全 文 ：[ 收稿日期] 　2006-08-28
[ 通讯作者] 　＊陈勇 , Tel:(0771)3137585;E-mai l:cy6381@163.
com
抗痛风颗粒中青风藤 TLC鉴别与青藤碱的含量测定
陈　勇＊ ,邓家刚 ,王　勤 ,刘　婧 ,潘丽娜 ,丁光华
(广西中医学院药学院 ,广西 南宁 530001)
　　[ 摘要] 　目的:建立抗痛风颗粒中青风藤的 TLC 定性鉴别方法和青藤碱的高效液相色谱含量测定方法。方法:以青藤碱
为对照品 ,采用甲苯-乙酸乙酯-甲醇-氨水(2∶4∶2∶1)为展开剂 , 改良碘化铋钾溶液为显色剂 , 对抗痛风颗粒中青风藤进行薄层
色谱法定性鉴别。采用Agilent extend C18柱(4.6 mm×150 mm , 5μm),甲醇-0.1%磷酸溶液(用三乙胺调 pH 至10)(38∶62)为流动
相 , 262 nm 为检测波长 ,测定了抗痛风颗粒中青藤碱的含量。结果:抗痛风颗粒薄层色谱中 , 青藤碱斑点清晰 , 阴性对照无干
扰。HPLC 定量分析中 ,青藤碱线性范围为 0.414～ 2.484 μg(r=0.999 8),平均回收率为 97.6%, RSD=0.32%。 结论:所建立的
分析方法简便可行 ,可用于该制剂的质量控制 。
[ 关键词] 　抗痛风颗粒;青风藤;青藤碱;薄层色谱法;高效液相色谱法
[ 中图分类号] 　R283.6　　[文献标识码] 　B　　[ 文章编号] 　1005-9903(2007)06-0011-03
TLC Identification of Caulis Sinomenii and the Content
Determination of Sinomenine in Anti gout Granules
CHEN Yong
＊ , DENGJia-gang , WANG Qin , LIU Jing , PAN Li-na , DING Guang-hua
(Guangxi TCM University , Nanning 530001 , China)
[ Abstract] 　Objective:To develop a TLC method for Caulis Sinomenii indentification and a HPLC method for
Sinomenine determination in the anti gout granules.Methods:Caulis Sinomenii was identified on a silicagel thin layer
plate developed with methylbenzene∶acetidin∶methanol∶ammonia water (2∶4∶2∶1)and with sinomenine as the chemical
reference substance , improved.Dragendorff reagent was used for visualization.The separation of Sinomenium was carried
out on column Extend C18 4.6 mm×150 mm , 5μm.The mobile phase was the combination of methanol and the solution
of 0.1%phosphoric acid(38∶62), and the detection wareleng the was set at 262 nm.Result:Sinomenine spots on TLC
plates was separated detection warelength well.The linear range is between 0.414 and 2.484 μg(r=0.999 8)and the
recovery is 97.6%(RSD=0.32%).Conclusions:The methods are sensitive , simple , accurate and can be used for the
control of anti gout granules.
[ Key words] 　Anti gout Granules;Caulis Sinomenii;Sinomenine;TLC;HPLC
　　抗痛风颗粒由粉萆 、两面针 、青风藤等多味中
药组成 ,具有抗痛风的功能。青风藤药材 ,具有祛风
湿 、通经络 、利小便等功效 ,用于风湿痹痛 、关节肿
胀 、麻痹瘙痒[ 1] 。为有效控制该制剂的质量 ,本实验
建立了抗痛风颗粒青风藤的薄层鉴别和青藤碱含量
测定方法。现报道如下:
1　材料 、仪器与试剂
药材:青风藤药材经广西中医学院药用植物教
研室刘寿养副教授鉴 定为防己科植物青 藤
Sinomenium acutum(Thunb.)Rehd.et Wils.的干燥藤
茎 。青藤碱对照品由中国药品生物制品检定所提
供 ,批号为 0774-200105。抗痛风颗粒(广西中医学
院药学院药剂教研室自制)。
Agilient1100高效液相色谱仪 ,在线真空脱气机
·11·
第 13卷第 6 期
2007年 6 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol.13 , No.6
Jun., 2007
(G-1322A),四元泵(G-1311A),标准自动进样器(G-
1313A),智能化柱温箱(G-1316A),可变波长检测器
(G-1314A),二极管阵列检测器 ,Agilent1100 series色
谱工作站(美国安捷伦科技公司);BP211D电子分析
天平(德国赛多利斯);939薄层制板器(重庆南岸贝
尔德仪器技术厂)。
甲醇 ,乙腈(色谱纯)、磷酸(分析纯),其他试剂
均为分析纯。
2　TLC鉴别
称取本品约 2 g ,加乙醇 25 mL , 超声处理 30
min ,滤过 ,滤液水浴挥干溶剂 ,残渣加水 20 mL 使溶
解 ,用浓氨调 pH 值至 10 ～ 11 ,用氯仿萃取 2 次(20
mL/次),合并氯仿液 ,水浴挥干 ,残渣加甲醇 1mL 使
溶解 ,作为供试品溶液 。取缺青风藤阴性样品同法
处理 ,制成阴性供试品溶液。另称取青风藤药材 2
g ,用浓氨浸润 ,加乙醚 25 mL ,超声处理 30 min ,滤
过 ,滤液水浴挥干 ,残渣加甲醇 1 mL使溶解 ,作为对
照药材溶液。另取青藤碱对照品 ,加甲醇制成浓度
为1 mg/mL 的对照品溶液 。吸取上述供试品溶液和
阴性供试品溶液各 5μL ,对照药材液 3μL ,对照品溶
液5 μL ,分别点于同一硅胶 G薄层板上 ,以甲苯-乙
酸乙酯-甲醇-氨水(2∶4∶2∶1)为展开剂 ,展距 8 cm ,取
出 ,晾干 ,喷以改良碘化铋钾溶液 。供试品色谱中 ,
在与对照品溶液相应的位置上 ,显相同颜色的橙红
色斑点 ,阴性样品无干扰 。
3　含量测定
3.1　色谱条件　色谱柱:Agilent extend C18柱(4.6mm
×150 mm ,5 μm ,美国安捷伦科技公司);流动相:甲
醇-0.1%磷酸水溶液(用三乙胺调 pH 至 10)(38∶
62);检测波长:262 nm;柱温:25 ℃;流速:1 mL/min;
进样量:5μL;理论塔板数以青藤碱计不低于 3 000 ,
见图 1 ～ 3。
图 1　青藤碱对照品 HPLC色谱图　a为青藤碱
3.2　对照品溶液制备　精密称取青藤碱对照品适
量(10.35 mg),置 50 mL 量瓶中 ,用适量甲醇溶解并
稀释至刻度 ,摇匀 ,即得浓度为 0.207 mg/mL的对照
品溶液。
3.3　供试品溶液的制备　取本品约 3 g ,精密称定 ,
图 2　抗痛风颗粒供试品 HPLC色谱　a为青藤碱
图 3　缺青风藤阴性供试品 HPLC色谱图　
置 100 mL 具塞锥形瓶中 ,精密加入乙醇 30 mL ,超声
处理 30 min ,放冷 ,补足损失的重量 ,滤过 。精密量
取续滤液20 mL ,置蒸发皿中 ,水浴挥干溶剂 ,残渣加
入水 20 mL ,用浓氨溶液调 pH 值至 10 ～ 11 ,氯仿萃
取 3次(20mL ,20 mL ,15mL),合并氯仿液 ,水浴挥干
溶剂 ,残渣加甲醇使溶解 ,并定量转移至 10 mL 量瓶
中 ,用甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,离心 ,取上清液作为供
试品溶液。同法制备缺青风藤的阴性供试品溶液和
青风藤对照药材溶液 。
3.4　方法学考察
3.4.1　标准曲线制备　分别配制一系列不同浓度
的对照品溶液 ,精密吸取不同浓度的对照品溶液各
5μL注入高效液相色谱仪 ,按上述色谱条件测定峰
面积值 。以峰面积为纵坐标 ,对照品进样量(μg)为
横坐标 , 绘制标准曲线 , 并求出回归方程为 Y =
958.67X+27.7 , r=0.999 8。结果表明青藤碱进样
量在 0.414 ～ 2.484μg 间呈良好线性关系 。
3.4.2　精密度试验　取同一供试品溶液 5μL ,注入
高效液相色谱仪 ,重复进样 6次 ,测定青藤碱峰面
积 ,计算 RSD=0.13%。
3.4.3　稳定性试验　取同一供试品溶液 ,于 0 ,4 , 8 ,
12 ,24 h分别进样 5 μL ,测定青藤碱峰面积值 ,计算
RSD=0.23%,表明供试品溶液在 24 h内保持稳定 。
3.4.4　重复性试验　精密称取同一批号供试品 6
份 ,按样品测定项下方法进行测定 ,计算平均含量为
0.093 9%, RSD=0.50%。
3.4.5　加样回收率试验　取已测知青藤碱含量的
供试品干燥粗粉约 1.5 g ,精密称定 ,分别精密加入
一定量的青藤碱对照品溶液(1.450 mg/mL),按供试
品溶液制备方法制备待测溶液 ,按上述色谱条件测
定 ,计算加样回收率 ,结果见表 1。
·12·
第 13卷第 6 期
2007年 6 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol.13 , No.6
Jun., 2007
表 1　加样回收率试验结果
原有量(mg)加入量(mg)测得量(g)回收率(%) x(%) RSD(%)
1.412 1.450 2.801 97.4
1.408 1.450 2.841 97.7
1.406 1.450 2.806 97.9
1.416 1.450 2.819 97.2
1.414 1.450 2.847 97.3
1.405 1.450 2.836 97.9
97.6 0.32
3.5　样品测定　分别取不同批次的抗痛风颗粒供
试品约3 g ,精密称定 ,按供试品溶液制备方法制备 ,
注入高效液相色谱仪 ,测定峰面积值 ,以外标一点法
计算供试品中青藤碱的含量 , 结果含量分别为
0.100 ,0.103 ,0.102(%)。
4　讨论与小结
曾选用甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水(24∶2∶1)10 ℃下
放置的上层溶液作为展开剂 ,以及氯仿-丙酮-甲醇(6
∶1∶1)为展开剂 ,发现色谱斑点拖尾现象严重;亦选
用过甲苯-乙酸乙酯-三乙胺(7∶2∶1)为展开剂 ,但被
检组分色谱斑点 Rf值太低;改用甲苯-乙酸乙酯-甲
醇-氨水(2∶4∶2∶1)为展开剂 ,被检组分斑点清晰 , Rf
值适宜。
曾选用过乙醇 、乙酸乙酯超声提取后直接进样
的方法 ,但提取液杂质太多;最后确定选用 3.3项下
的方法提取 ,效果较好。
采用二极管阵列检测器对检测波长进行了考
察 ,青藤碱在 262 nm 处有最大吸收 ,因此选择该波
长作为检测波长;曾对以下几种流动相进行过考察:
①乙腈-0.1%磷酸溶液(pH调到 10)系统 ,但由于青
藤碱色谱峰出峰太快 ,为了排除溶剂峰的影响和达
到更好的分离效果 ,而没有选择这个系统 。②甲醇
-0.1%磷酸溶液系统 ,由于各峰的分离度不理想 ,达
不到分离效果而放弃了该系统 。③最后选定了甲醇
-0.1%磷酸溶液(pH调到 10)系统 ,比例为(38∶62),
测得保留时间适宜 ,分离度大于 1.5 ,分离效果好;曾
选用过 Hypersil C18柱(4.6 mm×250 mm ,5 μm ,大连
依利特公司)进行测定 ,结果得到的色谱峰拖尾严
重 ,分离度不佳 。改用Agilent extend C18柱(4.6 mm×
150 mm ,5 μm ,美国安捷伦科技公司生产的宽 pH 值
碱性柱)测定 ,得到的色谱峰峰形较好 ,分离度大于
1.5。实验中考虑到青藤碱为生物碱 ,为了达到良好
的分离效果 ,在流动相中加入三乙胺调节 pH 值至碱
性 ,且只有当 pH≥10 时才能得到较好的色谱峰峰
形 ,但普通色谱柱(C18)能耐受流动相的 pH 值范围
是 2 ～ 8 ,流动相的 pH≥10 时普通色谱柱(C18)的化
合键合相将会被破坏 ,因此 ,本实验选用了碱性宽
pH值柱(C18)进行分离 。
[参考文献]
[ 1] 　国家药典委员会.中华人民共和国药典[ S] .一部 , 北
京:化学工业出版社 , 2005.135.
《新编中药志》书讯
《新编中药志》由中国医学科学院药用植物研究所肖培根研究员主编 , 《新编中药志》是一部全面介绍我
国中药资源与研究的“志”类工具书 。前三卷为植物药:第 1卷载根与根茎类常用中药 157种;第 2卷收载种
子 、果实 、花类常用中药 150种;第 3卷收载全草 、叶 、皮 、藤木 、树脂 、藻菌及其他常用中药 151种。第 4卷内
容分为两部分 ,第一部分收载常用动物与矿物药 70种 ,第二部分为1 ～ 4卷总索引。第5卷是配合《中华人民
共和国药典》(2005年版)一部 ,收录了本书前 4卷书中未收录的新增的 28种中药 ,同时也对前 4卷中已收录
的品种在近些年的研究进展和新成果加以补充。书中对每个品种均就其历史 、原植物 、采制 、药材及产销 、化
学成分 、药材鉴定 、性味及功效 、药理作用及临床应用以及附注等作了全面介绍 ,并附了参考文献 。本书重点
加强了化学成分与前 3卷参考文献大多追踪至 2000年 ,第 4卷追踪至 2001年 。本书关于中药特性成分(或
有效成分)、药理与临床应用等方面的内容有了大幅度的增加 ,成为增补的重点 。
欲购买者请与中国中药杂志联系。汇款请寄:北京东直门内南小街 16 号中国中药杂志社 ,邮政编码
100700。务必写清汇款人姓名 、地址 、邮编 ,并注明发票单位。
本书定价:第一卷 260元 ,第二卷 210元 ,第三卷240元 ,第四卷 180元 ,第五卷 298元;全书定价 1188元 。
另附邮费 10%。
·13·
第 13卷第 6 期
2007年 6 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol.13 , No.6
Jun., 2007