全 文 ：液的制备方法制得供试液 ,测定盐酸小檗碱的含量 ,
计算回收率 ,结果见表 1。
表 1　回收率试验结果
Tab 1　Determina tion results o f recove ry test
样品中含量
/mg
加入量
/mg
测定量
/mg
回收率
/%
平均回收率
/%
RSD
/%
1. 226 0. 532 1. 748 98. 12
1. 192 0. 495 1. 682 98. 99
1. 232 0. 511 1. 740 99. 41 98. 38 3. 79
1. 180 0. 489 1. 662 98. 56
1. 236 0. 522 1. 749 98. 28
1. 240 0. 561 1. 799 99. 64
3. 4. 7　含量限度的制定　含量限度是在检验方法
确定的基础上 ,积累足够的数据后总结提出的 。一
般应积累 10批以上的含量数据 ,提出限度。本品根
据以下样品测定结果规定下限 ,本品下限为每 1 mL
含小檗碱以盐酸小檗碱(C20H17NO 4 HCl)计 ,不得
少于0. 04 mg 。取样品 10批 ,进行盐酸小檗碱含量
测定 ,结果见表 2 。
4　讨论
慢性盆腔炎病程长 ,长期服苦寒药易伤胃 ,患者
表 2　样品含量测定结果
Tab 2　Results o f contenl de termination of the samples
批 号 平均含量 /g L- 1 批号 平均含量 / g L- 1
040410 0. 041 2 050303 0. 045 1
040520 0. 043 2 050512 0. 040 2
040809 0. 040 1 050722 0. 044 3
041027 0. 043 3 050809 0. 045 5
041201 0. 042 5 050825 0. 429
难以接受 。采用保留灌肠 ,局部用药 ,药物浓度高 ,
吸收性能好 ,直达病灶部位 。实验表明 ,常规量的黄
桂灌肠剂具有良好的抗炎 、止痛 、退热 、抑菌及活血
化淤等作用;大剂量黄桂灌肠剂 (以临床使用量的
20倍给小鼠灌肠)使用后未见急性毒性反应与局部
刺激反应。据观察该制剂对慢性盆腔炎有效率在
95%以上。
参考文献:
[ 1] 　黄兰英.黄桂灌肠剂治疗慢性盆腔炎 100例[ J] . 江苏中医 ,
1996 , 17(9):17-18.
[ 2] 　中国药典.一部[ S] . 2005.附录 31.
[收稿日期] 2005-09-09
[ 基金项目] 国家自然科学基金资助项目(编号:30271590)　[ 作者简介] 张秀桥 ,女 ,博士 ,副教授 ,电话:027-65783493 , E-mail:qiaoxzh 2000@
yahoo. com. cn　[ 通讯作者] 陈家春 ,男 ,博士 ,教授 ,电话:027-83692482 , E-m ail:homespringch en@s oh u. com
紫红獐牙菜高效液相色谱指纹图谱的研究
张秀桥1 ,田峦鸢1 ,侯俊杰1 ,陈家春1. 2 ,刘焱文1 　(1 .湖北中医学院 ,湖北 武汉 430061;2. 华中科技大学同济医学院药
学院 , 湖北 武汉 430072)
[ 摘要] 　目的:建立紫红獐牙菜药材甲醇溶解部分的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱。方法:HPLC 色谱法 , 色谱柱为 Kro-
masil C18(250 mm×4. 6 mm , 5μL), 流动相为甲醇-水(水中含0. 05%磷酸)-乙腈 , 梯度洗脱 , 流速为 0. 8 m L min- 1 ,检测波长
为 254 nm ,柱温为 30 ℃。结果:初步建立紫红獐牙菜药材的 HPLC 指纹图谱 , 标定了 13 个共有特征峰 , 并利用对照品对 4个
特征峰进行了鉴定。结论:该方法简便 、可靠 ,进一步完善了紫红獐牙菜药材的质量标准。
[ 关键词] 　紫红獐牙菜;高效液相色谱法;指纹图谱
[中图分类号] R978　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2006)08-0922-03
Study on HPLC fingerprint of Swertia punicea
ZHANG Xiu-qiao1 , TIAN Luan-yuan1 , HOU Jun-jie1 , CHEN Jia-chun2 , LIU Yan-wen1(1. Hubei College of
T raditional Chinese Medicine , Hubei Wuhan 430061 , China;2. T ongji Medical callege of Huazhong University of Sceince and
technology , Hubei Wuhan 430030 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To establish an H PLC fingerprint o f the methanol ex tract from S wertia p unicea. METHODS　A
co lumn of K romasil C18(250 mm×46 mm , 5 μL) w as used. The mobile phase conststed o f methano l-w ater(containing 0 . 05%
H3PO 4)-ACN , Gradientelution mode w as adopted. F low rate was 0. 8mL min- 1 . Waveleng th o f detection 254nm. Co lumn
temper ture was 30℃.RESULTS　The fingerprint of Swe rtia punicea w as established w as containing 13 common peaks 4 com-
mon peaks we re identified using refer ence substance. CONCLUSION　I t is a sim ple and reliable mea thod in contr olling the qual-
ity o f Swertia p unicea.
KEY WORDS:S wertia punicea;H PLC;finge rprint
922 中国医院药学杂志 2006年第 26卷第 8期 Chin H osp Pharm J , 2006 Aug , Vol 26 , No. 08
　　紫红獐牙菜又名山黄连 、布什都补此(彝族)等 ,
来源于龙胆科獐牙菜属植物 Swert ia punicea ,主要
分布于湖北 、四川 、贵州和云南等省区。具清热除
湿 、利胆的功效[ 1] ,在我国民间长期用于治疗肝炎 ,
对胆囊炎也有较显著疗效[ 2] 。研究表明紫红獐牙菜
主要含苦苷类 、口山 酮及其苷类 、齐墩果酸等成分 ,
其中抗炎有效成分为齐墩果酸 、芒果苷等[ 3] ,为了进
一步评价其药材质量和疗效 ,我们利用 HPLC 色谱
法对其药材指纹图谱进行了研究。
1　材料
1. 1　药材　采集湖北西部地区不同产地的样品 10
批 ,经华中科技大学同济医学院陈家春教授鉴定为
紫红獐牙菜 Swert ia punicea ,见表 1。
表 1　紫红獐牙菜样品
Tab 1　Ten samples o f S wertia punicea
样品 产地 采集日期 样品 产地 采集日期
1 鹤峰奇峰关 2003-10-5 6 五峰长乐坪 2003-10-15
2 鹤峰太平镇 2003-10-8 7 五峰采花 2003-10-20
3 鹤峰五里坪 2003-10-12 8 五峰弯潭 2003-10-22
4 鹤峰走马坪 2003-10-16 9 恩施天桥 2003-10-20
5 鹤峰江口 2003-10-22 10 恩施白杨坪 2003-10-25
1. 2　仪器与试剂　DIONEX高效液相色谱仪(德
国鼎泰科技有限公司);对照品獐牙菜苦苷(Sw er-
tiamarin , 批号 0785-200203 ,1)、龙胆苦苷(gentiop-
icroside ,批号 110770-200409 ,2)均购自中国药品生
物制品检定所;芒果苷(mangife rin , 3)、8-o-β– D-
吡喃葡萄糖基-1 , 5-二羟基-3-甲氧基口山酮(sw er-
t rianolin , 4)经 95%乙醇渗漉提取 、反复硅胶柱分
离 、葡聚糖凝胶柱纯化得到 ,经 UV 、IR 、1HNMR 、13
CNM R 、MS 鉴定结构 , HPLC 法测定纯度大于
98%;甲醇 、乙腈均为色谱纯;水为注射用水;磷酸为
化学纯 ,经0. 45 μm滤膜滤过。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件　K romasil C18(250 mm×4. 6 mm ,
5μm)色谱柱;流动相:甲醇-水(水中含 0. 05%磷
酸)-乙腈;梯度洗脱程序 0 ～ 30 min ,甲醇体积份数
(下同)由 15%增至 55%, 30 ～ 45 min , 55%, 45 ～
60 min ,由 55%增至 65%,60 ～ 90 min ,由 65%增至
70%,乙腈体积分数为 5%;流速:0 . 8 mL min-1 ;检
测波长:254 nm;柱温:30 ℃;进样量:10μL。
2. 2　供试品和对照品溶液的制备　取紫红獐牙菜
全草0. 5 kg 粉碎 ,过 5号筛 ,混合均匀后精密称定
0. 258 g ,用甲醇浸泡过夜 ,超声提取 2 次 ,每次 20
min ,滤过 ,用甲醇定容于 10 mL 量瓶 ,过0. 45 μm
滤膜备用 。精密称定对照品于量瓶中 ,用甲醇定容 ,
制成獐牙菜苦苷1. 93 g L- 1 、龙胆苦苷1. 57 g L- 1 、
芒果苷 0. 31 g L-1 、8-o-β-D-吡喃葡萄糖基-1 , 5-二
羟基-3-甲氧基口山酮 0. 31 g L - 1对照品溶液 , 过
0. 45μm 滤膜备用。
2. 3　精密度试验　取同一供试品溶液 ,连续进样 5
次 ,以芒果苷为标准 ,测得各共有特征峰相对保留时
间(RRT)的 RSD 均小于 3%,各共有特征峰相对峰
面积(RA)的 RSD均小于 5%,结果表明精密度良
好。
2. 4　重复性试验　取同一批样品 5份 ,精密称定 ,
按2 . 2 项下制备供试品溶液 ,分别进样 ,以芒果苷为
标准 ,测得各共有特征峰相对保留时间(RRT )的
RSD均小于 3%,各共有特征峰相对峰面积(RA)的
RSD均小于 5%, 结果表明重复性良好 。
2. 5　稳定性试验　取同一供试品溶液 ,分别在 0 ,
2 ,4 ,8 , 12 , 24 h进样 ,以芒果苷为标准 ,测得各共有
特征峰相对保留时间(RRT)的 RSD 均小于 3%,各
共有特征峰相对峰面积(RA)的 RSD 均小于 5%,
结果表明供试品溶液在 24 h 内稳定。
2. 6　指纹图谱及技术参数 、主要色谱峰的鉴定　按
照中药指纹图谱研究技术[ 4]要求 ,测定 10批紫红獐
牙菜供试品。根据 10批供试品溶液的 HPLC 图谱
所给出的相关参数 ,紫红獐牙菜药材甲醇溶解部分
的所有色谱峰在90 min内全部出现 ,共有特征峰 13
个 ,见图 1 。根据色谱归一化分析 ,其 HPLC指纹图
谱的共有特征峰的峰面积总和大于 90%。
图 1　紫红獐牙菜药材的 HPLC指纹图谱
Fig 1　HPLC-FPS of Sw ertia punicea Hems
　　测定对照品溶液可知 ,其中 1 号峰为獐牙菜苦
苷 , 2号峰为龙胆苦苷 ,7 号峰为芒果苷 ,11号峰为
8-o-β-D-吡喃葡萄糖基-1 , 5-二羟基-3-甲氧基口山
酮。以 7号峰芒果苷作为参照物 ,以其保留时间 、峰
面积为 1 ,分别计算其他各共有特征峰的相对保留
时间 、相对峰面积 ,见表 2 , 3。其中 11 号峰峰面积
占总峰面积的41. 29%,大于 20%,故其差值需小于
20%;9 号峰峰面积占总峰面积16. 23%,其值大于
10%,且小于 20%,故其差值需小于 25%;其他峰峰
面积占总峰面积均小于 10%,故其峰面积比值不作
要求 ,仅需标定相对保留时间。
923 中国医院药学杂志 2006年第 26卷第 8期 Chin H osp Pharm J , 2006 Aug , Vol 26 , No. 08
表 2　紫红獐牙菜药材的 H PLC 特征峰 RRT
Tab 2　H PLC-char acte ristic peak RRT o f Sw er tia punicea(r elative time)
样品号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
1 0. 41 0. 48 0. 51 0. 62 0. 67 0. 85 1. 00 1. 57 1. 65 2. 22 2. 29 2. 87 3. 05
2 0. 41 0. 48 0. 52 0. 62 0. 67 0. 85 1. 00 1. 57 1. 65 2. 23 2. 30 2. 87 3. 00
3 0. 43 0. 51 0. 52 0. 63 0. 69 0. 85 1. 00 1. 58 1. 67 2. 23 2. 28 2. 87 3. 04
4 0. 42 0. 49 0. 53 0. 62 0. 68 0. 85 1. 00 1. 58 1. 68 2. 24 2. 29 2. 89 3. 06
5 0. 41 0. 48 0. 51 0. 62 0. 67 0. 85 1. 00 1. 57 1. 65 2. 23 2. 29 2. 87 3. 05
6 0. 41 0. 49 0. 51 0. 62 0. 69 0. 85 1. 00 1. 57 1. 65 2. 23 2. 30 2. 87 3. 06
7 0. 42 0. 49 0. 53 0. 62 0. 68 0. 85 1. 00 1. 58 1. 68 2. 24 2. 30 2. 88 3. 06
8 0. 42 0. 49 0. 53 0. 62 0. 68 0. 85 1. 00 1. 59 1. 67 2. 23 2. 29 2. 87 3. 05
9 0. 42 0. 49 0. 52 0. 62 0. 68 0. 85 1. 00 1. 57 1. 66 2. 22 2. 28 2. 86 3. 04
10 0. 43 0. 48 0. 51 0. 63 0. 69 0. 85 1. 00 1. 58 1. 67 2. 23 2. 28 2. 88 3. 05
x 0. 42 0. 49 0. 52 0. 62 0. 68 0. 85 1. 00 1. 58 1. 66 2. 23 2. 29 2. 87 3. 05
RSD/% 1. 88 1. 63 1. 68 0. 68 1. 20 0 0 0. 44 0. 75 0. 32 0. 34 0. 31 0. 57
表 3　紫红獐牙菜药材的 H PLC 特征峰 RA
Tab 3　H PLC-char acte ristic Peak RA of different samples(relativ e areas)
样品号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
1 0. 98 0. 36 0. 17 0. 18 0. 27 0. 11 1. 00 0. 23 1. 82 0. 15 4. 70 0. 18 0. 25
2 0. 93 0. 35 0. 15 0. 18 0. 27 0. 12 1. 00 0. 23 1. 78 0. 16 4. 68 0. 18 0. 05
3 0. 93 0. 33 0. 15 0. 18 0. 27 0. 15 1. 00 0. 25 1. 87 0. 18 4. 79 0. 19 0. 07
4 0. 90 0. 32 0. 16 0. 17 0. 28 0. 11 1. 00 0. 22 1. 88 0. 15 4. 92 0. 19 0. 12
5 1. 11 0. 53 0. 18 0. 20 0. 28 0. 17 1. 00 0. 30 1. 97 0. 20 5. 03 0. 04 0. 41
6 1. 11 0. 45 0. 15 0. 42 0. 19 0. 40 1. 00 0. 45 1. 93 0. 24 5. 01 0. 31 0. 35
7 1. 09 0. 49 0. 15 0. 39 0. 19 0. 42 1. 00 0. 47 1. 94 0. 28 5. 26 0. 30 0. 22
8 1. 11 0. 47 0. 15 0. 42 0. 20 0. 39 1. 00 0. 46 1. 92 0. 29 5. 17 0. 32 0. 16
9 1. 14 0. 48 0. 16 0. 43 0. 19 0. 42 1. 00 0. 50 1. 91 0. 37 5. 06 0. 29 0. 25
10 1. 03 0. 42 0. 15 0. 42 0. 50 0. 43 1. 00 0. 51 1. 76 0. 36 5. 13 0. 27 0. 33
x 1. 03 0. 42 0. 16 0. 30 0. 29 0. 27 1. 00 0. 36 1. 88 0. 24 4. 98 0. 23 0. 22
RSD/% 8. 82 17. 85 6. 62 41. 32 37. 46 55. 21 0 34. 81 3. 75 34.91 3. 09 38. 02 55. 03
3　讨论
本实验考察了甲醇回流提取和超声提取等条件
下的提取率 ,结果回流提取时苦苷类部分成分被破
坏 ,故采用超声提取。超声提取时考察了药材粉碎度
以及浸泡过夜的提取率 ,结果提示过 5号筛后甲醇浸
泡过夜 ,再超声提取 2次 ,每次 20 min ,提取率较高。
本实验考察色谱系统后以甲醇-水(水中含
0.05%磷酸)-乙腈为最佳。
紫红獐牙菜甲醇提取物主要成分为苦苷类 、卟山酮
及其苷类 ,苦苷类 UV 吸收波长范围为 220 ～ 260
nm ,卟山酮类化合物的最大吸收波长为 250 nm[ 4.5] ,比
较了 254 ,260 nm 波长下的 HPLC图谱 ,在 254 nm 时
色谱图基线较平稳 ,出峰数多 ,峰形对称 ,故选择检测
波长为 254 nm 。
在研究中发现 ,獐牙菜苦苷主要存在于花 、叶中 ,
龙胆苦苷主要存在于根中 ,故我们对 10批不同产地 、
但同为花果期的药材甲醇溶解部分的 HPLC图谱进
行了技术参数分析 ,建立了其 HPLC指纹图谱 ,为全
面控制紫红獐牙菜药材的质量提供了一定的依据。
参考文献:
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分离与鉴定[ J] .大理医学院学报 ,1998, 7(4):5-6.
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社 , 2002. 533-537.
[ 3] 　董光平,杨景鹏,余放争,等.彝族药布什都补此的有效成分的研
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研究(I)[ J] .中国中药杂志 ,2005 ,30(7):977-1000.
[ 收稿日期] 2005-12-12
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