全 文 ：药物定性定量研究
高效液相色谱法测定土家药马尾杉(有柄马尾杉)中石杉碱甲的含量
贵阳中医学院(贵阳 550002)　邹　娟　李齐激　王　冲　潘炉台
摘　要:目的 采用高效液相色谱法测定土家药马尾杉(有柄马尾杉)中石杉碱甲的含量。方法 采用 ZORBAXSB-C18
色谱柱(150mm×4.6mm , 5μm),流动相为 0.02mol.L-1 磷酸二氢钠溶液-乙腈(91.8︰8.2), 检测器波长 310nm , 柱温
22℃,流速 1.0ml/min。结果 石杉碱甲在 0.04 ～ 0.24μg 之间与峰面积呈良好线性关系(r=0.99989), 平均回收率为
98.34%, 平均含量为 0.028%。 结论 本测定方法快速 、易行 、准确 ,可用于土家药马尾杉(有柄马尾杉)中石杉碱甲的质
量控制。
关键词:土家药马尾杉(有柄马尾杉);石杉碱甲;高效液相色谱法
中图分类号:R297 , 2　　文献标识码:B　　文章编号:1006-6810(2008)05-0053-02
　　土家药马尾杉(有柄马尾杉)(Phlegmariurus petiolatus
(Clarke)H.S.Kung et L.B.Zhang)系石杉科马尾杉属植
物 ,生于海拔 600 ～ 2500 m 的溪旁 、路边 、林下的树干或岩
石上或土生[ 1] 。我国科学家从同科植物千层塔中分离出
新药石杉碱甲(Huperia A , 又名福定碱 fordine), 其对真性
胆碱酯酶土家药有选择性抑制作用 ,已用于治疗早老性痴
呆和重症肌无力[ 2] 。由于石杉碱甲天然资源极其匮乏 , 寻
找新的资源便成为主要研究热点。据现土家药有文献报
道[ 3] ,石杉科植物中普遍都含土家药有石杉碱甲 。本实验
对土家药马尾杉(有柄马尾杉)中石杉碱甲的含量进行了
测定 ,结果表明该植物中石杉碱甲的含量较高 。
1　药材 、仪器与试药
1.1　药材:土家药马尾杉(有柄马尾杉)采自贵州习水 , 经
贵州科学院生物研究所王培善教授鉴定为土家药马尾杉
(有柄马尾杉)Phlegmariurus petiolatus(Clarke)H.S.Kung
et L.B.Zhang 的全株。
1.2　仪器:Agilent-1100 高效液相色谱仪(DAD 紫外检
测器(美国), 电子天平(日本岛津), KQ50B 超声清洗器
(昆山市超声仪器土家药有限公司), 电热恒温水浴锅(上
海医疗器械厂)。
1.3　试药:石杉碱甲对照品(中国药品生物制品检定所 ,
批号:100243-200401), 乙腈(色谱纯), 水为重蒸水 , 其他
试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　测定方法
2.1.1　对照品溶液的配制:精密称取石杉碱甲对照品适
量 ,用无水乙醇溶解并稀释成 0.02mg/ ml的对照品溶液。
2.1.2　样品溶液的制备:样品经低温干燥后粉碎过 40 目
筛 ,精密称取粉末 2g , 用 95%甲醇回流提取 2 次 , 每次 1
小时 ,过滤 , 合并滤液 , 减压回收溶剂至干。残留物用 2%
酒石酸溶解 ,用氨水调节 pH 至 8.0 , 再用氯仿萃取至 Dra-
gendorffor s 反应呈阴性 , 挥干土家药有机溶剂 , 用无水乙
醇溶解并定容至 25ml , 摇匀 , 用 0.45μm 微孔滤膜过滤 ,
滤液备用。
2.1.3　色谱条件:根据文献方法[ 4] 、[ 5]:ZORBAXSB-C18
色谱柱(150mm×4.6mm , 5μm);流动相为 0.02mol.L-1
磷酸二氢钠溶液-乙腈(91.8:8.2);检测器波长 310nm;
柱温 22℃;流速 1.0ml/min;进样量 5μl。
2.1.4　系统适用性试验:根据上述仪器条件得到石杉碱
甲对照品 、土家药马尾杉(有柄马尾杉)样品色谱图 , 见图
1。其理论踏板数 n 为 3535。样品中石杉碱甲峰与相近峰
分离清晰完全 ,分离度为 6.54。
图 1　土家药马尾杉(有柄马尾杉)HPLC图
A.石杉碱甲对照品　B.土家药马尾杉(有柄马尾杉)样品　a
石杉碱甲
2.2　方法学考察及结果
2.2.1　线性关系:取石杉碱甲对照品溶液(0.02mg/ ml),
分别精密吸取 2、4、6、8、10 、12 、14μl进样 ,记录石杉碱甲峰
面积 ,以进样量μg(C)为横坐标 , 峰面积(A)为纵坐标 , 绘
制标准曲线 , 得到曲线方程为:A =1350.72321C -1.
6267857(r=0.99989)。结果表明 , 石杉碱甲在 0.04 ～ 0.
24μg 范围内土家药有良好的线性关系。
532008年 5月第 5期　　　　　　　　　中国民族医药杂志　　　　　　　　　　　　　　　　　
DOI :10.16041/j.cnki.cn15-1175.2008.05.034
2.2.2　精密度试验:取样品 1 份 , 精密称定 , 按样品溶液
制备方法制备得到供试液 , 在色谱条件下进样 6 次 , 记录
石杉碱甲峰面积 , RSD为 1.44%(n=6)。
2.2.3　重复性试验:取样品 6 份 , 分别精密称定 ,按样品
溶液制备方法制备得到 6 份供试液 ,在色谱条件下分别进
行测定石杉碱甲的含量 , RSD为 0.25%(n=6)。
2.2.4　稳定性试验:取样品 1 份 , 精密称定 , 按样品溶液
制备方法制备得到供试液 ,在色谱条件下每隔 2 小时进样
1 次 , 考察石杉碱甲的含量变化 , 结果含量的 RSD 为 0.
12%(n=6),表明样品溶液在 10 小时内稳定。
2.2.5　回收率试验:精密称取土家药马尾杉(有柄马尾
杉)0.10g , 精密吸取一定量的对照品溶液加到样品中 , 再
按制备样品溶液余下操作得到供试液 , 测定石杉碱甲的含
量 ,计算加样回收率。结果石杉碱甲的平均回收率为 98.
34%, RSD为 0.46%(n=6)。
2.2.6　样品测定:取对照品溶液和样品溶液各 5μl , 进液
相色谱仪 , 记录石杉碱甲峰面积 , 用外标法计算样品中石
杉碱甲的含量 ,平均含量为 0.028%。结果见表 1:
表 1
编号 含量(%) 平均含量(%)
1 0.027
2 0.028 0.028
3 0.028
3　讨论
本文根据孙远明等[ 4]和李齐激等[ 5] 石杉碱甲的含量
测定方法 , 把流动相调节为 0.02mol.L-1 磷酸二氢钠溶
液-乙腈(91.8:8.2), 使得样品中的石杉碱甲与其他杂质
峰达到分离 ,分离度为 6.54 , 理论踏板数 n 为 3635。所以
确定前述的液相色谱条件。
目前 ,千层塔是制药企业提取石杉碱甲主要的中药材
原料 , 从本文研究结果看 , 土家药马尾杉(有柄马尾杉)也
含土家药有较丰富的石杉碱甲 , 与王俊等所测的相似 , 因
此可以考虑把土家药马尾杉(有柄马尾杉)作为蛇足石杉
的替代药材 ,以扩大制药企业生产的用药资源。
参考文献
[ 1] 张丽兵 , 孔宪需.中国马尾杉属拟石杉组(新组)的分
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[ 3] 王峻 ,吴伟 , 潘胜利.HPLC 法测定 6 种石杉科植物中
石杉碱甲的含量[ J] .中草药 , 2003 , 34(7):607 ～ 608
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石杉碱甲含量[ J] .中草药 , 2002 , 33(12):1078 ～ 1080
[ 5] 李齐激 , 等.贵州不同产地千层塔中石杉碱甲的含量
研究[ J] .中国民族民间医药 , 2007 , 89(6):364～ 365
　　2008 年 3 月 9 日收稿
HPLC法测定苗药雷山石杉中石杉碱甲的含量
贵阳中医学院民族医药研究所(贵阳 550002)　王　冲　李齐激　邹　娟　潘炉台
摘　要:目的采用 HPLC 法测定苗药雷山石杉中石杉碱甲的含量。方法采用 ZORBAXSB-C18 色谱柱(150mm×4.6mm ,
5μm), 流动相:0.02mol·L-1 磷酸二氢钾-乙腈(92∶8), 检测波长:310nm ,流速 1mL·min-1 , 柱温 25℃。 结果石杉碱甲
在 0.01 ～ 0.20μg 之间与峰面积呈良好线性关系(r=0.99991), 平均回收率为 99.70%, RSD 为 0.25%。结论首次对苗药
雷山石杉中石杉碱甲的含量进行测定 ,该方法易行 、灵敏 、准确。
关键词:苗药雷山石杉;石杉碱甲;高效液相色谱
中图分类号:R297 , 2　　文献标识码:B　　文章编号:1006-6810(2008)05-0054-02
　　苗药雷山石杉(HuperzialeishanensisX.Y.Wang)系石
杉科石杉属植物 , 为贵州省特有种 , 分布于贵州省苗药雷
山县 ,生于灌木下 、苔藓丛中[ 1] 。 上世纪 80 年代 , 我国科
学工作者从同属植物蛇足石杉中分离到石杉碱甲(Hu-
pA), 并阐明它是一种可逆性乙酰胆碱酯酶抑制剂 , 对治疗
重症肌无力 、记忆力减退和早老年痴呆具有较好的效
果[ 2-3] ,现已广泛应用于临床。为了科学 、合理地利用石
杉属植物资源 ,本实验首次采用 HPLC 法对苗药雷山石杉
中石杉碱甲的含量进行测定 ,为寻找和筛选石杉碱甲新的
植物资源提供科学依据。
1　仪器与试药
Aigent1100 型 HPLC 色谱仪(带四元泵 ,自动进样器 ,
紫外检测器等);电子分析天平(日本岛津);KQ50B 超声
清洗器(昆山市超声仪器有限公司);电热恒温水浴锅(上
54　　　　　　　　　　　　　　中国民族医药杂志　　　　　　　　　　　2008年 5月第 5期