全 文 ：湖 北 农 业 科 学 2014 年
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收稿日期：2014－05－29
基金项目：青海省自然科学基金项目（2011－Z908）
作者简介：邱海洋（1984－），男，陕西绥德人，研究方向为药学，（电话）18797396002（电子信箱）961749321＠qq．com；通讯作者，林鹏程（1966－），
男，教授，硕士生导师，主要从事藏药化学成分及质量控制研究，（电话）0971－8804649（电子信箱）qhlpc＠126．com。
金丝桃属植物在抗抑郁、抑制中枢神经、抗肿
瘤和抗病毒 ［1－3］方面的突出作用， 使得该属植物的
研究受到国内外普遍关注［4］。 遍地金（Hypericum wigh-
tianum）为藤黄科金丝桃属多年生草本植物，分布于
云南、四川、贵州、西藏等地，有收敛止血、清热解毒
的功效，民间用于治疗小儿炎症、久痢、久泻、毒蛇
咬伤等疾病［5］。近期研究发现，该植物具有明显的抗
抑郁作用［6］，该作用不仅与金丝桃素含量有关，还与
植物中所含其他成分相关［7］。 已有对该植物化学成
分及分析方法的报道 ［8］，但未见对该植物中槲皮素、
HPLC法同时测定遍地金中 4种黄酮类成分的含量
邱海洋 1，林鹏程 1，2，马建滨 2，3，姚 晶 1，2，曾擎屹 1，2
（1．青海民族大学，西宁 810007；2．青海省青藏高原植物化学研究重点实验室，西宁 810007；3．青海师范大学，西宁 810001）
摘要：建立同时测定遍地金（Hypericum wightianum）药材中槲皮素、槲皮苷、木犀草素、山奈酚含量的高效
液相色谱分析方法。 采用 Agilent Eclipse XDB－C18（4．6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，检测波长 360 nm，柱
温 30 ℃，槲皮素、槲皮苷、木犀草素、山奈酚线性范围分别为 0．078～2．340 μg、0．106～3．180 μg、0．04～1．200
μg、0．062～1．860 μg；遍地金中槲皮苷、槲皮素、木犀草素、山奈酚的含量分别为 0．385％、0．022％、0．012％和
0．111％，该方法简便快速、准确实用。
关键词：遍地金（Hypericum wightianum）；高效液相色谱法；槲皮素；槲皮苷；木犀草素；山奈酚
中图分类号：O657．32； 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2014）16－3898－03
Simultaneously Determing of Four Flavonoids in Hypericum wightianum with HPLC
QIU Hai－yang1， LIN Peng－cheng1，2，MA Jian－bin2，3，YAO Jing1，2，ZENG Qing－yi1，2
（1．College of Chemistry and Life Science ， Qinghai Nationality University， Xining 810007， China；
2．Key Laboratory of Plant Resources of Qinghai－Tibet Plateau in Chemical Research， Xining 810007，China；
3．Department of geography and Life Science ， Qinghai Normal University， Xining 810008， China）
Abstract：To simultaneously determine the contents of quercitrin，quercetin，luteolin and kaempferol in harb Hypericum
wightianum， the samples were separated on the column of Kromasil C18 （4．6 mm×250 mm，5 μm） eluted with methanol and
water （0．04％ phosphoric acid）． The sample size was 10 μL． The wavelength uesd was 360 nm and column temperature was
30℃． The linear ranges of quercitrin， quercetin ，luteolin and kaempferol were 0．078－2．340 μg，0．106－3．180 μg， 0．040－1．200
μg and 0．062－1．860 μg， respectively． The contents of four flavonoids from seven different areas in Qinghai province and
different organs were 0．385％，0．022％，0．012％ and 0．111％． The method was rapid and accurate．
Key words：Hypericum wightianum；HPLC；quercitrin；quercetin； luteolin；kaempferol
第 53 卷第 16 期
2014年 8 月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol． 53 No.16
Aug．，2014
第 16 期
槲皮苷、木犀草素、山奈酚含量同时测定的报道。试验
建立了同时测定上述 4 种成分含量的 HPLC 方法，
为该资源后续开发利用及为新药源研究提供参考。
1 材料与方法
1．1 材料与仪器
1．1．1 材料 遍地金：2011 年采自西藏林芝地区，
阴干后粉碎备用 。 所用标准品槲皮苷 （批号 ：
111538－200403）、槲皮素 （批号 ：100081－200406）、
木犀草素 （批号 ：111520－200201）、山奈酚 （批号 ：
110861－200707）均购自中国药品生物制品检定所。
色谱纯甲醇为高效液相色谱专用试剂（山东禹王实
业有限公司禹城化工厂）；水为娃哈哈纯净水；磷酸
为 AR级（天津市红岩试剂厂）。
1．1．2 仪器 Agilent 1200 型高效液相色谱仪 （美
国安捷伦科技有限公司）、AG204 型电子分析天平
（南京安铎贸易有限责任公司）、SHB—Ⅲ型循环水
式多用真空泵（上海科兴仪器有限公司）、EYEL4 型
旋转蒸发仪（日本东京理化器械株式会社）。
1．2 试验方法
1．2．1 色谱条件 色谱柱 ：Eclipse XDB－C18（4．6
mm×250 mm，5 μm）柱。 流动相：甲醇（A）－0．2％的磷
酸水（B），流动相在 30 min 内甲醇由 35％线性增加
至 65％。 流速 1．0 mL/min；柱温 30 ℃，检测波长 360
nm；进样量 10 μL。
1．2．2 样品溶液的制备 分别精密称取经五氧化
二磷干燥过夜的槲皮苷、槲皮素、木犀草素、山奈酚
标准品适量， 用色谱纯甲醇分别配置成 0．78、1．06、
0．40、0．62 mg/mL的储备液。
1．2．3 供试品溶液的制备 精密称取地黄金粉末
1．014 g，置于三角瓶中，精密加入 20 mL 甲醇，密封
室温下浸泡 2 h， 超声波处理 2 h， 冷却至室温，称
重，用甲醇补足减少的重量，移至 25 mL 容量瓶甲
醇定容，测加标回收率。
2 结果与分析
2．1 色谱图结果
对照品和样品色谱图见图 1。由图 1可知，槲皮
苷、槲皮素、木犀草素、山奈酚保留时间分别为15．1、
22．1、27．1 min 和 28．2 min， 遍地金中的槲皮素和山
奈酚含量较高，槲皮苷和木犀草素较低。
2．2 标准曲线及线性范围
取标准品储备液稀释 10 倍后在选定的色谱条
件下分别进样 1、5、10、15、20、30 μL， 以进样量（X）
为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标做一元线性回归，4
种黄酮类物质标准曲线分别为 Y＝1 807X－41．85、Y＝
3 309X－18．23、Y＝2 363X－19．09、Y＝3 246X－7．84，线
性范围分别为：0．078～2．34 μg、0．106～3．18 μg、0．04～
1．2 μg、0．062～1．86 μg，线性相关系数分别为 0．999 6、
0．999 7、0．999 7、0．999 8。
2．3 精密度试验结果
量取标准品 10 μL，在选定的色谱条件下测定 5
次，得到槲皮苷、槲皮素、木犀草素、山奈酚峰面积
的 RSD分别为 0．97％、0．91％、1．1％、0．81％， 表明仪
器精密度良好。
2．4 重复性试验结果
样品溶液在选定的色谱条件下进样 10 μL，重
复测定 5 次，得到槲皮苷、槲皮素、木犀草素、山奈
酚峰面积的 RSD分别为 1．6％，1．7％，1．2％，1．6％，表
明重复性良好。
2．5 稳定性试验结果
取“1．2．3”中样品溶液，分别放置 0、2、4、6、12 h
后在“1．2．1”色谱条件下进样，每次进样 10 μL，得到
槲皮苷、槲皮素、木犀草素、山奈酚峰面积的 RSD 分
别为 1．6％、1．4％、1．4％、1．7％，表明供试溶液在 12 h
内稳定。
2．6 加标回收率试验结果
精密称取遍地金粉末 0．5 g共 3份， 分别添加
标准品溶液：槲皮苷（0．78 mg/mL）2．28 mL、槲皮素
图 1 对照及样品色谱图
1．槲皮苷 2．槲皮素 3．木犀草素 4．山奈酚
100
0
10 15 20 25 30
保留时间//min
m
AU
1
2
3
4
a．对照品
50
0
10 15 20 25 30
保留时间//min
m
AU
1
2
4
b． 样品
3
邱海洋等：HPLC 法同时测定遍地金中 4 种黄酮类成分的含量 3899
湖 北 农 业 科 学 2014 年
（责任编辑 龙小玲）
组相较空白对照组和产 VE 对照组提高并不多，优
化效果不明显，推测可能与 PDA 培养基作基本培养
基有关， 与察氏培养基相比，PDA 培养基中营养成
分更全面复杂一些； 从试验中测得的 VE 的含量来
看，比前期试验结果要低很多，推测其原因可能是
提取剂和提取方法的影响。 产 VA 和 VE 的最适添
加氮源分别为硝酸钠和蛋白胨。
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（上接第 3894页）
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（1．06 mg/mL）溶液 0．11 mL、木犀草素（0．40 mg/mL）
溶液 0．15 mL、 山奈酚 （0．62 mg/mL）0．90 mL，按
“1．2．3”操作，测得加标回收率分别为槲皮苷 99．6％、
槲皮素 96．4％、木犀草素 98．6％、山奈酚 102．7％，说
明准确程度良好。
2．7 样品测定
按选定的色谱条件测定遍地金样品中 4 种黄
酮类成分的含量，进样量 10 μL，以外标法定量，测
得槲皮苷、槲皮素、木犀草素、山奈酚的含量分别为
0．385％、0．022％、0．012％和 0．111％。
3 小结与讨论
本试验采用反相高效液相色谱法测定遍地金
中 4 种黄酮类成分槲皮苷、槲皮素、木犀草素、山奈
酚 的 含 量 分 别 为 0．385％ 、0．022％ 、0．012％ 和
0．111％，该方法具有操作简便，准确度高，重复性好
等优点，对该资源的评价、开发利用以及新药源研
究具有一定的现实意义。
试验前期比较了甲醇、乙醇、水等不同溶液作
为提取剂，结果以甲醇提取的黄酮含量较高，色谱
峰形较佳，分离效果较好。 考虑超声波提取方法简
单，耗时少，所以选择超声波提取法，而没有选择热
回流法。试验所测的 4种黄酮成分在 260 nm 和 360
nm 处均有较大吸收，但 260 nm 处干扰较大，故选择
360 nm 做检测波长。
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（责任编辑 龙小玲）
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