全 文 ：药品检验·药品质量
高效液相色谱法测定山丹酮缓释片中牡荆苷和金丝桃
苷的含量
原文鹏 , 邓少伟1 , 马双成2 (深圳市人民医院 , 518020; 1 国家中药品种保护审评委员会; 2
中国药品生物制品检定所)
摘要: 建立高效液相色谱法测定山丹酮缓释片中牡荆苷和金丝桃苷的含量。色谱柱 Lichrospher C18
(5μm , 250mm×4.6mm), 流动相:甲醇-水-冰醋酸 (50∶50∶1);检测波长:340 nm;牡荆苷和金丝桃苷
的线性范围分别为:0.73 ～ 3.66μg (r =0.9999)和 0.63 ～ 3.16μg (r =0.9998);平均回收率分别为:
100.03%, RSD=1.17%(n=5)和 99.81%, RSD =0.36%(n=5)。本法操作简单 , 快速 , 准确 , 可行 。
关键词: 山丹酮缓释片;高效液相色谱法;牡荆苷;金丝桃苷;含量测定
中图分类号:R927.2 文献标识码:A 文章编号:1002-7777 (2004)07-0430-03
Determination of Vitexin and Hyperoside in Shandantong Sustained-Release Tablets by HPLC
Yuan Wenpeng , Deng Shaowei1 and Ma Shuangcheng2 (Shenzhen Peoples Hospital , Shenzhen , 518070; 1State
Evaluation Committee of Protection Products of Chinese Traditional Medicines; 2National Institute for the Control of
Pharmaceutical and Biological Products)
ABSTRACT A HPLC method for the determination of Vitexin and Hyperoside in Shandantong sustained -release
tablets was established.A Lichrospher C18 column (4.6mm×250mm , 5μm)was used with methanol-water-glacial
acetic acid(50∶50∶1)as mobile phase.The content was detected at a wavelength of 2340 nm.The linear range for
Vitexin and Hyperoside were 0.73 ～ 3.66μg (r=0.9999)and 0.63 ～ 3.16μg (r=0.9998)respectively.The average
recovery was 100.03%, RSD =1.17%(n=5)for Vitexin , and 99.81%, RSD =0.36%(n=5)for Hyperoside.
The method was simple , rapid , accurate and feasible.
KEYWORDS Shandantong sustained-release tablets;HPLC;vitexin;hyperoside;determination
山丹酮缓释片由山楂和丹参两味中药组成 , 是
我院的医院制剂 , 主要用于治疗冠心病 。原来的剂
型为冲剂 , 经水煮醇沉和制粒而成 , 每天服用剂量
大且不方便 , 后经工艺研究 , 分别对山楂和丹参进
行提取 、浓缩 、 萃取 、柱层析 , 得到山楂总黄酮和
丹参总酮 , 两种提取物按照处方的组成配比制成片
剂 , 大大缩小了服用剂量 , 而且服用方便。为了更
有效的控制质量 , 采用高效液相色谱法进行了含量
测定研究 。
1 仪器与试剂
Waters高效液相色谱仪 [ LC (2690泵 , 996二
极管阵列检测器 , 600自动进样器 , Millenium 32 数
据处理软件系统 (美国)] 。SB2200 超声波清洗器
(上海必能信超声有限公司);甲醇为色谱纯;水为
Milli-Q;冰醋酸为分析纯 ;牡荆苷和金丝桃苷对
照品 (供含量测定用 , 中国药品生物制品检定所);
山丹酮缓释片 (本院制剂)。
2 方法
2.1 对照品储备液的制备
分别精密称取牡荆苷和金丝桃苷对照品各
15mg 置同一 50ml量瓶中 , 加甲醇超声溶解 , 定容
至刻度 , 摇匀 , 即得浓度均为 300μg.ml-1的牡荆苷
和金丝桃苷对照品储备溶液。精密吸取上述溶液
6.0ml于 10ml 量瓶中 , 加 50%甲醇稀释至刻度 ,
摇匀 , 作为对照品溶液 。
2.2 供试品溶液及阴性供试液的制备
取本品 10 片称重后 , 研细混匀 , 取 1.5g 粉
末 , 精密称定 , 精密加入50%甲醇 50ml , 称重 , 超
·430· 中国药事 2004年第 18卷第 7期
DOI :10.16153/j.1002-7777.2004.07.021
声处理30min , 取出 , 放冷 , 再称重 , 用 50%甲醇
补足减失的重量 , 摇匀 , 滤过 , 弃去初滤液 10ml ,
取续滤液过0.45μm微孔滤膜 , 即得供试品溶液
取阴性对照样品 (无山楂), 同法制成阴性供
试品溶液 。
2.3 色谱条件
色谱柱:Lichrospher C18 柱 (5μm , 250mm ×
4.6mm);流动相:甲醇-水-冰醋酸 (50∶50∶1);
流速:1ml·min-1;检测波长:340 nm;分别吸取对
照品溶液 , 供试品溶液 , 阴性供试品溶液各 10 μl
注入色谱仪中 , 记录色谱图 , 阴性供试品溶液在牡
荆苷和金丝桃苷出峰位置无干扰 , 见色谱图。
图 牡荆苷和金丝桃苷的 HPLC 色谱图
A.对照品;B.样品;C.阴性试样;1.牡荆苷;2.金丝桃苷
2.4 线性关系考察
精密吸取上述对照品储备溶液 2.0 , 4.0 , 6.0 ,
8.0 , 10.0ml于10ml量瓶中 , 加 50%甲醇稀释至刻
度 , 摇匀 , 各进样 10 μl , 按上述色谱条件测定峰
面积 , 以峰面积为纵坐标 , 对照品的进样量 (μg)
为横坐标 , 绘制标准曲线 , 计算;回归方程为:牡
荆苷:Y= 297803.45X-246.3 (r=0.9999), 线性
范围:0.73 ～ 3.66μg;金丝桃苷:Y= 246893.45X
-1023.4 (r=0.9998), 线性范围:0.63 ～ 3.16μg 。
2.5 精密度试验
吸取上述对照品溶液 2.0 ml 于 10ml 量瓶中 ,
加50%甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 连续进样 , 按上
述色谱条件测定峰面积 , 计算相对标准偏差 , 结果
牡荆苷 RSD =0.98%(n =6);金丝桃苷 RSD =
1.08%(n=6)。
2.6 稳定性试验
吸取同一供试品溶液日内每隔 2h 、日间每隔
24 , 48 , 72h 测定一次牡荆苷和金丝桃苷的含量 ,
结果:牡荆苷 , 日内 RSD =0.87% (n=6), 日间
RSD=1.52%(n =4);金丝桃苷 , 日内 RSD =
0.98%(n=6), 日间 RSD=1.35%(n=4);表明
72h 稳定 。
2.7 重复性试验
取同一批号样品 , 精密称取 5份 , 按上述方法
制备供试品溶液 , 依上述色谱条件测定牡荆苷和金
丝桃苷的含量 , 结果 , 牡荆苷 RSD =0.99% (n=
5);金丝桃苷 RSD=1.12%(n=5)。
2.8 加样回收率试验
采用加样回收法 。称取已知含量的山丹酮缓释
片粉末 5份 , 每份约 0.75g , 精密称定 , 分别加入
牡荆苷和金丝桃苷对照品适量 , 按上述方法制备供
试品溶液 , 依上述色谱条件测定 , 计算回收率 , 结
果见表 1 , 2。
表 1 牡荆苷回收率试验
样品中牡荆
苷含量(μg)
加入牡荆苷
的量(μg)
牡荆苷测得
量(μg)
回收率
(%)
平均回
收率(%)
RSD
(%)
2.45 2.56 4.99 99.22
2.56 2.56 5.10 99.21
2.68 2.56 5.27 101.17 100.08 1.18
2.34 2.56 4.88 99.21
2.66 2.56 5.26 101.56
表 2 金丝桃苷回收率试验
样品中金丝
桃苷含量(μg)
加入金丝桃
苷的量(μg)
金丝桃苷测
得量(μg)
回收率
(%)
平均回
收率(%)
RSD
(%)
6.55 6.32 12.85 99.68
6.86 6.32 13.17 99.84
6.88 6.32 13.23 100.47 99.90 0.36
6.34 6.32 12.66 100.00
6.66 6.32 12.95 99.53
3 样品测定
取不同批号的样品 , 按上述供试品溶液的制备
方法制备供试品溶液 , 依上述色谱条件测定含量 ,
结果见表3。
表 3 样品的含量测定 (n=3)
编号 牡荆苷的含量(μg 片)
RSD
(%)
金丝桃苷的含量
(μg 片)
RSD
(%)
1 1.56 1.21 4.61 1.13
2 1.68 1.01 4.56 1.09
3 1.63 0.98 4.58 1.21
(下转第441页)
·431·中国药事 2004年第 18卷第 7期
不合格率为 3.6%。不合格项目为性状 、 鉴别 、 崩
解时限 、 含量测定等 。主要有多酶片 、 硫酸软骨素
片 、 硫酸软骨素注射液等品种 。
2.3.4 中成药全年抽验 413件 , 不合格106件 , 不
合格率 25.6%, 较往年有所回升 。不合格项目为
鉴别 、微生物限度 、 装量差异 、含量测定等 。主要
有地奥心血康胶囊 、天麻胶囊 、天麻头风灵胶囊 、
强力天麻杜仲胶囊 、 香砂养胃丸 、 三金片 、 骨仙片
等品种。
2.3.5 中药饮片全年抽验 396件 , 不合格 152件 、
不合格率为 38.4%, 高居不合格药品的榜首 。不
合格项目为性状 、 鉴别 、 浸出物 、 总灰分 、酸度 、
含量测定等。其中以防已 、 半夏 、 威灵仙 、 地肤
子 、 木瓜 、沉香 、金钱草 、石斛 、 大黄 、乌梅等品
种不合格率较高 。
形成上述不合格项目 、不合格品种的原因 , 一
是一些企业生产工艺水平低 , 生产条件简陋;二是
一些单位的制度不健全或有制度不落实;三是中成
药的质量标准不够完善;四是运输 、储存不符合规
定要求 , 致使药品发生质量变化;五是药学专业技
术人员缺乏 , 涉药人员业务能力较低 , 缺少必要的
药学常识 。
2002年抽验药品质量情况有以下特点:一是
中药饮片不合格率居高不下。二是流通领域各类药
品的不合格率较高。不合格药品的检验项目大都集
中在装量 、 溶出度 、崩解时限 、 微生物限度等 。前
三项与生产厂家的生产工艺有相当大的关系 , 后一
项与生产环境 、地域湿度的差别有关 。三是假冒药
品屡禁不止 , 特别是市场上比较畅销的药品 , 如吗
丁啉 、 息斯敏 、利君沙等 , 另外 , 随着人们生活水
平的提高和自我保健意识的增强 , 假冒的滋补壮阳
药品增多。四是运用现代高科技手段造假 , 造假方
式越来越隐蔽。比如 , 地奥心血康胶囊 , 伪品与真
品在包装上很难区分。
3 建议
3.1 积极推进 GAP 、 GMP 、 GSP 、 GPP 的实施 , 加
强日常监管 , 特别是要强化对中药饮片的监管力
度 , 把流通领域列为抽验的重点 , 保证合格药品进
入市场 、确保人民用上放心药。
3.2 对生产不合格药品的高发区要加强监控 , 对
屡次出现不合格药品的生产企业进行跟踪抽验 , 对
假冒药品一查到底 。与其他省局跨地域联合打假 ,
采取有力措施 , 打击制售假劣药品的违法行为 。
3.3 加强对基层单位相关人员的培训 , 使其具备
相应的药学常识。
3.4 大力宣传和完善有关法律法规 , 制定操作性
强的实施办法和细则。
3.5 配备先进的检测仪器 , 为药品监督管理提供
强有力的技术支持 。
(上接第 431页)
4 讨论
4.1 质量控制指标的确定
牡荆苷和金丝桃苷是山楂中的主要黄酮类成
分 , 对心血管方面的疾病有较好的治疗作用[ 1] , 因
此用牡荆苷和金丝桃苷作为测定山楂的含量测定成
分 , 测定此两种成分对控制该制剂的质量是非常必
要的 。
4.2 流动相的选择
试验中参考文献[ 2～ 4] , 比较了不同体系和不同
比例的流动相 , 结果以甲醇-水-冰醋酸 (50∶50∶
1)分离效果最好 。
4.3 提取时间的考察
参照文献[ 2 ～ 4] , 按照上述超声提取方法 , 依法
操作 , 对不同超声时间进行考察 , 确定提取时间为
30min 。
4.4 本文是在同一色谱条件下 , 同时测定了牡荆
苷和金丝桃苷的含 量 , 方法简单 , 快速 , 准确度
高 , 重现性好 , 可用于该制剂的质量控制 。
参考文献:
[ 1] 陈红宾 , 江京俐 , 于 兰.四种山楂属植物的药理作用比较
[ J] .中国中药杂志 , 1994 , 19:454
[ 2] 黄文哲 , 梁 旭.HPLC 测定短瓣金莲花中两种黄酮的含量
[ J] .中国药学杂志 , 2000 , 35(10):658
[ 3] 英锡相 , 袁昌鲁 , 张振秋 , 等.反相高效液相色谱法测定心
安胶囊中牡荆素的含量 [ J] .中成药 , 2002 , 24(5):342
[ 4] 扬书斌 , 谢鸿霞 , 孙敬勇 , 等.HPLC法测定山楂中金丝桃
苷的含量 [ J] .中成药 , 1999, 21 (9):475
·441·中国药事 2004年第 18卷第 7期