全 文 ：华西药学杂志
W C J·P S 2011，26(5)∶492 ～ 493
图 2 体外兔血浆中 HX0969w 和丙泊酚的药 －时曲线(A)和血浆
中 HX0969w的释放曲线(B)
Fig 2 In vitro concentration － time curves of HX0969w and Propo-
fol in rabbit plasma (A)，in vitro release curve of HX0969w
in rabbit plasma(B)
2 讨论
HX0969w是丙泊酚的水溶性前药，具有较强的
碱性，紫外吸收较弱，在普通的甲醇 －水体系中难以
与溶剂峰达到基线分离，峰形较差，且无法与丙泊酚
同时出峰。四丁基氢氧化铵为常用的离子对试剂，
可很好地改善水溶性前药的保留时间和峰形。流动
相中同时使用了少量三乙胺和磷酸来改善峰形和调
节流动相的 pH，实现了在同样条件下分离前药和丙
泊酚，效果较好。HX0969w 和丙泊酚分别为水溶性
和脂溶性化合物，难以找到合适的萃取剂同时萃取
这两种物质，因此，文中采用甲醇作为蛋白沉淀剂直
接沉淀血浆样品。实验得到两种药物稀释后绝对回
收率为 64% ～78%，相对于其他化合物经萃取法处
理得到的回收率偏低，主要是由于加入沉淀剂使药
物的浓度被稀释，上清液中药物的绝对浓度降低所
致。减少甲醇用量，可在一定程度上提高药物的回
收率，但沉淀效果变差;加大甲醇用量，可使沉淀的
效果更好，但药物回收率小于 50%，不符合分析测
定的一般原则。经考察，两倍体积的甲醇可较好地
同时满足沉淀效果和回收率的要求，且操作方法简
单，缩短了样品处理的时间和成本。文中方法适用
于药动学初期的较高血药浓度的分析与测定，同时
适用于前药原料药与制剂含量和稳定性的测定。
参考文献:
［1］ Scott RP，Saunders DA，Norman J． Propofol:clinical strategies for
preventing the pain of injection［J］． Anaesthesia，1988，43(6) :
492 － 494．
［2］ Tan CH，Onsiong MK． Pain on injection of Propofol［J］． Anaes-
thesia，1998，53(5) :468 － 476．
［3］ Baker MT，Naguib M． Propofol:the challenges of formulation
［J］． Anesthesiology，2005，103(4) :860 － 876．
［4］ Wolf A，Weir P，Segar P，et al． Impaired fatty acid oxidation in
Propofol infusion syndrome［J］． Lancet，2001，357(9256) :606 －
607．
［5］ Parke TJ，Stevens JE，Rice AS，et al． Metabolic acidosis and fatal
myocardial failure after Propofol infusion in children:five case re-
ports［J］． British Med J，1992，305(6854) :613 － 616．
收稿日期:2010 － 11 － 22
作者简介:白珂珂(1986 ―) ，女，河南许昌，正攻读应用化学专业的硕士学位。Email:baikk86@ 163． com
* 通信作者(Correspondent author) ，Email:lihuilab@ sina． com
HPLC测定伏康树籽中的柳叶水甘草碱
白珂珂1，苏艳红1，陈晓春1，姚 晨2，蔡元丽1，李 晖1*
(1．四川大学化学工程学院，四川 成都 610065;2．成都合盛生物技术有限公司，四川 成都 610065)
摘要:目的 采用 HPLC测定伏康树籽中柳叶水甘草碱的含量。方法 色谱柱为 Agilent Extend － C18柱(150 mm × 4． 6 mm，
5 μm) ;柱温 30 ℃;流动相为甲醇 － 0． 1 mol·L －1醋酸铵(pH6) (70∶30) ;检测波长 290 nm;流速 1． 0 mL·min －1;进样量 20 μL。
结果 柳叶水甘草碱的进样量 0． 1708 ～ 5． 4656 μg 与峰面积具有良好的线性关系，回归方程为:Y = 7. 2697 × 103X － 9． 1125
(r = 0. 9995)。伏康树籽中柳叶水甘草碱的含量为 2． 65%。结论 所用方法操作简便、快捷、结果准确。
关键词:高效液相色谱法;柳叶水甘草碱;伏康树籽;含量
中图分类号:R917 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2011)05 － 0492 － 02
Determination of tabersonine in the seeds of Voacanga africana by HPLC
BAI Ke － ke1，SU Yan － hong1，CHEN Xiao － chun1，YAO Chen2，CAI Yuan － li1，LI Hui1*
(1． School of Chemical Engineering，Sichuan University，Chengdu，Sichuan，610065 P． R． China;2． Chengdu Hosea Bio － tech Co．，
Ltd． Chengdu，Sichuan，610065 P． R． China)
Abstract:OBJECTIVE To measure tabersonine in the seeds of Voacanga africana Stapf． by an RP － HPLC method． METHODS
DOI:10.13375/j.cnki.wcjps.2011.05.018
Agilent Extend － C18(150 mm × 4． 6 mm，5 μm)column was adopted． The mobile phase consisted of methanol and 0． 1 mol·L
－1
ammonium acetate(70∶30)with flow rate of 1 mL·min －1，and the detector wavelength was 290 nm． RESULTS The standard curve
was linear in the range from 0． 1708 to 5． 4656 μg for tabersonine(r = 0． 9995)． The content of the sample was 2． 65% ． CONCLU-
SION The method is simple，fast and accurate．
Key words:HPLC;Tabersonine;Voacanga africana Stapf．;Content
CLC number:R917 Document code:A Article ID:1006 － 0103(2011)05 － 0492 － 02
伏康树又名非洲马铃果 Voacanga africana
Stapf．，是一种产自非洲的夹竹桃科植物，其种子提
取物的主要成分为柳叶水甘草碱［1］。柳叶水甘草
碱为吲哚型生物碱，具有较高的药用价值［2 － 3］，是长
春胺生物碱的合成前体化合物。文献［4］用 TSP －
MS法测定了长春花中的柳叶水甘草碱，文献［5］采
用 HPLC法同时测定了长春花中的多种生物碱，取
得了较好的结果。现采用 HPLC法测定了伏康树籽
中柳叶水甘草碱的含量，获得了满意的结果。
1 实验部分
1． 1 仪器与试药
1200 型高效液相色谱仪(美国 Agilent)。伏康
树籽购于非洲加纳，经成都中医药大学严铸云博士
鉴定为伏康树籽 Voacanga africana Stapf．;柳叶水甘
草碱对照品(上海同田生物技术有限公司) ;甲醇为
色谱纯;其他试剂为分析纯。
1． 2 方法与结果
1． 2． 1 色谱条件 色谱柱为 Agilent Extend － C18柱
(150 mm ×4． 6 mm，5 μm) ;柱温 30 ℃;流动相为甲
醇 － 0． 1 mol·L －1醋酸铵(pH6) (70∶30) ;检测波长
290 nm;流速 1． 0 mL·min －1，进样量 20 μL。
1． 2． 2 溶液的制备 精密称取 10． 98 mg 柳叶水甘
草碱对照品，加甲醇溶解并定容至 50 mL，得到
0. 2196 mg·mL －1的对照品溶液。将伏康树籽粉碎，
过 40 目筛，取 1 g 干燥粉末，精密称定，置 250 mL
圆底烧瓶中，加入 70%的甲醇 －盐酸溶液(pH2) ，
称重，加热回流提取 6 h，冷却后补足重量，提取 3
次，料液比为 1∶10。合并滤液，用 70%的甲醇 －盐
酸溶液(pH2)定容至 50 mL，即得供试品溶液。
1． 2． 3 线性范围与回归方程 精密称取对照品适
量，用甲醇溶解并定容到 10 mL，作为贮备液，置 4
℃冰箱中保存。依次精密量取 0． 1、0． 5、0. 8、1． 6、
3． 2 mL 贮备液以甲醇定容至 10 mL，分别配制成
8. 50、42． 70、68． 30、136． 600. 273． 30 μg·mL －1的对
照溶液，进样。以峰面积为纵坐标、浓度为横坐标，
绘制标准曲线，得回归方程为:Y = 7. 2697 × 103X －
9． 1125 (r = 0． 9995)。柳叶水甘草碱进样量
0． 1708 ～ 5． 4656 μg和峰面积的线性关系良好。
1． 2． 4 精密度试验 吸取 0． 0427 mg·mL －1的对照
品溶液，重复进样 5 次，计算峰面积积分值的 RSD =
1. 84%，表明方法进样精密度良好。
1． 2． 5 稳定性试验 将同一对照品溶液放置一段
时间后进样，分别隔 5、20、40 d 进样一次，共测 3 次，
密封对照品溶液，于 4 ℃以下保存 40 d，含量变化的
相对偏差在 1． 11%以内，表明稳定性相对较好。
1． 2． 6 回收率试验 精密称取 0． 10 g 已知含量的
伏康树籽，准确计算柳叶水甘草碱的含量，分别加入
柳叶水甘草碱对照品溶液适量，配成低、中、高浓度
的溶液。按“1． 2． 2”项制备供试品溶液。按
“1. 2. 1”项条件进样 20 μL。计算样品的平均回收
率为 98. 28%，RSD = 0． 79%。
1． 2． 7 样品的测定 取制备好的供试品溶液，按
“1． 2． 1”项色谱条件分析，计算供试品中柳叶水甘
草碱的含量为 2． 65%。色谱图见图 1。
图 1 对照品(A)和供试品(B)溶液的色谱图
Fig 1 HPLC chromatograms of control solution(A)and sample
solution(B)
2 讨论
曾以 60%、70%、75%甲醇作流动相试验，结果
以 70%甲醇分离效果最优。文中测定伏康树籽中
柳叶水甘草碱含量的方法精密度、稳定性较好，回收
率效果良好，结果满意。
参考文献:
［1］ Kikura － Hanajiri R，Maruyama T，Miyashita A，et al． Chemical
and DNA analyses for the products of a psychoactive plant［J］．
Voacanga Africana Yakugaku Zasshi，2009，129(8) :975．
［2］ Gangoué － Pié boji J，Pegnyemb DE，Niyitegeka D，et al． The
in vitro antimicrobial activities of some medicinal plants from Cam-
eroon［J］． Anna Trop Med Parasitol，2006，100(3) :237 －303．
［3］ Paul V Tan． Anti － ulcer actions of the bark methanol extract of
Voacanga africana in different experimental ulcer models in rats
［J］． J Ethnopharmacol，2000，73:423 － 428．
［4］ Auriola S，Ranta VP，Naaranlahti T，et al． Thermospray liquid －
chromatographic mass － spectrometric analysis of catharanthus al-
kaloids［J］． J Chromatogr，1989，474:181 － 185．
［5］ Tikhomiroff C，Jolicoeur M． Screening of catharanthus roseus sec-
ondary metabolites by HPLC［J］． J Chromatogr A，2002，955(1) :
87 － 93．
收稿日期:2010 － 11 － 15
394第 5 期 白珂珂，等。HPLC测定伏康树籽中的柳叶水甘草碱