全 文 ： ·626· Chin J Mod Appl Pharm, 2016 May, Vol.33 No.5 中国现代应用药学 2016 年 5 月第 33 卷第 5 期
中国药典 2015 年版颠茄酊中东莨菪内酯含量测定及特征图谱分析

张文婷 1，黄伟 2，黄琴伟 1，赵维良 1(1.浙江省食品药品检验研究院，杭州 310052；2.浙江医学高等专科学校，杭州 310053)

摘要：目的 建立颠茄酊的 HPLC特征图谱及东莨菪内酯的含量测定方法。方法 采用 Welch XB-C18(250 mm×4.6 mm，
5 µm)色谱柱，流动相为甲醇-0.05%磷酸，梯度洗脱，流速：1.0 mL·min1；柱温：30 ℃；检测波长：344 nm。结果
建立了颠茄酊 HPLC 特征图谱，确定了 6 个共有峰，指认了其中 3 个共有峰的成分分别为山柰素-3-O-半乳糖-(6→1)鼠李
糖-7-O-葡萄糖苷、东莨菪内酯和芦丁。东莨菪内酯进样量在 11.18~670.5 ng(r=1.000 0)内线性关系良好，平均加样回收
率为 104.2%。结论 特征图谱结合东莨菪内酯的定量测定，能更好地控制颠茄酊的质量。
关键词：颠茄酊；东莨菪内酯；特征图谱；高效液相色谱法
中图分类号：R284.1 文献标识码：B 文章编号：1007-7693(2016)05-0626-03
DOI: 10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2016.05.026

HPLC Specific Chromatogram of Belladonna Tincture and Determination of Scopoletin in Chinese
Pharmacopoeia (2015 Edition)

ZHANG Wenting1, HUANG Wei2, HUANG Qinwei1, ZHAO Weiliang1(1.Zhenjiang Institute for Food and Drug
Control, Hangzhou 310052, China; 2.Zhejiang Medical College, Hangzhou 310053, China)

ABSTRACT: OBJECTIVE To establish a specific HPLC chromatogram of belladonna tincture and a method for
determination of scopoletin. METHODS A Welch XB-C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 µm) was adopted, methanol-0.05%
phosphoric acid was used as the mobile phase for gradient elution, the flow rate was 1.0 mL·min1, the column temperature was
30 ℃, and the wavelength was set at 344 nm. RESULTS The chromatographic fingerprint was completed with 6 recognizable
peaks, of which 3 peaks [kaempferol-3-O-β-D (6-O-α-L-rhamnogalactoside)-7-O-β-D-glucoside, scopoletin and rutin] were
determined. The linear range of scopoletin was 11.18670.5 ng (r=1.000 0), the average recovery was 104.2%. CONCLUSION
The combination of specific chromatograms and determination of scopoletin is suitable for the quality control of belladonna
tincture.
KEY WORDS: belladonna tincture; scopoletin; fingerprint; HPLC


作者简介：张文婷，女，主任中药师 Tel: (0571)86459425 E-mail: leozhwt@163.com
颠茄酊是由颠茄草经适宜加工制成的酊剂，
为抗胆碱药，用于胃及十二指肠溃疡，胃肠道、
肾、胆绞痛等，既是中成药，也是各省医疗机构
制剂组方中的常用原料之一[1]。颠茄酊的原料为茄
科植物颠茄 Atropa belladonna L.的干燥全草，其主
要成分为莨菪类生物碱及黄酮类、香豆素类化合
物等[2]。黄伟、张楠等应用 RP-HPLC 测定了颠茄
草[3-4]、颠茄片[4]中阿托品、山莨菪碱、东莨菪碱
的含量；姜家书等采用 HPLC[5-7]、薄层扫描[8]和毛
细管电泳-电致化学发光法[9]等技术测定了颠茄流
浸膏或莨菪浸膏或维 U 颠茄铝胶囊中阿托品的含
量，但目前对颠茄草制剂的报道仅限于阿托品、
东莨菪碱、山莨菪碱的含量测定。由于质控指标
的欠缺，颠茄酊、颠茄流浸膏等存在化学勾兑现
象，黄伟等[10-11]通过薄层色谱显色法对市售颠茄
片和颠茄流浸膏进行筛查，结果多批颠茄片和颠
茄流浸膏中有添加阿托品现象，张文婷等[12]采用
特征图谱技术鉴别颠茄流浸膏和颠茄浸膏的真
伪，结果约 16%的产品被检出不含颠茄草成分。
针对颠茄草制剂质量的风险点，本实验采用 HPLC
对颠茄酊生物碱外的其他类特征成分进行了研
究，测定了颠茄酊中东莨菪内酯的含量，并采用
相同色谱条件建立了颠茄酊特征指纹图谱，为科
学评价颠茄酊质量提供依据。
1 仪器与试药
Agilent 1100 系列高效液相色谱仪 (美国
Agilent 公司，G1322A 脱气机，G1311A 四元泵，
G1313A 自动进样仪，G1316A 柱温箱，G1314A
紫外检测器，Chemstation 色谱工作站)；甲醇为色
谱纯(德国 Merck 公司)；水为注射用水，其他试剂
均为分析纯。
东莨菪内酯对照品(批号：110768-200504，供
含量测定用)、芦丁(批号：100080-200707，供含
量测定用)均购自中国食品药品检定研究院；山柰
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素-3-O-半乳糖-(6→1)鼠李糖-7-O-葡萄糖苷为从
颠茄草中分离制备(结构经 UV、MS、NMR 鉴定，
纯度＞98%)。颠茄酊样品由药品生产企业提供，
产家和批号见表 1。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Welch XB-C18 柱(250 mm×4.6 mm，
5 µm)；流动相：A 相为甲醇，B 相为 0.05%磷酸
溶液，梯度洗脱：0~5 min，3%→15%A；5~60 min，
15%→60%A；流速：1.0 mL·min1；柱温：30 ℃；
检测波长：344 nm；进样量：10 µL。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液 精密称取以五氧化二磷为干
燥剂减压干燥 24 h 的东莨菪内酯对照品适量，加
50%甲醇制成每 1 mL 含东莨菪内酯 22.35 μg 的
溶液。
2.2.2 供试品溶液 取颠茄酊摇匀，滤过，取续
滤液，即得。
2.3 定量分析
2.3.1 标准曲线 分别精密吸取对照品溶液
(22.35 µg·mL1)0.5，1，2，4，8，12，16，20，30 µL
注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件测定东莨
菪内酯的峰面积，以峰面积(y)对进样量(x)进行线
性回归，得线性方程：y=3.936x+1.737，r=1.000 0，
显示东莨菪内酯进样量在 11.18~670.5 ng 内呈良
好的线性关系。
2.3.2 仪器精密度试验 取对照品溶液，按“2.1”
项下色谱条件，重复进样 6 次，测定峰面积，结
果 RSD 为 0.19%，表明仪器精密度良好。
2.3.3 重复性试验 取同一批号颠茄酊样品 6 份，
按“2.2.2”项下方法制备并测定峰面积，结果东
莨菪内酯平均含量为 0.023 7 mg·mL1，RSD 为
0.43%。
2.3.4 加样回收率试验 采用加样回收法，取已
知含量的样品 6 份，精密加入对照品溶液适量，
按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别测定
供试品中东莨菪内酯的含量，计算回收率，结果
平均回收率为 104.2%，RSD 为 0.78%，说明本法
的回收率良好。
2.3.5 稳定性试验 分别精密吸取供试品溶液和
对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件，每隔一定
时间进样一次，测定峰面积，结果对照品峰溶液
面积 RSD 为 1.0%，供试品溶液 RSD 为 0.3%，显
示对照品溶液和供试品溶液在室温下放置 24 h 内
稳定。
2.3.6 专属性试验 颠茄酊为颠茄草经乙醇提
取加工制成的单方制剂，经试验，溶剂无干扰。
2.3.7 样品测定结果 用本实验建立的 HPLC 方
法，测定不同生产企业 8个不同批号颠茄酊中东莨
菪内酯的含量，结果见表 1。
表 1 颠茄酊样品含量测定结果
Tab. 1 Contents of scopoletin in belladonna tinctures
生产单位 批 号 东莨菪内酯含量/μg·mL1
广州星群 GS30005 15.1
广州星群 GS30005 15.3
广州星群 HS30001 16.7
广州星群 HS30007 8.4
广州星群 HS30008 9.6
烟台鲁银 DQD1 23.9
烟台鲁银 DQD2 23.7
烟台鲁银 DQD3 23.9
2.4 特征图谱分析
颠茄酊东莨菪内酯含量测定和特征图谱采用
相同的前处理条件和色谱系统。
2.4.1 仪器精密度试验 取同一份供试液重复进
样 6 次，记录峰面积，考察各特征峰的相对保留
时间和相对峰面积的一致性，结果相对保留时间
及峰 1、峰 5 相对于 S 峰的相对峰面积的 RSD 均
<0.4%，表明测定仪器的精密度良好。
2.4.2 重复性试验 取同一批号颠茄酊样品，按
“2.2.2”项下方法制备，共 6 份，注入液相色谱
仪，记录峰面积，考察各特征峰的相对保留时间
和相对峰面积的一致性，结果相对保留时间及峰
1、峰 5 相对于 S 峰的相对峰面积 RSD 均<0.4%。
2.4.3 稳定性试验 取同一份重复性供试液间隔
一定时间进样一次，记录峰面积，计算相对保留
时间及峰 1、峰 5 相对于 S 峰的相对峰面积，考察
供试液稳定性，结果 RSD 均<0.4%，显示溶液在
24 h 内稳定。
2.4.4 特征图谱共有峰的确定 对所收集的 2 个
生产企业的 8 批颠茄酊样品进行测定，得到 8 批
HPLC 色谱图。对测定结果进行分析，选择稳定性
较好，吸收强，特征明显的色谱峰为共有峰，共
标定 6 个峰。通过保留时间及二极管阵列检测器
指纹图谱比较，指认了其中的 3 个峰。在色谱图
中，东莨菪内酯出峰时间居中，含量相对较高，
故选择以东莨菪内酯为参照峰，见图 1。
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图 1 颠茄酊 HPLC 图谱
1山柰酚-3-O-半乳糖-(6→1)鼠李糖-7-O-葡萄糖苷；2东莨菪内酯(S)；
3芦丁；4~6标定的共有峰。
Fig. 1 HPLC chromatograms of belladonna tinctue
1kaempferol-3-O-β-D (6-O-α-L-rhamnogalactoside)-7-O-β-D-glucoside;
2scopoletin(S); 3rutin; 46marked common peaks.
2.4.5 样品测定 参照中国药典 2015 年版特征图
谱确定相对保留时间限度为±5%，综合颠茄系列
其他品种的测定结果，选择相对峰面积较大且色
谱分离良好的 1 号峰和 5 号峰来计算相对峰面积，
以达到相对控制多指标含量的目的，峰 1 的相对
峰面积≥0.30，峰 5 的相对峰面积≥0.10。共测定
8 批次样品，相对保留时间和相对峰面积均符合规
定。
3 讨论
3.1 检测波长的选择
取东莨菪内酯对照品溶液适量，置紫外分光
光度计进行光谱扫描，结果显示东莨菪内酯在
227 nm 和 344 nm 波长处有最大吸收光谱图，在
344 nm 波长处供试品进样后杂质峰较少，色谱分
离也较佳，故确定 344 nm 为测定波长。
3.2 相关性试验
经对颠茄药材、颠茄酊的特征图谱进行相关
性比较，结果原料与制剂相关性良好；对 2 家不
同药品生产企业生产的颠茄酊产品进行企业间相
关性比较，结果企业间产品特征图谱也具有较好的
相关性；对我国主要产区山东和湖南产颠茄草进行
特征图谱相关性比较，结果不同产区相关性良好。
样品相似度检测结果显示，2 家颠茄酊生产企
业提供的 8 批颠茄酊成分特征性明显，成分一致
性较好。特征图谱联合东莨菪内酯含量测定，能
更好地控制颠茄酊的质量。
REFERENCES
[1] 中国药典. 一部[S]. 2015: 420, 421, 1710, 1711.
[2] 匡海学 . 中药化学[M]. 北京: 中国中医药出版社 , 2003:
322.
[3] HUANG W, GAO J, ZHANG W T, et al. Simultaneous
determination of tropane alkaloids in different fractions of
Herba Belladonnae collected in various seasons by HPLC [J].
Asian J Chem, 2013, 25(16): 8967-8970.
[4] ZHANG N, GUO X H, ZHANG Z Z. Determination of three
main components in belladonna tablets by RP-HPLC [J]. J
Med Form(医药论坛杂志), 2005, 26(19): 19-20.
[5] 姜家书, 石国明, 孔泉. HPLC 法测定颠茄流浸膏中硫酸阿
托品的含量[J]. 河南中医, 2008, 30(3): 245-246.
[6] PANG P, YANG X, SUN W J. HPLC determination of
atropine in Hyoscyamus extract tablets [J]. Chin J Pharm
Anal(药物分析杂志), 2008, 28(3): 414-416.
[7] LI F, ZUO C X. Content determination of scopolamine
hydrobomide and atropine selfate in vitamin U and aluminium
capsules [J]. J Southwest Unit Sci Technol(西南科技大学学
报: 自然科学版), 2006, 21(1): 119-122.
[8] WANG Q H, ZHANG X Z, ZHANG C X. Improvement in the
content determination on Extractum Belladonnae Liquidum [J].
Drug Stand China(中国药品标准), 2006, 7(3): 11-12.
[9] YANG Z M, WANG Y, ZHANG X J. CE-ECL determination
of atropine sulfate in vitamin U and aluminium capsules [J].
Chin J Pharm Anal(药物分析杂志), 2008, 28(7): 1042-1045.
[10] HUANG W, ZHANG W T, ZHAO W L, et al. Study on
identification and content determination of Extractum
Belladonnae Liquidum [J]. Chin J Pharm Anal(药物分析杂志),
2012, 32(1): 151-154.
[11] HUANG W, ZHANG W T, ZHAO W L. A quick check of
adulterated atropine in belladonna extract tablets [J]. Chin Med
Rep(中国医药导报), 2011, 8(32): 67-68.
[12] 张文婷, 黄伟, 程维明, 等. 颠茄流浸膏和颠茄浸膏非法勾
兑快速筛查[J]. 医药导报, 2013, 32(5): 670-672.
收稿日期：2016-02-03



中国药典 2015 年版八珍胶囊和八珍片微生物限度检查与探讨

陈志禹，席时东(宁波市药品检验所，浙江 宁波 315040)

摘要：目的 对八珍胶囊和八珍片微生物限度检查进行方法学验证并对检验结果和污染菌进行分析。方法 八珍胶囊和
八珍片采用中国药典 2015 年版微生物限度检查法进行方法验证，对 6 家 31 批次的八珍胶囊和八珍片进行微生物限度检
查，细菌和酵母菌鉴定采用 VITEK2 全自动微生物鉴定系统。结果 需氧菌总数、真菌和酵母菌总数验证中各菌的回收
率均>0.5，大肠埃希菌检查、耐胆盐革兰阴性菌检查沙门菌检查各验证组均可检出阳性菌。污染的微生物主要是芽孢杆

作者简介：陈志禹，男，硕士，主管药师 Tel: (0574)87831518 E-mail: jackchenz@163.com