全 文 ：［收稿日期］ 20160302(008)
［基金项目］ 中央本级重大增减支项目(2060302)
［第一作者］ 彭娟，硕士，助理研究员，从事药物分析研究，Tel:010-64089536，E-mail:lillejuan@ 163. com
［通讯作者］ * 刘长喜，博士，教授，从事中医中药的研究，Tel:010-64286989，E-mail:liuchangxi1963@ vip． sina． com
淮阳金花菜脂溶性成分分析
彭娟1，马伯艳2，范斌1，闫寒1，李杨1，聂颖兰1，孙健1，刘长喜3*
(1. 北京市中医药防治重大疾病基础研究重点实验室，“道地药材国家重点实验室”培育基地，
中国中医科学院 医学实验中心，北京 100700;2. 黑龙江中医药大学 基础医学院，
哈尔滨 150040;3. 北京中医药大学 养生学研究所，北京 100029)
［摘要］ 目的:探讨淮阳金花菜(秧草)脂溶性成分的组成。方法:石油醚提取秧草脂溶性成分，用气相色谱-质谱联用
(GC-MS)法进行定性分析，鉴定其化学成分，并归一化法测定其相对含量。对其中的脂肪酸成分甲酯化，以正十七烷酸甲酯
为内标对 α-亚麻酸及棕榈酸进行了定量分析。结果:定性分析共检出 26 个色谱峰，鉴定出 17 个化合物，其中 α-亚麻酸和棕
榈酸占到了相对质量分数的 45%。定量分析表明 α-亚麻酸和棕榈酸的质量分数分别为 0. 62%，0. 19%。结论:气相-质谱联
用技术能够有效地分析秧草中脂溶性成分，秧草脂溶性成分中有益脂肪酸亚麻酸几乎为棕榈酸的 3 倍。以脂肪酸类化合物的
现代研究结果阐明药食两用植物的营养价值，为其开发和利用提供更有力的依据。
［关键词］ 淮阳金花菜;脂肪酸;气相色谱-质谱法
［中图分类号］ Ｒ282 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2016)21-0055-04
［doi］ 10. 13422 / j． cnki． syfjx． 2016210055
［网络出版地址］ http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /11． 3495． Ｒ． 20160906． 0909． 022． html
［网络出版时间］ 2016-09-06 9:09
Analysis on Liposoluble Compounds of Huaiyang Medicago polymorpha
PENG Juan1，MA Bo-yan2，FAN Bin1，YAN Han1，LI Yang1，NIE Ying-lan1，SUN Jian1，LIU Chang-xi3*
(1. Beijing Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Basic Ｒesearch on Prevention and Treatment of
Major Disease，the Cultivating Bases of the National Key Laboratory of Geo-Authentic Crude Drug，Experimental
Ｒesearch Center，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100700，China;2. College of Basic
Medicine，Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040，China;3. Health
Preservation Institute，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China)
［Abstract］ Objective:To analyze the liposoluble compounds of Huaiyang Medicago polymorpha．
Method:The liposoluble compounds of M． polymorpha were extracted by petroleum ether and qualitatively
analyzed by gas chromatography-mass spectrography (GC-MS)to identify its chemical components;the relative
content of every compound was determined by normalization method． A sensitive and reliable quantitative analysis
of α-linolenic acid and palmitic acid in M． polymorpha was carried out by using methyl heptadecanoate as internal
standard． Ｒesult:The qualitative analysis showed that a total of 26 chromatographic peaks were detected and 17
components were identified． Among them，α-linolenic acid and palmitic acid accounted for 45% of the relative
content． The quantitative analysis showed that the contents of α-linolenic acid and palmitic acid were 0. 62% and
0. 19% respectively． Conclusion:GC-MS method can be used to effectively analyze the liposoluble contents of M．
polymorpha． In the liposoluble constituents，the content of beneficial fatty acids α-linolenic acid was almost 3 times
of hexadecanoic acid． The nutritional value of Chinese ancient medicinal-edible plants was elucidated by modern
research results of fatty acids，which provided a more powerful basis for the development and utilization of
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M． polymorpha．
［Key words］ Huaiyang Medicago polymorpha;fatty acid;chromatography-mass spectrometry (GC /MS)
淮阳金花菜又名秧草、南苜蓿、草头、救命草等，
为豆科苜蓿属一年生草本植物，盛产于江浙一带。
明李时珍《本草纲目》将苜蓿列入菜部，“干食益人，
可久食，利五脏……”。现国内对紫花苜蓿研究较
多，集中在多糖、黄酮、皂苷类物质的研究［1-3］，张纵
圆等［4］对紫花苜蓿籽脂肪酸化学成分进行了研究，
对于紫花苜蓿全草的脂肪酸化学成分还没有人涉
及。中国植物物种信息数据库对秧草与紫苜蓿均有
记载，秧草虽然是苜蓿属，但是与紫花苜蓿 Medicago
sativa为不同种，为一年生或者跨年生(秋季大棚栽
培可存活至次年的 5 月左右)，木本化程度较苜蓿
轻。秧草是中国古老的药食两用植物，与之相关的
资源与鉴定领域研究很少，也没有脂溶性成分及脂
肪酸成分的研究报道。刘长喜教授等对秧草进行系
统的营养学分析与评价，研究表明淮扬金花菜(秧
草)嫩芽含有大量的蛋白质和膳食纤维，及丰富的
维生素、微量元素和矿物质，蛋白质氨基酸模式十分
接近于人体蛋白质氨基酸模式［5］。本文的研究提
取了秧草的脂溶性成分，运用气相色谱-质谱联用技
术(GC /MS)对各成分加以分析鉴定，发现其富含多
不饱和脂肪酸———亚麻酸。秧草廉价、资源充足，
以脂肪酸类化合物的现代研究结果阐明了它的营
养价值，为其开发和利用提供更有力的依据。比
较于紫苜蓿的研究与开发利用，秧草还有许多研
究空白，课题组将进一步深入的开展秧草化学成
分的研究。
1 材料
淮阳金花菜于 2015 年 4 月在江苏扬中采集，由
北京中医药大学刘长喜教授鉴定为淮阳金花菜(秧
草)Medicago polymorpha 的全草。粉碎后，过二号
筛，存放于实验室 － 20 ℃冰箱。
7890A /5975C型气相色谱-质谱联用仪(美国安
捷伦公司)，Buchi_Ｒ-3 型旋转蒸发仪(瑞士步琦公
司)，GL-5-A型离心机(上海安亭科学仪器厂)。正
十七酸甲酯，α-亚麻酸，棕榈酸对照品，10%三氟化
硼甲醇溶液 (Sigma 公司，批号分别为 51633，
BCBP5563V，BCBN5629V，SHBF2545V);正辛烷(化
学纯)，氢氧化钾(分析纯)，购于国药集团化学试剂
有限公司;氯化钠(分析纯)，石油醚(分析纯)，购于
北京化工厂;乙酸乙酯(色谱纯)，购于 Thermo
Fisher Scientific公司。
2 方法与结果
2. 1 样品溶液的制备
2. 1. 1 定性样品的制备 称取秧草粉末 280 g，以
5 倍量 95%乙醇回流提取 1 h，将提取液以 4 000 r·
min －1离心 10 min，取上清液，如此反复提取 3 次。
合并上清液，减压回收至 100 mL，加入超纯水 150
mL混匀，置 4 ℃冰箱放置过夜。以石油醚(30 ～ 60
℃)200，300，300 mL萃取 3 次，合并上层萃取液，下
层液体再以石油醚(60 ～ 90 ℃)300，300 mL 萃取 2
次，合并上层萃取液。合并不同沸程石油醚的 2 次
萃取液，80 ℃水浴浓缩，放冷，过滤，共得滤液 280
mL，该滤液为约含生药 1. 0 g·mL －1粗萃取液。取该
粗萃取液 20 mL置蒸发皿，80 ℃水浴蒸干，考察了
脂溶性成分提取率为 8. 12%，以乙酸乙酯复溶残
渣，稀释至 10 mL量瓶中，定容。将该样品以乙酸乙
酯稀释 100 倍，过滤，即为待测样品。
2. 1. 2 定量样品制备 取秧草细粉约 0. 1 g，精密
称定，置锥形瓶中，精密加入石油醚(60 ～ 90 ℃)20
mL，超声处理 30 min，滤过，精密吸取滤液 1 mL 置
于鸡心瓶中，精密加入 502. 3 mg·L －1正十七烷酸甲
酯内标溶液 100 μL，旋蒸至干，加入 0. 5 mol·L －1的
氢氧化钾溶液 1 mL，置 60 ℃水浴中加热 30 min，取
出，放冷，再加入 10%三氟化硼的甲醇溶液 0. 5 mL，
置 60 ℃水浴中加热 15 min，取出，放冷，精密加入正
辛烷 5 mL，充分振摇，加饱和氯化钠溶液 5 mL，取正
辛烷液，滤过，取滤液，即得［6］。考察了该方法的脂
溶性成分提取率，其提取率为 1. 7%。
2. 1. 3 对照品溶液的配制 取正十七烷酸甲酯，
α-亚麻酸，棕榈酸对照品各 500 mg，精密称定，置 10
mL量瓶中，前两者以正辛烷溶解定容，棕榈酸加入
少量甲醇，之后以正辛烷溶解定容，为各对照品储备
液，备用。正十七烷酸甲酯临用前以正辛烷配制成
502. 3 mg·L －1内标溶液。
2. 2 定性气相色谱-质谱分析条件 定性色谱条
件［7］，HP-5 ms超高惰性毛细管柱(0. 25 mm × 30 m，
0. 25 μm)，程序升温:起始温度 50 ℃，以 25 ℃·min －1
速率升至 170 ℃，保持 10 min，再以 1 ℃·min －1升至
180 ℃，不停留，继续以 5 ℃·min －1速率升至 190 ℃，
保持 5 min，再以 5 ℃·min －1速率升至 200 ℃，保持 10
min，最后以 5 ℃·min －1速率升至 220 ℃，保持 10
min。进样口温度 250 ℃，不分流进样，载气为氦气，
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恒流模式 1 mL·min －1，辅助温度 250 ℃。
定性质谱条件:电离方式 EI，电子能量 70 eV，离
子源温度 230 ℃，四级杆温度150 ℃，进样6 min后采
集图谱，质量扫描范围 m/z 50 ～ 350。色谱图中相应
的质谱图采用工作站谱库(NIST8. 0库)进行检索。
2. 3 定性气相色谱-质谱分析结果 按 2. 2 项下试
验方法，得到秧草的脂溶性成分的 GC/MS 的总离子
流图(图 1)。用毛细管气相色谱分离出 26 种化学成
分，利用 GC/MS 仪 NIST8. 0 谱图库自动检索被分析
组分的物质名称，对检索结果进行人工核对，确定各
成分的物质名称。共鉴定出其中 17 种成分，采用峰
面积归一法得到各主要成分的相对质量分数(表 1)。
a. 棕榈酸;b. 植物醇;c. α-亚麻酸
图 1 秧草脂溶性成分气质联用总离子流色谱
Fig． 1 Total ion current chromatogram of liposoluble compounds of
Medicago polymorpha by GC/MS
表 1 秧草脂溶性成分的分析
Table 1 Analytical results of liposoluble compounds of Medicago
polymorpha
No． tＲ /min 成分 相对质量分数 /%
1 11. 48 肉豆蔻酸，十四酸 0. 297
2 14. 47 6，10，14-三甲基-2-十五烷酮 0. 434
3 14. 97 正十五酸 0. 051
4 15. 26 1，13-十四烯二烯 0. 296
5 16. 03 1，4-二十碳二烯 0. 474
6 20. 03 棕榈酸 12. 293
7 21. 72 棕榈酸乙酯 0. 173
8 27. 4 亚麻酸甲酯 0. 175
9 27. 995 植物醇，叶绿醇 2. 640
10 29. 74 亚麻酸 33. 600
11 31. 06 亚麻酸乙酯 0. 828
12 31. 60 棕榈酰胺 0. 554
13 33. 56 l-十八烷烯 0. 194
15 50. 07 正十七烷 1. 590
16 54. 26 2，6，10，15-四甲基十七烷 0. 761
17 56. 93 9-十八烯酰胺 0. 723
2. 4 定量气相色谱-质谱分析条件 定量色谱条
件:色谱柱为 DB-WAX 毛细管柱(0. 25 μm × 0. 25
mm，30 m)，程序升温:起始温度 50 ℃，保持 1 min，以
25 ℃·min －1速率升至 250 ℃，再以 3 ℃·min －1升至
230 ℃，保持 3 min，进样口温度 250 ℃，不分流进样，
载气为氦气，恒流模式1 mL·min －1，辅助温度250 ℃。
定量质谱条件:电离方式 EI，电子能量 70 eV，
离子源温度 230 ℃，四级杆温度 150 ℃，进样 6 min
后总离子图谱及提取离子图谱同时采集，质量扫描
范围 m/z 50 ～ 550，6 ～ 11 min采集离子组［8］m/z 74，
270，284，11 min之后采集离子组 m/z 79，261，292。
色谱图中相应的质谱图采用工作站谱库(NIST8. 0
库)进行检索。
2. 5 专属性考察 按 2. 3 项下试验方法，得到秧草
的脂溶性成分的 GC /MS 的提取离子流图(图 2)。
除不加入内标正十七烷酸甲酯，样品均按 2. 1. 2 项
下步骤制备，样品在约 11 min 无内标正十七烷酸甲
酯的峰，故以该化合物为内标进行 α-亚麻酸及棕榈
酸的定量。
A. 样品;B. 对照品;C. 样品未加内标。1. 月桂酸甲酯;2. 肉豆蔻酸
甲酯;3. 十五酸甲酯;4. 棕榈酸甲酯;5. 十七酸甲酯(内标);6. 亚油
酸甲酯;7. 亚麻酸甲酯
图 2 秧草脂溶性成分气质联用提取离子色谱
Fig． 2 Extract ion chromatograms of of liposoluble compounds of
Medicago polymorpha by GC/MS
2. 6 线性关系考察 标准曲线的制备:将 α-亚麻
酸(48. 74 g·L －1)，棕榈酸(47. 92 g·L －1)储备液以
正辛烷为溶剂稀释，配制成 α-亚麻酸质量浓度范围
为 121. 9，243. 7，487. 4，974. 8，1 949. 6 mg·L －1，棕
榈酸 59. 9，119. 8，239. 6，479. 2，958. 4 mg·L －1共 5
个系列质量浓度。分别精取 α-亚麻酸对照品溶液，
棕榈酸对照品溶液 100 μL，按 2. 1. 2 项定量样品制
备项下，精密加入 502. 3 mg·L －1正十七烷酸甲酯内
标溶液 100 μL”步骤操作。α-亚麻酸的定量离子为
m/z 79，棕榈酸与内标定量离子为 m/z 74，以 α-亚麻
酸、棕榈酸与内标的峰面积比为 Y，以 α-亚麻酸、棕
榈酸的质量浓度为 X，进行线性回归，得到 α-亚麻酸
在 2. 437 ～ 38. 99 mg·L －1线性范围的回归方程 Y =
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0. 476 0X + 0. 005 5，相关系数 r = 0. 999 3，棕榈酸在
1. 198 ～ 19. 17 mg·L －1线性范围的回归方程 Y =
1. 149 3X － 0. 059 2 相关系数 r = 0. 999 4。
2. 7 精密度试验 将制备的样品连续进样 6 次，
α-亚麻酸色谱峰面积与内标色谱峰面积的比值的
ＲSD 0. 3%;棕榈酸色谱峰面积与内标色谱峰面积
的比值的 ＲSD 0. 5%，说明仪器精密度良好。
2. 8 重复性试验 取同一样品平行制备 6 份，α-
亚麻酸平均质量分数为 0. 62%，ＲSD 1. 6%;棕榈酸
平均质量分数为 0. 19%，ＲSD 2. 0%，说明试验重复
性良好。
2. 9 加样回收率试验 取秧草样品 0. 1 g，精密称
定，精密加入 2. 437 g·L －1 α-亚麻酸对照品，1. 198
g·L －1棕榈酸对照品溶液各 0. 1 mL，平行 6 份，按照
2. 1. 2 项下方法制备供试品溶液，按 2. 4 项下条件
测定含量，计算回收率。α-亚麻酸和棕榈酸回收率
分别为 95. 2%，97. 3%;ＲSD分别为 2. 8%，3. 2%。
2. 10 稳定性试验 将制备的样品于 0，2，4，6，8，
24 h内重复进样测定 6 次，α-亚麻酸峰面积的 ＲSD
1. 2%;棕榈酸峰面积的 ＲSD 1. 8%，显示样品溶液
在 24 h内稳定。
2. 11 含量测定 按 2. 1 项下样品及对照品制备方
法，测定了秧草头茬及二茬样品的 α-亚麻酸质量分
数分别为 0. 62%，0. 20%;棕榈酸质量分数分别为
0. 19%，0. 39%。
3 讨论
秧草的脂溶性成分以脂肪酸、植物醇类化合物
为主，烯类和烃类化合物少量。定性试验发现秧草
中有益脂肪酸 α-亚麻酸的含量比例非常高，相对质
量分数达到了 33. 6%。于是将秧草样品甲酯化进
行 α-亚麻酸的定量分析。由于甲酯化并优化气相
质谱条件以后，检测的杂质及背景干扰降低，检测到
秧草中 7 种脂肪酸成分，并利用 GC /MS 仪 NIST8. 0
谱图库自动检索被分析组分的物质名称，并对检索
结果进行人工核对，确定各成分的物质名称，发现有
月桂酸、肉豆蔻酸、正十五酸、棕榈酸、亚油酸及 α-
亚麻酸。其中 α-亚麻酸含量最高，秧草头茬达到
了 0. 62%。
α-亚麻酸是 ω-3 不饱和脂肪酸系列中唯一的人
体不能自身合成、需从食物中摄取的必需脂肪酸，在
体内代谢可生成二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳
五烯酸(EPA)，对血脂代谢、心脑血管系统疾病的防
治、免疫功能异常、精神障碍、致老年痴呆等均有重
要影响。流行病学研究表明，利用从海洋资源、植物
资源中获得的或直接补充 α-亚麻酸均对包括心脑
血管疾病和癌症在内的几种疾病的发病有很好的预
防作用，对儿童大脑发育也具有特别重要的作用，产
妇缺乏 α-亚麻酸可能会导致几种神经系统疾
病［9-10］。增加 α-亚麻酸摄取量可以促进婴幼儿视网
膜、大脑和神经系统发育，降低糖尿病患者血清低密
度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和甘油三酯 (TG)水平;
抑制体外培养的乳腺、前列腺和结肠癌细胞增生，促
进细胞凋亡［11］。
秧草耐寒、抗旱、抗病虫害能力强，整个生长过
程无需施化肥以及其他农药，是真正意义上的无公
害绿色食品，其高蛋白、高膳食纤维、低脂肪的营养
特征非常适宜于糖尿病、高血脂、高血压、痛风以及
肥胖等代谢综合征人群的饮食营养干预，具有十分
广阔的开发应用前景。
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［责任编辑 邹晓翠］
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