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HPLC法测定复方土牛膝咽喉合剂中表告依春的含量



全 文 :靠[2-5]。
对比 20 ℃、25 ℃和 30 ℃等温度对盐酸左氧
氟沙星分离的影响,可以发现在不同的温度下,盐
酸左氧氟沙星均可以达到令人满意的系统适应
性,故选择 25 ℃作为色谱运行的温度[6-8]。
在临床诊疗的过程中,由于病情需要,患者常
需在配戴软性角膜接触镜的情况下滴入抗菌药物
滴眼液。本试验选用盐酸左氧氟沙星旨在研究水
凝胶材料类软性角膜接触镜的饱和吸附量,初步
评价配戴软性角膜接触镜的患者使用盐酸左氧氟
沙星滴眼液的安全性。但由于药物在软性角膜接
触镜的吸收和释放是一个比较复杂的过程,需要
考虑临床滴眼液在常规剂量、用法下,软性角膜接
触镜中的药物含量及释放量能否达到临床常规使
用的含量。研究水凝胶材料的饱和吸附量仅是其
中的一个环节,在临床实践中应当权衡患者的风
险及收益,慎重使用。
参考文献:
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(10):43-44.
收稿日期:2014 - 12 - 27
作者单位:1. 东莞市人民医院,广东 东莞 523059;2. 揭阳市
揭东区人民医院,广东 揭阳 515500
基金项目:东莞市科技计划医疗卫生类科研一般项目
(2014105101180)
DOI:10. 14053 / j. cnki. ppcr. 201510025
HPLC法测定复方土牛膝咽喉合剂中表告依春的含量
傅玉新1,陈 莉1,王伟坚1,何晓辉2
[摘 要] 目的 建立高效液相色谱法测定复方土牛膝咽喉合剂中表告依春含量的方法。方法 采用反
相高效液相色谱法,色谱柱为 Kromasil C18柱(250 mm × 4. 6 mm,5 μm),流动相为甲醇 - 0. 1%磷酸水溶液
(10∶ 90),流速为 1 mL /min,检测波长为 245 nm,柱温为 30 ℃。结果 表告依春含量测定的线性范围 2 ~ 30 μg /
mL,r2 = 0. 999 4,平均加样回收率为 97. 39%,RSD 为 2. 03% (n = 6)。结论 建立测定复方土牛膝咽喉合剂中
表告依春含量的高效液相色谱法,该方法准确、可靠,可用于复方土牛膝咽喉合剂的质量控制。
[关键词] 土牛膝;合剂;表告依春;高效液相色谱法
Determination of epigoitrin in compound radix eupatorii chinensis mixture by
HPLC FU Yu-xin1,CHEN Li1,WANG Wei-jian1,HE Xiao-hui2(1. Dongguan People s Hospital,Dongguan
523059,China;2. East Jie Peoples Hospital,Jieyang 515500,China)
[Abstract] Objective To establish a method for the content determination of epigoitrin in compound radix eu-
patorii chinensis mixture by HPLC. Methods HPLC was developed to determine the epigoitrin with UV absorptions at
245 nm. The analysis was performed on a Kromasil C18 column (250 mm ×4. 6 mm,5 μm)with a solvent system of
methanol and 0. 1% aqueous phosphoric acid (10∶ 90,v /v)at a flow rate of 1. 0 mL /min. Results There was a good
linear relationship (r2 = 0. 999 4)in the range of 2 ~ 30 μg /mL. The mean recovery rate was 97. 39%,RSD was
2. 03% (n = 6). Conclusion This method is simple,sensitive and accurate,and it can be used for the quality control
of compound radix eupatorii chinensis mixture.
Key words:Radix eupatorii chinensis;Mixture;Epigoitrin;HPLC
0 引言
复方土牛膝咽喉合剂为我院医院制剂(批准
文号:粤药制字 Z20070718),已生产多年,是由土
牛膝、板蓝根及岗梅药材加水煎煮、浓缩等制成的
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液体口服制剂,具有清热解毒、利咽化痰之功效,
主要用于治疗咽喉炎,急、慢性扁桃体炎,因感冒
引起的喉部不适等,在临床已使用多年,具有较为
明显的临床效果[1-2],为了进一步控制其质量,本
文采用高效液相色谱法(HPLC)测定其中表告依
春的含量,报道如下。
1 试药与仪器
复方土牛膝咽喉合剂(东莞市人民医院,规
格:100 mL /瓶,批号:20140801),表告依春对照品
(上海源叶生物科技有限公司,规格:HPLC≥
98%,批号:YS0810YA14),南板蓝根(东莞市广济
中药饮片有限公司,产地:广东),广东土牛膝(东
莞市广济中药饮片有限公司,产地:广东),岗梅
(东莞市广济中药饮片有限公司,产地:广西),甲
醇(Oceanpak 公司,规格:色谱纯,批号:Me-
11840506),水为超纯水,其他均为分析纯规格。
套式恒温器(海宁市新华医疗器械厂,型号:
TC-15),超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公
司,型号:KQ3200B),电子天平[梅特勒 -托利多
仪器(上海)有限公司,型号:AL204],Agilent 1100
型高效液相色谱仪(G1311 型四元泵,G1316A 型
柱温箱,G1314A 型检测器,Agilent Chemstation 色
谱工作站)。
2 实验方法与实验结果
2. 1 色谱条件 色谱柱:Kromasil C18柱(250 mm ×
4. 6 mm,5 μm),流动相:甲醇 - 0. 1%磷酸溶液
(10∶ 90),检测波长 245 nm,流速 1. 0 mL /min,柱
温 30 ℃,进样量 20 μL。
2. 2 溶液的配制
2. 2. 1 对照品溶液的配制 精密称取 2. 0 mg 表
告依春对照品,置于 10 mL 的量瓶中,用流动相配
制成浓度为 0. 2 mg /mL 的表告依春对照品溶液,
备用。
2. 2. 2 供试品溶液的配制 精密吸取 1 mL 复方
土牛膝咽喉合剂,用流动相稀释至 100 mL,过
0. 45 μm 的微孔滤膜,供液相检测。
2. 2. 3 阴性对照品溶液的配制 取广东土牛膝
75 g,岗梅根 75 g,加 900 mL 水煎煮 60 min后,分
离药渣与药液,药液保存,药渣加 800 mL 水煎煮
45 min,分离药渣与药液,药渣弃去,合并药液,浓
缩至 150 mL,过滤,精密吸取 1 mL,用流动相稀释
至 100 mL,过 0. 45 μm 的微孔滤膜,供液相检测。
2. 3 专属性试验 精密吸取对照品溶液、供试品
溶液及阴性对照溶液各 20 μL,按“2. 1”项下色谱
条件进样。见图 1。
图 1 表告依春液相色谱图
注:A. 表告依春对照品,B. 复方土牛膝咽喉合剂样品,C. 复方土牛膝咽喉合剂阴性对照
从图 1 可知,供试品溶液的色谱图中,在与对
照品色谱图相同的保留时间上有相同色谱峰,而
阴性样品溶液在此保留时间上无吸收峰。
2. 4 线性关系考察 分别精密吸取表告依春对
照品溶液 0. 1、0. 5、0. 8、1. 0、1. 3、1. 5 mL,用流动
相分别定容至 10 mL,制成浓度为 2、10、16、20、
26、30 μg /mL 的对照品溶液。分别精密吸取上述
对照品溶液 20 μL,按“2. 1”项下色谱条件进行测
定,记录峰面积(Y),以峰面积(Y)为纵坐标、对照
品的浓度(X)为横坐标进行回归,得回归方程:
Y =154. 37 X +33. 985,r2 = 0. 999 4,结果表明,表
告依春在2 ~ 30 μg /mL的浓度范围内与峰面积呈
良好的线性关系。
2. 5 精密度试验 精密吸取表告依春对照品溶
液,用流动相稀释 10 倍,连续进样 6 次,每次
20 μL,按“2. 1”项下色谱条件,测定峰面积。结果
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表告依春对照品溶液的 10 倍稀释液的平均峰面
积值为 3 147. 4,RSD 为 0. 8%,说明精密度良好。
2. 6 稳定性实验 取供试品溶液,分别在 0、2、4、
8、12、24 h进样,按“2. 1”项下色谱条件,测定峰面
积。结果供试品溶液的峰面积平均值为3 095. 1,
RSD 为 1. 2%,说明供试品在 24 h内稳定性良好。
2. 7 加样回收率 取已知表告依春含量的复方
土牛膝咽喉合剂供试品溶液 6 份,约 2. 0 mL /份,
向其中加入适量的对照品溶液,按“2. 1”项下色谱
条件,测定其峰面积,计算表告依春的含量,并计
算回收率、RSD 值,结果见表 1。
2. 8 样品含量测定 随机取复方土牛膝咽喉合
剂样品 5 份,按照“2. 2. 2”项下方法制备供试品溶
液,按“2. 1”项下色谱条件测定表告依春峰面积,
计算样品中表告依春的含量。结果 5 批样品的平
均含量为 0. 019 53。见表 2。
表 1 表告依春加样回收率试验结果
序号
取样量
(mL)
供试品含
量(μg)
加入量
(μg)
测得量
(μg)
回收率
(%)
平均回
收率(%)
RSD
(%)
1 2. 1 20. 82 20. 00 39. 42 96. 57
2 1. 9 18. 84 20. 00 37. 25 95. 91
3 1. 9 18. 84 20. 00 38. 36 98. 77 97. 39 2. 03
4 2. 0 19. 83 20. 00 38. 92 97. 72
5 2. 1 20. 82 20. 00 39. 56 96. 91
6 2. 0 19. 83 20. 00 39. 22 98. 47
表 2 5 批复方土牛膝咽喉合剂样品中表告依春
含量测定结果
批号 1 2 3 4 5 平均含量
表告依春含量(mg /mL) 0. 019 43 0. 019 90 0. 019 36 0. 019 28 0. 019 65 0. 019 53
3 讨论
复方土牛膝咽喉合剂处方中板蓝根为十字花
科植物菘蓝的干燥根,性苦、寒,具有清热解毒、凉
血利咽之功效[3],为复方土牛膝咽喉合剂处方中
的君药。板蓝根的化学成分复杂,主要含有生物
碱类、有机酸类、多糖类、氨基酸类、核苷类等组
分[4]。随着研究的不断深入,发现板蓝根中表告
依春为代表成分的生物碱类是其抗病毒的有效成
分[5]。现代药理研究也表明,表告依春为板蓝根
抗流感的主要成分之一,板蓝根抗流感病毒作用
的强弱与体内表告依春含量的高低密切相关[6]。
药典[7]中也选用表告依春作为板蓝根的质量控制
指标。因此,检测表告依春含量,对控制复方土牛
膝咽喉合剂的质量很有意义。文献报道,采用
HPLC 法测定表告依春含量的流动相有很多种,包
括甲醇 -水(10∶90)、乙腈 -水 -磷酸 -三乙胺(8. 5
∶ 90. 72 ∶ 0. 73 ∶ 0. 05)、乙腈 - 0. 5% 磷酸水溶液
(29∶71)以及甲醇 -水梯度洗脱和乙腈 -水梯度洗
脱等[8-10],本试验选用乙腈 - 0. 1% 磷酸溶液
(10∶90),发现采用此流动相条件下,表告依春峰的
分离度好,且保留时间短,可用于复方土牛膝咽喉
合剂的质量控制。
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