言 ， 凡是皮 色发红或鲜 品被斩断为 木 兰科 植 物 内 南 五 味 子 Ｗ ｅｈ ｏｒＡ ． Ｃ ．
时有 红色汁液流 出 的 ， 习 惯用 “ 血 ” 、 “赤 ” 、 “ 红 ” 等Ｓｍ ｉ ｔ ｈ 的干燥藤茎 ｜ ２ ＞ 。 鸡血藤 Ｓ ｐａｔｈ ｏｌ ｏ ｂｉＣ ａｕ ｌｉ ｓ 的
字命名 ， 这些混杂重叠 的不规范药名 ， 给实 际用药本草记载存在差异 ， 进一步加 剧 了其用药 的混乱 。
带来极大的麻烦 。 有关报道显示 ， 正名 、异名作 “ 血１ ９６０ 版 《 中药志 》 以豆科植物 白花油麻藤 Ｍｕ ｃ ｉｍａ
藤 ” 的 中药有 ８ 种之多 ｎ ｌ 。 由 于药材功效相近或存Ｔｕ ｔ ｃｈ ． 为鸡血藤正品 １ ３ １ ；《广州植物志 》
在同名 异物 、 同物异名等原因 ，使之容易混淆 ，加之和 《 中 国植物高等 图鉴 》 将豆科崖豆藤属 网络崖豆
市场流通 中 的部分药材外形不完整 ，鉴别特征部分藤 Ｍ ｉ Ｚ Ｚｅ ｔ ｔ ｉａ／？以ｃｕ Ｚ ａｔ ｅＢ ｅ ｎ ｔｈ ． 定 为 鸡血 藤原植 物 。
缺失等造成鉴定困难 。 但他们的基原植物属于不同１ ９７７ 版 《 中 药大辞典 》 ｍ 、 １ ９ ９０ 版 －２０ １ ５ 版 《 中 华
的科属 ， 且功能主治各异 ，不能混用 。 例如 ， ２ ０ １ ５ 版人民共和 国药典 》 收载的鸡血藤均为豆科植物密花
药典中 收载的大血藤 Ｓａｒｇｅｎ ｔ ｏｄ ｏｘａｅＣａ ｕ ｌ ｉ ｓ 为木通Ｓｐａ认ｏ Ｚｏ６ ｉ？ｍ６ｅ ｒｅ ｃｔｕｓＤｕｎｎ 的干燥藤莲 ｐ ’４ －８ ］ 。 由
科植物大血藤 Ｓａ ｒｇｅ ｆＵｏ ｃ／ ｃ＾ ａｃ ｉｍｅ ａ ｔａ（Ｏ ｌ ｉｖ ．）Ｒｅｈｄ ．于这些植物藤莲被斩断后 ， 木质部会立即 出 现淡红
ｅｔＷｉ ｌ ｓ ． 的 干 燥 藤 茎 ， 滇 鸡 血 藤 Ｋ ａｄｓ ｕｒａｅＣ ａ ｕｌ ｉｓ棕色 ， 不久慢慢变成鲜红色汁液流 出 ， 因此它们均
有 “血藤 ” 之称 ， 也都有 “活血调经” 的功效 ，但不同
收稿 ａ 期 ： ２０ １５－０６－ １６血藤类药材性味归经及主治各异 。 如大血藤性苦 ，
修回Ｈ期 ＝ ２０ １ ５－ １ ２－０ １
＊科学技术部 “ ８６ ３” 计划 （ ２０ １ ２ＡＡ０２ １６０２ ） ： 基于 ＤＮＡ 条形码的珍稀药 用 、 野生等资源快速检测技术及产品研发 ， 负 责人 ： 陈士林 。
＊＊通讯作者 ：姚辉 ，副研究 员 ，硕士生导师 ， 主要研究方向 ： 中药资源与 分子鉴定 。
４０［ＷｏｒｌｄＳ ｃ ｉｅｎｃ ｅａｎｄ Ｔｅ ｃｈｎｏｌｏｇｙ／Ｍｏ ｄｅ ｒｎｉ ｚａ ｔｉｏｎｏｆ Ｔｒａｄ ｉｔ ｉｏ ｎａｌ Ｃｈ ｉｎｅ ｓｅＭｅｄｉｃ ｉｎｅ ａ ｎｄＭａｔｅｒｉａＭｅｄ ｉｃａ ］
世界科学技术一中医药现代化★专题讨论 ： ＤＮＡ 条形码技术在中药材及其种源鉴定中的应用
平 ， 归大肠 、 肝经 ，有 清热解毒 、 消痈散结的功效 ， 善于ｍａ认基 因对鸡血藤及其混伪品进行了分子鉴定 。
散肠 中瘀滞 ， 为治疗肠痈腹痛要药 ｜ ９ １ ；鸡血藤与 滇鸡相关研究 发现 序 列 在植物 中进化速率
血藤均性苦 、 甘 ， 温 ， 归肝 、 肾经 。 鸡血藤活 血作用较快 ， 长度适宜 ， 两端存在保守序列 ， 容易设计通用
较强 ， 长 于舒筋 活络 ， 为 风湿痹痛及 血 虚有瘀诸证引 物 ， 且该 片段的 引 物具有高 通用性 、 高扩 增成功
之常用药 ，滇鸡血藤补血作用较鸡血藤强 。 为 了确率等特点 ｜ １ ８ １ 。 本研究 以鸡血藤 、大血藤 、 滇鸡血藤
保 “血藤 ” 类药材的用药准确 、安全 、有效 ，亟需找到药材及其混伪 品 为研究对象 ， 分析其 序
一种快速 、 准确 的鉴定方法 。列种 内 和种间变异 ， 旨在为 血藤类药材的用 药安全
目 前 ， 国 内 外对血藤类 中药材的研究主要集 中及质量控制提供分子鉴定依据 。
在化学成分 、 药理作用 等方面 ， 其鉴定 主要依赖性
状 、 显微 、 理化性质等方 面 １ＫＭ ３ ］ 。 分子 鉴定研究较￣＇
少 ， 翟 明 等 ％ 曾 对鸡血藤类药材的 种 质资 源进行１ ． １ 材料
ＲＡ ＰＤ 分析 ，安冉等 １ １ ５ １ 基于 ２ ６Ｓ ｒＤＮ ＡＤ 卜Ｄ３ 区序本研究共收集样品 ７ ９ 份 ， 涉及 ３ 个科的 ８ 个不
列差异对鸡血藤及其混伪品进行分子鉴别 。 孙稚颖同物种 ， 包括鸡血藤 ４２ 份 ， 大血藤 １ ６ 份 ，滇鸡血藤
等 ［ １￣ 曾采用硅胶干燥叶片获得 Ｉ ＴＳ２序列对药典中收６ 份 ， 其他血藤类 １ ５ 份 ， 分别来 自 越南 、广西 、广东 、
载的 １ ４ 种藤类药材进行鉴定研究 。 黄琼林等 １ １ ７ １ 基湖北 、云南 、河北 、安徽 、广 州 、北京等地 。 以上所有
表 １ 实验样品信 息表
药材名基原中 文名拉丁名样品编号产地
鸡血藤密花豆Ｓｐ ．ｓｕｂｅｒｅｏｕｓｈ ｉ（ ２７ ）ＰＳ０２４６ＭＴ０２ ，ＹＣ ０００ １ ＭＴ０４ 、 中国 医学科学院药 用植物研究所广 西
０６－０９ 、 丨 ４－ １ ９ 、 ２９＊ 、 ３３－３４ 、 ３８ 、 分所 、河 北安 国 药 市 、 安徽 亳 州 药 市 、
４０ ，４３－４４ ，４６－４７ ，４９－５３ ．６ ３广 东 平远 、 广 西龙虎 山 、越 南 、广 西 崇
左 、广 西 南 宁 、广 州 中 医药 大学药植园
ｈ２ （１ ２ ）ＰＳ０２４６ＭＴ０ １ ，Ｙ Ｃ０００ １ ＭＴ０３ 、 中 国 医学科学院 药 用植物研究所广 西
１３ 、２０－２２ 、２６ 、 ３ １ 、３７ 、 ５４ 、６７－６８ 分所 、安徽亳 州 药 市 、北 京市 某 药 店 、
河 北安 国 药 市 、 广 西金 秀县、 广西 南
宁 、广 州 市某 药店 、广 西 南 宁 中 医药 大
学 、广 西 南 宁药 用植物园
ｈ３（１ ）ＹＣ０００ １ ＭＴ３６广 西桂林
ｈ４（１ ）ＹＣ０００ １ＭＴ６５ 广 州 中 医药 大学 药植 园
ｈ５（１ ）ＹＣ０００ １ＭＴ５６广 州 市某药店
大血藤大血藤Ｓｏ． ｃｕｎｅａｉａａ ｌ （ １ ４ ）ＹＣ０２７９ＭＴ０２ 、０６－ １ ３ 、 １ ５ 、 １７－ 安徽亳 州药 市 、 北京市某 药 店 、 云南 大
１ ８ ，ＲＣ＿ＹＣ０２７ ９ＭＴ １７＊－ １ ８ ＊理 、河北安 国药 市 、湖北武汉
ａ２ （ ２ ）ＹＣ０２７９ＭＴ０５ ｓ ｌ４北京市 某药店
滇鸡血藤 内 南五味子Ｋ． ｉｎｔｅｒｉｏｒｂ ｌ（ ６ ）Ｙ Ｃ０６９ ９ ＭＴ０ １ －０ ２ ＊ 、０ ３－ ０４ 、 云 南耿马
０５ ＊ 、０６
血藤异形 南五味子ＩＣ ｈｅｔｅｒｏｃｌ ｉｔａｃ ｌ（１ ）ＹＣ０７２３ＭＴ０３华南植物 园
常春油麻藤 ｄ ｌ（ ３ ）ＹＣ０７２４ＭＴ０ １－０３ 武汉植物 园
ｄ２（ ２ ）ＹＣ０７２４ＭＴ０４ 、 ０６武汉植物 园 、陕西汉 中
ｄ３（１ ）ＹＣ０７２４ＭＴ０５ 武汉植物 园
白花油麻藤Ｍｕ＾ ｆｅｉｎｉｔｗｘｘｆｉａｍ ｉｆ ｌ（１ ）ＹＣ０７２６ＭＴ０ １华南植物 园
香花Ｍ豆藤Ｍ ．ｄｉｅｌｓｉａｍｅ ｌ（６ ）ＰＳ０３０９ＭＴ０ １ ， ＹＣ０７２５ＭＴ０ １－０５云 南昆 明
嗓果崖豆藤胤 ｔｓｕｉ ｇｌ（１ ）ＹＣ０７ ２７ＭＴ０１华 南植物 园
注 ： ＊ 表示 复核样本
［ Ｗｏｒｌｄ，Ｓｃ ｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ／Ｍｏｄｅｒｎｉｚａｔ ｉｏ ｎｏｆＴｒａｄｉ ｔ ｉｏｎａｌＣｈ ｉ ｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃ ｉｎ ｅａｎｄＭａｔ ｅｒ ｉａＭｅｄ ｉｃａ ］４ １
２０ １ ６ 第十八卷 第一期 ＊ Ｖ〇 １ ． １ ８ Ｎ〇． １
实验样 品 经中 国 医 学科学院药用植物研究所林余Ｅ ｖ ｏ ｌ ｕ ｔｉ ｏ ｎ ａ ｒｙＧｅ ｎ ｅ ｔ ｉｃ ｓＡ ｎ ａｌｙ ｓ ｉ ｓ ） 分 析 ［２ １ １ ， 并 基 于
霖研究员鉴定无误 ， 样 品详细信息 见表 １ 。Ｋ ２Ｐ 模型 进行遗传距离等分析 ， 用邻接 （ ＮＪ ） 法 构
１ ． ２ 方法建系统聚类树 ，利用 ｂｏ ｏ ｔ ｓ ｔ ｒａｐ（１０００ 次重复 ） 检验
１ ． ２ ． １ＤＮＡ 提取 各分支的 支持率 。 并利用 Ｄ ＮＡＭ ＡＮ６ ． ０ 对序列 进
实验药 材用 ７ ５％ 乙醇擦试表面后 晾 干 ， 称取行相似性分析 。
４〇－４５ｍ ｇ ，用 Ｄ ＮＡ 提取研磨仪 （ Ｒｅ ｔ ｓｃ ｈＭＭ ４〇０ ， 德， ＠果与分析国 ） 研磨 ２ｍ ｉ ｎ（ ３０ 次 ／ 秒 ） 后 ，参照 《 中 华人民共
和 国药典 》 （ ２０ １ ０ 年版第三增 补本 ） 中 药材 Ｄ ＮＡ２ ． １ 序 列信息及 变异 分析
条形码分子鉴定法指导原 则 Ｎ ９ １ 规定的茎木类药材实验 获得血 藤类 药材 序 列 长度 为
ＤＮ Ａ 提取方法提取总 Ｄ ＮＡ 。２４０－４ ５ １ｂｐ ，ＧＣ 含量为 ２２ ． １％ －４ １ ． ３％ ，其中鸡血藤
１ ． ２ ． ２ＰＣＲ 扩 增及测 序 序列 ４２ 条 ， 序 列 长 ２９ ９ｂｐ ，ＧＣ 含量 为
序列扩增 用正 向 引 物为 ５ ’ －ＧＴＴＡ Ｔ２２ ． １ ％－２ ２ ． ６％ ， 平均 Ｇ Ｃ 含量为 ２ ２ ． ２％ ， 共获得 ５ 种
Ｇ ＣＡＴＧＡＡＣＧＴＡＡＴＧＣＴＣ －３ ’ ， 反 向 引 物 为 ５ ’ －ＣＧＣ不同 的单倍型 ， 出 现了７ 处变异 ， 如表 ２ 所示 。 大血
Ｇ ＣＡＴＧＧＴＧＧＡ ＴＴＣＡＣＡ ＡＴＣ Ｃ －３ ’ 。 ＰＣＲ 反 应体 积藤 Ｗ 序 列 丨 ６ 条 ， 序列 长 ２４０ｂ ｐ ，ＧＣ 含量
为 ２ ５ｎ Ｌ ， 反应体系及扩增程序参照陈士林主编 的为 ４ １ ． ３ ％ ， 共获得 ２ 种不同 的单倍型 ３ １ （１ ４ 条 ） 、 ａ２（ ２
著作 《 中 国药典 中 药材 ＤＮＡ 条形码标准序 列 》 ［Ｍ ｜ 。条 ） 。 仅在 ３ ８ 位点处存在 Ａ－Ｔ 变异 。 内 南五味 子
ＰＣＲ 产 物 经 纯 化 后 ， 使 用 ＡＢ Ｉ３ ７ ３ ０ＸＬ（Ａ ｐ ｐ ｌ ｉ ｅｄ ｆｍ ／／ 序列 ６ 条 ，异形南五味子 序列
Ｂ ｉ ｏｓ ｙｓ ｔｅｍ ｓＣ 。 ． ，美国 ） 测序仪进行双 向测 序 。 １ 条 ，序列 长度均为 ３２ ８ｂ Ｐ ， ６ 条 内南五味子序列一
１ ． ２ ． ３ 数据处理致 ， ＧＣ 含量为 ３６ ．３％ 。 内南 五味子与异形南五 味
测 序 峰 图 经 校对 拼 接 ， 去 除 引 物 区 和 低 质子 序列仅在 ２ １ ８ 位点处存在 Ａ－ Ｃ 变异 ，
量 区 ； 将 所 有 序 列 用 软 件 ＭＥＧＡ５ ． ０（Ｍ ｏ ｌｅ ｃ ｕｌ ａｒ详细序列信息见表 ３ 。
２ ． ２种 内 及种 间 变异分析
表 ２ 鸡血藤 （ Ｓｐ ． 仙知加似 ） ｐｓＭ－ｉｍ／／ 序列变异位点应用 Ｍ ＥＧＡ５ ． ０ 软件 ， 基于 Ｋ２ Ｐ遗传距离模型 ，
＂
７７１对各 种血 藤 进行种 内 种 间变异分析 ， 药 典收载 的
５２０４７５ ９６０物种鸡血藤 、大 血藤 、 滇鸡血藤与其他非药典收载
￣
ｈ ｉＴＴＡＩＴＴｆ ＂－的血藤类 药材 的种 间最小 Ｋ２ Ｐ 距离分别 为 ０ ． １ ３ ７ 、
ｈ２ ＊＊＊－ＡＡＡ０ ．４２ ６ 和 ０ ． ００ ３ ，均大于其种 内最大遗传距离 ０ ． ０ １ ４ 、
ｈ３＊＊＊Ａ ＊＊＊０ ．００４ 和 ０ 。 它 们与其他血藤的种间平均 Ｋ２ Ｐ 距离
ｈ４ ＊Ｇ－－ ＊＊＊分别为 ０ ． ５ ０６ 、 ０ ． ７ ７ ９和０ ． ８ ２２ 。
ｈ５＊Ｇ＊－ＡＡＡ 应 用 Ｄ ＮＡ Ｍ ＡＮ 软 件 对 各 种 血 藤 类 药 材 的
注 ： ＊ 表 示与 第 一行碱基相 同 表 示碱基缺失 。－ ｉｍ＂ 序列进行序列 相 似性 比较分析 ， 结果 如
表 ３ 血藤类药材的 序列特征
＃＃
拉丁名
序 列长度 ／ｂｐ
ＧＣ 含量ｍ
种内 变异位点个数
密 花旦 Ｓ［） ． ｓｕｂｅ ｒｅｃ ｌｕ ｓ ２９９２２． １－２２． ６ ７
大血藤 ２４０ ４ １ ．３ １
内 南五味子 ｆＣ ｉｎｔｅｒｉｏｒ３２８３６ ．３０
异形南五味子 Ｋｈｅ ｔｅ ｒｏｃｌ ｉｔａ ３２８ ３６ ．６ ／
常春油麻藤Ｍｕ ＾ｓｅｍｐｅｗｉｒｅｎｓ３８２２７．７—２８ ． ０４
白花 》油麻藤 Ｍｕ ．ｂ ｉｒｄｗｏｏｄ ｉａｎａ ３７７ ２８ ．９ ／
香花Ｍ？藤Ｍｉ． ｄｉｅ ｌｓ ｉａｎａ ３０３２４ ． １０
喙果崖豆藤 Ｍｉ ｔｓｕｉ４５ １ ２４４ ／
注 因 只有一条序 列 ， 无种 内 变 异 。
４２ ［ＷｏｒｌｄＳｃ ｉｅｎｃ ｅａｎｄＴｅｃｈｎ ｏ ｌｏｇｙ／Ｍｏｄｅ ｒｎｉｚａｔ ｉ ｏｎｏｆ Ｔｒ ａｄｉｔ ｉｏｎａｌ Ｃｈｉ ｎｅｓ ｅＭｅｄｉ ｃｉｎｅａｎｄ Ｍａｔ ｅｒｉａ Ｍｅｄｉ ｃａ ）
世界科学技术一中医药现代化★专题讨论 ： Ｄ ＮＡ 条形码技术在中药材及其种源鉴定中的应用
表 ４ 所示 ， 鸡血 藤 、 大血 藤 ／ＭＭ－ ｚｍ ／Ｚ 序 列 种 内 相材 的误用 、混用又会造成 “病准 － 方对 － 药不灵 ” 的
似度非 常高 ， 为 ９ ８％－ １ ００％ ， 远 高 于它们 与 混伪 品现象 ，严重影响 中 医临床疗效 ，延误 中医治疗 ，甚至
间的序列 相似性 。 滇鸡血藤 ／ 序列 种 内 的损害患 者健康 ， 曾 经的 “关木通事件 ” 和 “广 防己事
相似度 为 １ ００％ ， 与其他血藤类药材序 列相似度为件 ” 就 引 发 了全世界的关注和讨论 。 为确保 中药 材
３０ ． ７％－ ９９ ．７％ ， 其中 与异形南五 味子的序 列相 似度的 质量 、疗效和安全性 ， 对 中 药 材 的准确 鉴定 可从
最高 ， 相似度为 ９ ９ ． ７％ ０源头上提供保障 。 ＤＮＡ 条形码分子鉴定方法具有
２ ． ３树分析 独特的 ３ 大优势 ： 方法通用性强 、 鉴定结 果可重复
以研究样本 的单倍型构建 ＮＪ 树 ， 结果发现 ， 鸡性好 、 可构建统一数据库和 鉴定平 台 ， 易 于推广 和
血藤 、 大血藤均单独 聚为一支 ， 且具有较高 的 自 展标准化 ｜２ ２１ ，该方法对于同名异药 、 异药 同 名 药材的
支持率 ， 分别为 １ 〇〇％ 、 ９ ３％ ， 能 明显与其他血藤类鉴定 已 有较多 的研究报道 。 辛天怡 ［ ２３ ］ 等基于 ＤＮＡ
物种 区分开。 滇鸡血藤药材 的基原物种 内南五味子条形码序列 １ ＴＳ ２ 成功 鉴定 了 “胡 麻” 类药材 ， 马 晓
与异形南五 味 子在 ＮＪ 系统发育树 中 聚 为一支 ， 与冲 ｜ ２４ １ 、 夏叶 ［ ２ ５ １ 等分别 应用 Ｄ ＮＡ 条形码技术成功鉴
其他血藤类药材可明显区分 （ 如图 １ 所示 ） 。定 了 “木香” 类药材和 “功 劳 叶 ” 药材 。
３． ． ． ． 序列 因其序 列变异性高 ，是 ＩＴＳ２ 序列的 补充 ， 共 同作为药用植物鉴定的通用条形码序列 。 在 中药材的
由于本草记载的差异和地方用药习 惯的不 同导鉴定 中也有较多的应用 ， 丫 ＆〇 等 ［ ２ ６ １ 、 杨培等 ｜ ２＇ Ｓｕ ｎ
致中 药的学名 、别名 繁多混乱 ， 出 现 “异药 同名 ” 和等 ［ ２８ ］ 、 Ｈｅ 等 ［ ２＼Ｕ 等 １Ｍ １ 分别应用 序 列
“ 同名异药 ” 的现象 ， 它是导致药材误用 或混用 的主对石斛类药材 、 药食 同 源 肉 桂类药 材 、 金银花 和 山
要原因 之一 ， 给 中药材 的流通与监管带来不便 。 药银花等药材 、 乌头属药材 、 桑 寄生药材进 行鉴定研
表 ４ 鸡血藤 、 大血藤 、 滇鸡血藤及其混伪品的序列相似性分析 ／％
Ｓｐｅｃ ｉｅｓ
［ １ ｜
Ｐ］
［３］
［
４
］
Ｈ Ｈ
Ｕ ］
［８］
［ １ ］９８ ．０－ １ ００３２ ．０－３８ ．９ ３７ ． ０－３ ８ ．７ ３６． ７－３９． ４６２ ．５－６４ ．３６２ ．９－６３ ．９５９ ． ８－６０ ．５３６ ．９－３７ ． ３
［２］ ９９． ６－ １ ００４７ ． ３－４７．６４６．４－４６ ． ７３７ ．７－３８ ．５３７ ．９－３ ８ ．２３３ ．３－３３ ．７２０ ．６－２０ ．８
｜
—
３ ］ １ ００９９． ７５０ ．８－５ １ ． １５ ３ ． ３４３ ．５３０． ７
注 ： ［ １ ］Ｓｐ ．ｓ ｗ ６ｅ ／ ＊ｅｃ加 ｓ ，［ ２ ］ ５ ａ ．ｃｕｎ ｅａ ｆａ ， ［ ３ ］ 尺 ． ［ ４ ］ 【 Ｚｉ ｅ Ｚ ｅｒｏ ｃ ／ｋｔ ， ［ ５ ］Ｍ ｗ ． ［ ６ ］Ｍ ａ ． ［ ７ ］ＭＬ
ｄｉ ｅ ｌｓ ｉａｎａ ，［ ８ ］Ｍｉ ．ｔｓ ｕ ｉ
Ｓｐａｔｈｏｌｏｂｕｓ ｓｕｂｅｒｅｃｔｕｓｈ ｉ
Ｓｐａｔｈｏｌｏｂｕｓ ｓｕｂｅｒｅｃｔｕｓｈ３
１ ００Ｓｐａｔｈｏｌｏｂｕｓｓｕｂｅｒｅｃｔｕｓｈ４鸡血藤
Ｓｐａｔｈｏｌｏｂｕｓｓ ｕｂｅｒｅ ｃ ｔｕｓｈ２
８ ０ ＊———
７ ３Ｓｐａｔｈｏｌｏｂｕｓｓｕｂｅｒｅｃ ｔｕｓｈ５
５ ４ Ｍｉｌｌｅ ｔｔｉａｄｉｅｌｓ ｉａｎａｅ ｌ］ 香花崖豆藤
５ ９１ ００Ｍ ／ＺｅＷ ／ａ Ａｓｗ ／ ｇ ／］ ０象果崖豆藤
５３ Ｍｕｃｕｎａ ｂ ｉｒｄｗｏｏｄｉａｎａｆｌ］ 白花 油麻藤
Ｍｕｃ ｕｎａｓ ｅｍｐｅｒｖ ｉｒｅｎｓｄ３３常春 泡良藤
Ｍｕｃｕｎａｓ ｅｍｐｅｒｖ ｉｒｅｎｓｄ ｌ］常春 油麻藤
Ｍｕｃｕｎａｓｅｍｐｅｒｖ ｉｒｅｎｓｄ２］常春 油麻藤
ｌ 〇〇Ｋａｄｓｕｒａ ｈｅ ｔｅｒｏｃ ｌｉｔａｃ ｌ］ 异形 南五味子
Ｋａｄｓｕｒａ ｉｎｔｅｒ ｉｏｒｂ ｌ］ 内 南五味子
ｌ 〇〇Ｓａ ｒｓｅｎｔｏｄｏｘａ ｃｕｎｅａｔａａ Ｉ１，＿大血藤
９３ Ｓａ ｒｇｅｎｔｏｄｏｘａ ｃｕｎｅａｔａａ２
图 １ 基 于 序 列构建的鸡血藤 、 大血藤 、 滇鸡血藤及其混伪品的邻接 （ ＮＪ ） 树
注 ： Ｂ ｏｏ ｔ ｓ ｔｒａ ｐ１０００ 次重 复 ， 支上数值仅显 示 自 展支持率 彡 ５ ０％ 。
ＣＷｏ ｒｌｄＳｃｉ ｅｎｃ ｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ／Ｍｏｄｅｒｎｉｚａ ｔｉ ｏｎｏｆ Ｔｒａｄ ｉｔ ｉｏｎ ａｌ ＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉ ｃ ｉｎｅ ａｎｄ Ｍａ ｔｅ ｒｉａＭｅｄ ｉｃａ］４３
２０ １ ６ 第十八卷 第一期 ★Ｖ ｏｌ ． ｌ ８ Ｎｏ ． ｌ
究 。 本研究基于 序列 ，应用 ＤＮＡ 条形码征 ［ ３ ４］ 、种子形态 １ ３５ １ 进行 了对 比 ，认为它们应为 同一
技术通过计算 Ｋ２Ｐ 遗传距离 、序列相似性分析及构物种 ， 且其化学成分和药理作用 １ ３ ６１ 也比较相似 。 本
建 ＮＪ 树 的方法对 “血藤 ” 类药材进行 鉴定并获得研究发现内南五 味子与异形南五味子的
成功 ， 复核样本 ［ ３ １ ］ＹＣ ０００ １ Ｍ Ｔ２ ９ ＊ 、 Ｙ Ｃ０ ２７ ９ ＭＴ １ ７ ＊ 、序列 差异很小 ，序列相似度高 ， 在 ＮＪ 系统发育树中
ＹＣ ０２７ ９ＭＴ １ ８ ＊ 、 ＹＣ ０ ６ ９ ９ＭＴ０ ２ ＊ 、 Ｙ Ｃ ０６ ９９Ｍ Ｔ０ ５ ＊ 由聚 为一支 ， 从系统发 育 的角度看 ， 此两种植物 的亲
中 国 中医科学院 中药研究所进行复核 ， 同一实验样缘关系很近 。 由于 内南五味子 尺． ｔＶｕｅ ｒ ｆｏ ｒ仅分布于
本获得的序列一致 ， 说明采用 Ｄ ＮＡ 条形码技 术鉴云南西南部 （ 保 山 、凤庆 、临 沧 、 耿马 ） ， 而异形南五
定血藤类药材具有很好的重复性和稳定性 。 ｐＭ －味子 的分布较为广泛 ，在 中 国华南至
Ｚ ｒｎ／／ 序列可有效鉴定不同种 的血藤类药材 ， 对 Ｐａｎ ｇ西南地区均有分布 。 因此 ，此两种植物的合并对扩大
等 Ｐ Ｉ 、 Ｈ ｅ 等 ＿ 研究 中发现的 序列 存在中药材滇鸡血藤 的药材来源具有 十分重要的意义。
白勺 ｉｎ ｖｅ ｒ ｓ ｉ ｏｎ现象 ， 在本研究的几个物种 中暂未发现。
滇鸡血藤基原植物内南五味子 尺 ． 油 在《 Ｆｌｏｒａ致谢
ｏ ｆＣｈ ｉｎ ａ 》中 已被合并至异形南五味子 Ｋｔｏｅｒｏｃｔｏａ 中 。感谢复旦大学药学院卢燕副教授提供部分实验
Ｓ ａｕ ｎ ｄ ｅｄ３ ３ １ 也 于 １ ９ ９ ８ 年 将 尺 ． ｈ ｔｅ ｒ ｉ ｏ ／？ 归 并 入 尺 ． 样 品 及 中 国 中 医科学 院中药研究所对部分样 品进
有研究者对两个物种 的 叶表皮形态特行的复核实验 ！
１ 江苏新医学院 ． 中药大辞典 ． 上海 ： 上海人民出 版社 ， １ ９７７ ： １ ２０６ ，鸡血藤及其混淆品的分子鉴别 ． 广州中医药大学学报 ， ２０ １ ０ ， ２７ （４） ：
１ ２０８ ．４０３－４０ ６ ．
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世界科学技术一中医药现代化★专题讨论 ： Ｄ ＮＡ 条形码技术在中约材及其沖源鉴定中的应用
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ｒｅｌ ａ ｔ ｅｄｓｐ ｅｃ ｉｅ ｓｕｓ ｉ ｎｇ ｔｈ ｅＤＮＡｈａ ｒｒ ｏ ｄ ｉ ｎｇｍ ｅ ｔ ｈ ｏｄ ．Ｐｌａｎｌ ａＭｅｄ ，２０ １ １ ，Ａ ｎａ ｌｙｓ ｉ ｓ ．ＰＬｏＳＯｎｅ ，２０ １ ２ ． ７ （ １ １ ） ；ｐ４８ ８ ３ ３ ．
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２９ＨｅＪ ．Ｗ ｏｎｇ ＫＬ ，Ｓｈ ａｗＰＣ ， ｅ ｔａｌ ． Ｉｃ ｉｅｎ ｔ ｉ ｆ ｉ ｃ ａｔ ｉｏ ｎｏ ｆ ｉｈｅｍｅｄ ｉ ｃｉｎ ａ ｌｐ ｌａｎ ｔ ｓＳｙｓ ｌｍｕ ｌ ｉｃ Ｂｏ ｔａｎｙＭｏｎｏｇｒａｐ ｈｓ ．１ ９９ ８ ，５４＇．１ － １ ０６ ．
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Ｉｄ ｅｎ ｔ ｉｆｉｃ ａ ｔ ｉｏ ｎｏ ｆＳ ｐａ ｔｈ ｏ ｌｏ ｂ ｉＣ ａｕ ｌ ｉ ｓ ，Ｋ ａｄ ｓ ｕ ｒ ａｅ Ｃ ａ ｕ ｌ ｉ ｓａ ｎｄＳ ａｒｇｅ ｎｔｏ ｄｏ ｘ ａｅ
Ｃ ａｕ ｌ ｉ ｓＵ ｓ ｉ ｎ ｇＴ ｈ ｅｐｓｂＡ － ｔｒｎＨＢａ ｒ ｃｏｄ ｅ
Ｚｈ ｏｕＨｏｎｇ １ ，ＭａＳｈ ｕａｎｇｊ ｉａｏ １ ，Ｃｈ ｅ ｎＢｅ ｉｂ ｅｉ２ ，Ｈａｎ Ｚｈｅ ｎｇｚｈｏｕ ２ ，Ｙａ ｏＨｕｉ
１
（Ｊ ？Ｉｎｓ ｔ ｉ ｔｕ ｔｅｏｆ Ｍｅｄ ｉｃ ｉｎａｌＰｌａｎ ｔＤｅ ｖｅ ｌｏｐｍｅｎ ｔ ，Ｃｈ ｉｎｅｓｅＡ ｃａｄｅｍ ｙｏｆ Ｍｅｄ ｉｃ ａｌＳｃ ｉｅｎｃｅｓ＆
Ｐｅｋ ｉ ｎｇＵｎ ｉ ｏｎＭｅｄ ｉ ｃａ ｌＣｏ ｌ ｌｅｇｅ ，Ｂｅ ｉｊ ｉｎｇ １ ００ 】 ９３ ，Ｃｈ ｉｎａ；
２ ．Ｒｅｓｅ ａｒｃｈＣｅｎ ｔｅ ｒ，Ｃｈ ｉｎａＲｅｓｏ ｕｒｃｅｓｏｆＳａｎｊｉ ｕＭ ｅｄ ｉｃａ ｌ＆ Ｐｈａ ｒｍａｃ ｅｕ ｔ ｉｃａｌＣｏ ． ，Ｌ ｔｄ ． ，Ｓｈ ｅｎｚｈｅ ｎ５ １ ８ １ １０ ，Ｃｈ ｉｎａ ）
Ａ ｂ ｓ ｔ ｒａ ｃ ｔ ：Ｓ ｐａ ｔｈ ｏ ｌ ｏｂ ｉＣａｕ ｌ ｉ ｓ ， Ｓａｒｇｅｎ ｔｏｄ ｏｘａｅＣ ａｕ ｌ ｉ ｓａｎｄＫａｄ ｓｕ ｒａｅＣａｕ ｌ ｉ ｓｒｅ ｃ ｏ ｒｄｅｄｉｎ ｔｈ ｅＣｈ ｉｎｅ ｓｅＰｈａｒｍａ ｃｏｐｏｅ ｉａ
ｗ ｅ ｒｅａ ｌ ｌｃａ ｌ ｌｅ ｄ＾Ｘｕ ｅｔ ｅｎｇ＾ ．Ｂｅ ｃａｕ ｓｅｏｆｔｈｅ ｉ ｒｄ ｉ ｆｆｅ ｒｅｎ ｔｓ ｏｕ ｒｃ ｅ ｓａ ｎｄｅｆｆｉ ｃ ａｃ ｉｅ ｓ ，ｔｈ ｅ ｙｃ ａｎ ｎ ｏ ｔｂ ｅｍ ｉ ｓ ｕｓ ｅｄ ．Ｉ ｎｏ ｒｄ ｅｒ
ｔ ｏｅ ｎｓ ｕ ｒｅ ｉ ｈ ｅ ｉ ｒｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌｓ ａ ｆｅ ｔ ｙａｎ ｄｅｆｆ ｉ ｃ ａｃ ｙ ， ｔｈ ｅｐ ｓ ｂＡ－ｔｒｎＨｒｅｇ ｉｏｎｗａ ｓｕｓ ｅ ｄｔ ｏｉｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｆｙＳ ｐ ａ ｔ ｈｏ ｌ ｏ ｂ ｉＣ ａｕ ｌ ｉ ｓ ，
Ｓ ａｒｇｅｎ ｔｏ ｄｏｘ ａｅＣ ａｕ ｌ ｉ ｓ ，Ｋａｄ ｓｕ ｒａｅＣ ａｕ ｌ ｉ ｓａｎ ｄ ｔ ｈｅ ｉ ｒ ａｄ ｕ ｌ ｔｅｒａｎ ｔｓ ．Ｔｏ ｔ ａｌｇｅｎｏｍ ｉ ｃＤＮＡｗａ ｓｅｘ ｔ ｒａｃ ｔｅｄ ，ａｎ ｄｔ ｈ ｅｐ ｓｂＡ —
ｔ ｒｎＨｒｅｇ ｉｏｎｗａｓａｍｐ ｌ ｉ ｆｉ ｅｄａｎｄｓ ｅｑ ｕｅｎｃｅｄ ．Ｔｈ ｅｉ ｎ ｔ ｒ ａ－ａｎｄｉ ｎ ｔ ｅ ｒ－ｓ ｐｅ ｃ ｉ ｆｉ ｃｇｅｎｅ ｔ ｉ ｃｄ ｉ ｓ ｔ ａｎｃ ｅ ｓｗ ｅｒｅｃ ｏｍｐｕｔ ｅｄｕ ｓ ｉｎ ｇ
ＭＥＧＡ ５ ． ０ａｎ ｄＤ ＮＡ Ｍ ＡＮ ．Ｔｈ ｅｎ ｅ ｉ ｇｈ ｂ ｏ ｒ－ｊ ｏ ｉ ｎ ｉ ｎ ｇ （ＮＪ ）ｔｒ ｅｅｗａ ｓｃ ｏｎ ｓ ｔ ｒｕ ｃ ｔ ｅｄ ．Ｔｈ ｅ ｉ ｄ ｅｎ ｔ ｉｆ ｉ ｃａ ｔ ｉ ｏｎｃ ｏｍｐ ｅ ｔｅ ｎｃ ｅｏｆ
ｐｓ ｂＡ － ｔ ｒｎＨ ｉ ｎ＾Ｘｕ ｅｔｅ ｎｇ
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ｈ ｅ ｒｂ ｓｗ ａ ｓａ ｓ ｓ ｅｓ ｓｅｄ ．Ｔｈ ｅｒｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓｓｈ ｏｗｅ ｄｔ ｈａ ｔｔｈｅ ｓ ｅｑ ｕ ｅｎ ｃ ｅ ｌ ｅｎ ｇ ｔｈ ｓａｎ ｄＧＣｃ ｏｎ ｔ ｅｎｔ ｓｏｆ
Ｓｐ ａ ｔ ｈｏ ｌ ｏｂ ｉＣａｕ ｌ ｉ ｓ ，Ｓ ａ ｒｇｅｎ ｔｏｄ ｏｘａｅＣ ａｕ ｌ ｉ ｓ ，Ｋａｄ ｓｕ ｒａｅＣ ａｕ ｌ ｉｓｗ ｅ ｒｅｄ ｉ ｆｆｅ ｒｅｎ ｔ ．Ｔｈｅｉｎ ｔ ｒａ ｓｐ ｅｃ ｉｆ ｉｃｓ ｅｑ ｕｅｎ ｃｅ ｓｈａｄｈ ｉ ｇｈ
ｓ ｉｍ ｉ ｌ ａｒ ｉ ｔ ｉｅ ｓ ，ｗｈ ｉ ｃｈｗａｓｈｉｇｈｅ ｒ ｔｈ ａｎｉｔｓｉ ｎ ｔｅ ｒｓ ｐｅｃ ｉ ｆ ｉ ｃｓｅｑ ｕｅｎ ｃ ｅ ｓ ｉｍ ｉ ｌ ａ ｒ ｉ ｔ ｙｃｏｍ ｐ ａ ｒｅ ｄｔ ｏ ｉｔ ｓａｄ ｕ ｌ ｔ ｅ ｒａｎ ｔ ｓ ．Ｔｈ ｅｍ ｉｎ ｉｍ ｕｍ
ｉ ｎ ｔｅ ｒｓｐ ｅｃ ｉ ｆｉｃｄ ｉ ｓｔ ａｎｃ ｅ ｓｏｆ Ｓｐａ ｔｈ ｏ ｌｏ ｂｉＣａｕ ｌ ｉ ｓ ，Ｓａ ｒｇｅ ｎ ｔｏｄｏ ｘａｅＣ ａｕｌ ｉ ｓ ，Ｋａ ｄｓ ｕ ｒａｅＣａｕ ｌ ｉ ｓｗ ｅ ｒｅ０ ． １ ３ ７ ，０ ． ４２ ６ａｎ ｄ０ ． ００ ３ ，
ｒｅｓｐ ｅｃ ｔ ｉ ｖｅ ｌｙ ．Ａ ｌ ｌｏｆｔｈ ｅｍｗ ｅ ｒｅｍ ｏ ｒｅ ｔ ｈ ａｎｔ ｈ ｅ ｉ ｒｍ ａｘ ｉｍ ｕｍ ｉ ｎ ｔｒａｓ ｐｅｃ ｉ ｆ ｉ ｃｄ ｉｓ ｔａｎｃｅ ｓ ，ｗ ｈ ｉ ｃ ｈｗ ｅ ｒｅ０ ．０ １ ４ ，０ ．００４ａｎ ｄ０ ．
Ｉ ｎＮ Ｊｔｒｅ ｅ ，Ｓｐ ａ ｔ ｈｏ ｌｏｂ ｉＣａｕ ｌ ｉ ｓａ ｎｄＳ ａｒ ｇｅｎ ｔｏｄ ｏｘａｅＣａｕ ｌ ｉｓｗｅｒｅｆｏ ｒｍ ｅｄｉ ｎｔｏｏｎｅｓ ｉ ｎｇｌｅｂ ｒａ ｎｃ ｈ ，ｗ ｈ ｉｃｈｃ ａｎｂ ｅｃ ｌ ｅａｒｌｙ
ｄ ｉ ｓ ｔ ｉｎｇ ｕｉ ｓｈｅｄｆｒｏ ｍｏ ｔ ｈｅ ｒ ａｄｕ ｌ ｔ ｅ ｒａｎ ｔｓ ．Ｋ ａｄｓ ｕｒａｅＣａｕ ｌ ｉ ｓ ａｎｄＫａ ｄｓ ｕｒａｈ ｅｔ ｅｒｏｃｌ ｉ ｔｅｗ ｅ ｒｅ ｆｏ ｒｍ ｅｄｉ ｎｔｏ ｏ ｎｅｓ ｉ ｎ ｇｌｅｂ ｒａｎ ｃｈ ．
Ｉ ｔｗ ａｓ ｃ ｏｎ ｃ ｌｕｄ ｅ ｄｔ ｈａ ｔｔ ｈｅｐｓ ｂＡ － ｔｒｎＨｒｅｇ ｉ ｏｎｃａ ｎａ ｃ ｃｕ ｒａ ｔ ｅ ｌ ｙｄ ｉ ｓ ｔ ｉ ｎ ｇ ｕ ｉ ｓｈＳ ｐａ ｔｈ ｏ ｌ ｏｂ ｉＣ ａｕｌ ｉ ｓ ，Ｋａｄ ｓ ｕｒａ ｅＣ ａｕ ｌ ｉ ｓ ，
Ｓ ａｒｇｅ ｎ ｔｏ ｄｏｘａｅＣａｕ ｌ ｉ ｓ ｆｒｏｍｔ ｈｅ ｉ ｒａｄ ｕ ｌ ｔｅ ｒａｎ ｔｓ ．Ｔ ｈ ｉ ｓＤ ＮＡｈａ ｒｃ ｏ ｃ ｌ ｉ ｎｇｍｏ ｌ ｅ ｃｕ ｌ ａｒ ｉ ｄｅ ｎ ｔ ｉ ｆｉ ｃａ ｔ ｉ ｏｎｍｅ ｔｈ ｏｄｃ ａｎｂ ｅｕ ｓｅｄａｓ
ａｎｅ ｆｆｅｃ ｔ ｉ ｖｅｃ ｏｍｐｌ ｅｍ ｅｎ ｔ ｔ ｏｔ ｈｅｔ ｒａｄ ｉｔ ｉ ｏｎ ａ ｌｉｄ ｅｎ ｔ ｉ ｆ ｉ ｃ ａｔ ｉ ｏｎｍ ｅ ｔｈｏ ｄｓ ．
Ｋ ｅｙｗ ｏ ｒｄ ｓ ：ｐ ｓｂＡ － ｔｒｎＨ ，Ｓ ｐ ａ ｔｈｏ ｌ ｏｂ ｉＣａ ｕ ｌ ｉ ｓ ，Ｓａｒｇｅ ｎ ｔ ｏｄ ｏｘ ａｅＣ ａ ｕ ｌ ｉ ｓ ，Ｋａｄ ｓｕ ｒａｅＣａ ｕ ｌ ｉ ｓ ，ＤＮＡｂ ａｒｃ ｏｄ ｉ ｎｇ
（ 责任编辑 ： 马雅静 张志华 ， 责任译审 ： 王 晶 ）
［ ＷｏｒｌｄＳｃ ｉｅｎｃｅ ａｎｄＴｅ ｃｈｎｏｌｏｇｙ／Ｍ ｏｄｅ ｒｎｉｚａ ｔｉ ｏｎｏｊＴｒａｄ ｉｔ ｉ ｏｎａｌ Ｃｈ ｉｎｅｓ ｅＭｅｄｉｃ ｉｎ ｅａｎｄ Ｍａｔ ｅ ｒｉａＭｅｄ ｉｃａＪ４５