全 文 ：华西药学杂志
W C J·P S 2012，27(1)∶092 ～ 093
2 讨论
文中成功测定了长春花的茎、叶、花、果中文多
灵生物碱含量的年内变化。曾采用甲醇 － 乙腈 －
1. 5%二乙胺(48∶ 12∶ 49)、乙腈 － 0. 1 mol·L －1磷酸
盐缓冲液(含 0. 5%冰醋酸，21∶ 79)及甲醇 －水(64∶
36，二乙胺调 pH11)的流动相进行分离，发现在甲
醇 －水(64∶ 36，二乙胺调 pH11)中文多灵的峰形最
好，分离度最高。实验先后采用甲醇 －水(二乙胺
调 pH11)体积比为 64∶ 36、62∶ 38、60∶ 40 的流动相进
行分离，当体积比为 62∶ 38 时，文多灵生物碱得到了
较好的分离，回收率稳定，且其他成分对文多灵生物
碱的检测不形成干扰。
通过观察长春花一年生长期内叶中文多灵生长
的含量变化，以及结合广州气候，可以发现:在 1 ～ 3
月，随着温度的升高，叶中文多灵的含量也相应增
高，在 4 ～ 10 月，温度虽然较高，生物碱含量却总体
呈现缓慢下降的趋势，这表明文多灵生物碱的生物
合成可能不仅受温度的影响，与降雨量、湿度等气候
环境也息息相关，验证了前人对长春花次生代谢物
质对单一气象因子响应的研究得出的相关结论［6］。
参考文献:
［1］ 张向飞，张荣涛，王宁宁，等． 真菌诱导子对长春花愈伤组织
中吲哚生物碱积累的影响［J］. 中草药，2004，2:201 － 204.
［2］ 祖元刚，罗猛，牟瑶松，等． 长春花生物碱成分及其药理作用
研究进展［J］. 天然产物研究与开发，2006，18:325 － 329.
［3］ 汪洪，孙敏，伍春莲，等． 长春花生物碱生物合成途径中关键
步骤与代谢调控研究进展［J］. 中国中药杂志，2001，26
(10) :656 － 659.
［4］ 杨蕾，唐中华，祖元刚．高效液相色谱法同时测定长春花中的
文多灵、长春质碱和脱水长春碱［J］. 色谱，2007，25(4) :
550 － 552.
［5］ 王化楠，唐中华，祖元刚，等． 人工种植长春花生物学性状和
生物碱含量的季节动态［J］. 植物研究，2010，30(4) :508 －
512.
［6］ 唐中华，杨蕾，梁胜楠，等．土壤不同水分条件长春花生活史
型的影响［J］. 生态学报，2007，27(7) :2742 － 2747.
收稿日期:2011 － 03 － 18
作者简介:霍生青(1970 ―) ，男，副主任药师，从事药品检验工作。Email:huoshengqing@ 163. com
HPLC测定十三味菥冥丸中的没食子酸
霍生青
(青海省海西州药品检验所，青海 海西 817000 )
摘要:目的 采用 HPLC法测定十三味菥冥丸的含量。方法 采用 EClipse XDB － C18柱(250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ，柱温 25
℃，流动相为甲醇 － 水(3 ∶ 97，冰醋酸调 pH2. 5) ，流速 0. 8 mL·min －1，检测波长为 270 nm。结果 平均加样回收率为
99. 19%，RSD = 1. 27%(n = 5)。结论 所用方法准确、简便、灵敏，可用于十三味菥冥丸的质量控制。
关键词:高效液相色谱法;十三味菥冥丸;没食子酸
中图分类号:R917 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2012)01 － 0092 － 02
Determination of the gallic acid in Shisanwei Ximing pills by RP －HPLC
HUO Sheng － qing
(Haixi State institute for Drug Control of Qinghai，Haixi，Qinghai，817000 P. R. China)
Abstract:OBJECTIVE To establish an HPLC method for the determination of gallic acidin Shisanwei Ximing pills. METHODS
Eclipse XDB － C18 column (250 mm ×4. 6 mm，5 μm)was used with column temperature of 25 ℃，methanol － water (3∶ 97，adjusted
pH2. 5)serving as mobile phase，flow rate of 0. 8 mL·min －1，detection wavelength of 270 nm. RESULTS The average recovery was
99. 19% with RSD of 1. 27%(n = 5). CONCLUSION This method is accurate，simple and sensitive for quality control of the prep-
aration.
Key words:HPLC;Shisanwei Ximing pills;Gallic acid
CLC number:R917 Document code:A Article ID:1006 － 0103(2012)01 － 0092 － 02
藏药十三味菥冥丸由菥冥子、芒果核、蒲桃、大
托叶云实、紫草茸、茜草、山矾叶、圆柏枝、诃子、豆
蔻、刀豆、波棱瓜子、巴夏嘎等十三味药材组成，具有
清热通淋、消炎止痛的作用。其质量标准仅规定了
DOI:10.13375/j.cnki.wcjps.2012.01.010
性状和检查项［1］，方中主药诃子、芒果核的主要有
效成分为没食子酸［2 － 5］。现用 RP － HPLC测定了复
方中没食子酸的含量。所用方法简便、重复性好，灵
敏、准确度高。
1 实验部分
1. 1 仪器与试药
1100 型液相色谱仪(美国 Agilent)。没食子酸
(中国药品生物制品检定所，批号:110831 －
200302) ;甲醇为色谱纯;十三味菥冥丸样品(青海
柴达木高科技药业有限公司) ;其余试剂为分析纯。
1. 2 方法与结果
1. 2. 1 溶液的制备 精密称取 6. 27 mg 没食子酸
对照品，置 50 mL 棕色量瓶中，加 50%甲醇溶解并
定容，得 0. 1254 mg·mL －1没食子酸溶液作为对照
品贮备液。精密吸取 8 mL对照品贮备液，置 10 mL
棕色量瓶中，用 50%甲醇定容，作为对照品溶液。
精密称取十三味菥冥丸细粉 0. 6 g，置 50 mL具塞锥
形瓶中，精密加入甲醇溶液 50 mL，称定重量，超声
提取 30 min，放冷，称定重量，用甲醇溶液补足减失
的重量，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。按
处方比例制成不含诃子、芒果核的阴性样品，按供试
品的制备方法处理，制成阴性溶液。
1. 2. 2 色谱条件 色谱柱为 EClipse XDB － C18柱
(250 mm ×4. 6 mm，5 μm) ，流动相为甲醇 －水溶液
(3∶ 97，冰醋酸调 pH2. 5) ，流速 0. 8 mL·min －1，柱
温 25 ℃，检测波长 270 nm。
1. 2. 3 阴性干扰试验及标准曲线的制备 取十三
味菥冥丸的供试品溶液、阴性溶液、没食子酸对照品
溶液，用 0. 45 μm微孔滤膜过滤，然后分别进样 20
μL。结果表明:在没食子酸对照品溶液出峰位置
处，样品溶液有峰而阴性溶液无峰的色谱图(图 1)。
取 0. 1254 mg·mL －1没食子酸对照品贮备溶液，分
别加 50% 甲醇溶液，稀释成 0. 1254、0. 1003、
0. 05016、0. 02508、0. 01254 mg·mL －1的溶液。按
“1. 2. 2”色谱条件，分别进样 20 μL，测定峰面积。
以峰面积为纵坐标、进样量为横坐标绘图，得回归方
程为:Y = 3. 8547 × 103X + 26. 212(r = 0. 9998) ，没食
子酸 0. 2508 ～ 2. 508 μg与峰面积的线性关系良好。
1. 2. 4 精密度及重复性试验 精密吸取 0. 05016
mg·mL －1同一对照品溶液各 20 μL，连续进样 5 次，
峰面积 RSD = 1. 93%，表明精密度良好。精密称取
同一批号的供试品 5 份，按“1. 2. 1”项方法制成供
试品溶液，在“1. 2. 2”项色谱条件下测定没食子酸
的含量。以外标法定量，计算得平均含量为 12. 10
mg·g －1，RSD = 1. 91%。
图 1 对照品(A)、供试品(B)和阴性对照品(C)溶液的色谱图
Fig 1 Chromatograms of control solution(A)，sample solution(B)
and negative control solution(C)
1. 2. 5 稳定性试验 取供试品溶液在“1. 2. 2”项
的色谱条件下，分别于放置 0、2、4、6、8 h 后进样 20
μL测定。计算没食子酸峰面积的 RSD = 2. 34%，表
明供试品溶液在 8 h内稳定。
1. 2. 6 回收率试验 取一已知含量的样品，精密平
行称取 5 份，每份 0. 3 g，准确加入一定量的没食子
酸对照品，按“1. 2. 1”“1. 2. 2”项方法测定没食子酸
的含量，并计算回收率(表 1)。
1. 2. 7 样品的测定 取同一批号的产品 3 份，按
“1. 2. 1”项方法制备溶液，分别精密吸取 20 μL 对
照品与供试品溶液，按“1. 2. 2”项色谱条件测定。
各份含量分别为 12. 06、12. 31、11. 98 mg·g －1，平均
含量为 12. 12 mg·g －1，RSD = 1. 42%(n = 3)。
表 1 没食子酸加样回收率试验结果(mg)
Table1 Results of recovery test of galli acid(mg)
Original Added Detected Recovery /% 珔X /% RSD /%
6. 03 5. 88 11. 86 99. 15 99. 19 1. 27
5. 92 6. 13 12. 01 99. 35
5. 96 6. 05 12. 06 100. 83
6. 07 5. 92 11. 83 97. 30
6. 11 5. 98 12. 05 99. 33
2 讨论
曾尝试采用甲醇 － 0. 1%冰醋酸(5∶ 95)、甲醇 －
0. 1%冰醋酸(10 ∶ 90)等作流动相，发现采用 0. 1%
冰醋酸的流动相系统时，没食子酸的峰型较差，而采
用甲醇 － 0. 1%冰醋酸(10∶ 90)时，出峰过早，因此，
选择甲醇 －水(3∶ 97，冰醋酸调 pH2. 5)既能得到较
好的峰型，出峰时间也较适宜。
参考文献:
［1］ 中华人民共和国卫生部颁标准 . 藏药第一册［S］. 1995:196.
［2］ 李国川，朱学梅，程杰，等 . RP － HPLC 法测定滋补酥油膏中
没食子酸含量［J］. 河北中医药学报，2010，25(2) :39 － 40.
［3］ 熊茉君，毛兴荣，李峰，等． HPLC测定三味蔷薇胶囊中的没食
子酸［J］．华西药学杂志，2010，25(5) :597 － 598．
［4］ 刘圆，尚远宏，孙卓然． RP － HPLC 测定不同产地和药用部位
景天三七中的没食子酸［J］． 华西药学杂志，2009，24(2) :
173 － 174．
［5］ 侯小涛，戴航，周丽霞． RP － HPLC 测定 4 个品种芝果中的没
食子酸［J］．华西药学杂志，2008，23(1) :128．
收稿日期:2011 － 02 － 08
39第 1 期 霍生青，等。HPLC测定十三味菥冥丸中的没食子酸