全 文 ：基金项目:国家科技重大专项资助项目(2009ZX09103-396)
作者简介:应弘梅 ,女 ,硕士研究生　　研究方向:中药新药研发与质量控制　　＊通讯作者:田景奎 ,男 , 博士 ,教授 , 博士生导师　　研究方
向:天然药物化学以及中药生物技术　　Tel/Fax:(0571)88208454　　E-mail:tjk@zju.edu.cn
HPLC-ELSD测定细梗香草皂苷 B与皂苷 C的含量
应弘梅 1 ,戚中杰 1 ,郭达伟2 ,虞天龙 2 ,张琳 1 ,田景奎 1＊(1.教育部生物医学工程重点实验室 ,浙江大学生物医学工程与仪器科
学学院 ,杭州 310027;2.福建省龙岩市农业科学研究所 ,福建 龙岩 364000)
摘要:目的　建立细梗香草药材中两种皂苷的含量测定法。方法　采用 HPLC-ELSD,以乙腈和 0.3%醋酸溶液梯度洗脱 ,流速
1.0mL· min-1;漂移管温度 100 ℃,气体流速 2.6 L· min-1。结果　细梗香草药材中细梗香草皂苷 B和细梗香草皂苷 C分别
在 0.824 0 ～ 8.240 0 μg(r=0.999 8)和 0.404 8 ～ 4.048 0μg(r=0.999 8)内线性关系良好;平均加样回收率分别为 101.29%
(n=6, RSD=1.60%)和 99.62%(n=6, RSD=2.16%)。不同时期不同产地药材的皂苷含量存在差异。结论　本法操作简
便 、灵敏度高 、重现性好 , 可用于细梗香草药材的质量控制。
关键词:细梗香草;皂苷;高效液相色谱-蒸发光散射检测器;含量测定
中图分类号:R917　　　文献标志码:A　　　文章编号:1001-2494(2011)09-0704-03
QuantitativeDeterminationofCapiliposideBandCapiliposideCinLysimachiacapilipesbyHPLC-ELSD
Assay
YINGHong-mei1 , QIZhong-jie1 , GUODa-wei2 , YUTian-long2 , ZHANGLin1 , TIANJing-kui1＊(1.KeyLaboratoryof
BiomedicalEngineeringofEducation, CollegeofBiomedicalEngineeringandInstrumentScience, ZhejiangUniversity, Hangzhou310027,
China;2.LongyanInstituteofAgriculturalSciences, Longyan364000, China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　ToestablishamethodforthedeterminationofthecontentsofcapilliposideBandcapiliposideCinLysi-
machiacapilipes.METHODS　Usingacetonitrile-0.3% HAcasmobilephase, theseparationandanalysiswasperformedbyHPLC
coupledwithevaporatelightscateringdetector(ELSD).Theflowratewas1.0 mL· min-1 , thetubetemperatureofELSDwas100
℃, andthegasflowwas2.6 L· min-1.RESULTS　Themethodshowedgoodlinearitywithintherangeof0.824 0 -8.240 0 μg
(r=0.999 8)and0.404 8-4.048 0 μg(r=0.999 8)forcapilliposideBandcapilliposideCrespeltively.Theaveragerecoveries
were101.29%(n=6, RSD=1.60%)and99.62%(n=6, RSD=2.16%), respectively.Thecontentsrariedwithdiferentcolected
timeandorigins.CONCLUSION　Themethodisconvenientwithhighsensitivityandrepeatability.Itisexpectedtobeusedinthe
qualitycontrolofLysimachiacapilipes.
KEYWORDS:Lysimachiacapillipes;saponin;HPLC-ELSD;quantification
　　细梗香草(LysimachiacapilipesHemsl.)为报春
花科珍珠菜属植物 ,又名满山香 、香排草。分布于中
国的四川 、江西 、福建 、湖南 、湖北 、贵州 、浙江 、广东 、
河南和台湾等地。细梗香草性甘 ,味平 ,全草入药 ,
民间用于治疗风湿痹痛 、月经不调 、咳喘 ,并有补虚 、
驱蛔之功效 。通过对细梗香草的化学成分的研究 ,
发现皂苷和黄酮是该植物中的主要成分 [ 1-4] ,此外还
有挥发油 、甾醇类化合物 [ 5] 。以其中的黄酮类为主
要成分制成的 “满山香片 ”,用于治疗外感风热 、发
热头痛 、咽痛 、身痛等 。我们通过前期的研究发现 ,
细梗香草所含的皂苷有很好的抗肿瘤效果 ,而关于
细梗香草中皂苷的含量测定尚未见文献报道。本实
验首次建立了 HPLC-ELSD测定细梗香草中 2个主
要的皂苷细梗香草皂苷 B和细梗香草皂苷 C的含
量测定方法 ,分析了 11批药材中两种皂苷的含量 ,
为评价细梗香草药材质量提供了科学依据。
1　仪器与试药
1.1　仪器
JA2003N电子天平(上海精密科学仪器有限公
司);SartoriusCP225D电子天平(德国赛多利斯有限
公司);KQ-500E超声波清洗器 (昆山市超声仪器
有限公司);LC-10A高效液相色谱仪(日本岛津株
式会社);AltechELSD-2000ES蒸发光散射检测器
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(美国奥泰公司);A-10全自动空气源(北京中惠
普分析技术所);Miliporesynergr超纯水系统(美国
密理博公司)。
1.2　试药
细梗香草皂苷 B(capiliposideB, C58H96 O24 ,批
号 20081230 ,自制),细梗香草皂苷 C(capiliposide
C, C57H94O24 ,批号 20081229,自制),经面积归一化
法计算 ,纯度大于 98%。药材分别采自福建龙岩 、
江西九江 、贵州都匀等地 ,经浙江大学张琳副教授鉴
定为报春花科植物细梗香草(L.capilipesHemsl)的
干燥全草。乙腈为色谱纯 ,水为超纯水 ,其他试剂均
为分析纯。
2　实验方法
2.1　色谱条件
色谱柱:AgilentTC-C18 (2)柱 (4.6 mm×250
mm, 5 μm);流动相:乙腈 -0.3% HAc(42∶58);流
速:1.0 mL· min-1;柱温:40 ℃;进样量:20 μL。
ELSD漂移管温度:100 ℃,气流:2.6 L· min-1 ,气
压:0.4 MPa。
2.2　对照品溶液的制备
精密称取细梗香草皂苷 B、细梗香草皂苷 C适
量 ,加流动相配成含皂苷 B1.030 mg· mL-1 ,含皂
苷 C1.012 mg·mL-1的储备液 ,冷藏备用 。
2.3　供试品溶液的制备
精密称取细梗香草粉末 1g(过三号筛),置 500
mL回流瓶中 ,加入体积分数 70%乙醇回流提取 5
次 ,每次 50mL,提取液回收溶剂 ,残渣加水溶解 ,定
容至 100 mL。
2.4　系统适用性实验
取对照品 、供试品溶液经高速离心后 ,各吸取
20 μL,按 “2.1”下色谱条件 ,分别注入液相色谱仪
测定 ,记录色谱图 。在该实验条件下 ,细梗香草皂苷
B、细梗香草皂苷 C达到基线分离。理论塔板数按
细梗香草皂苷 C计算不低于 5 000。对照品所对应
的色谱峰与相邻的色谱峰分离度均大于 1.5。色谱
图见图 1、2。
3　结　果
3.1　线性关系考察
精密量取对照品储备液细梗香草皂苷 B(批号
20081230, 1.030 mg· mL-1)2 mL,细梗香草皂苷 C
(批号 20081229, 1.012mg· mL-1)1mL,置 5mL量
瓶 ,定容至刻度。配置成含细梗香草皂苷 B0.412 0
mg· mL-1 ,细梗香草皂苷 C0.202 4mg·mL-1的混
合对照品溶液 。按 “ 2.1”下色谱条件 ,分别进样 2、
5、10、15、20 μL,记录色谱峰面积。以峰面积的自
然对数(Y=lnA)为纵坐标 ,以进样量的自然对数
(μg)为横坐标进行线性回归 ,结果见表 1。可见
该方法在实验范围内线性关系良好。
3.2　精密度
精密吸取对照品溶液 ,重复进样 5次 ,以峰面积
计算 RSD,细梗香草皂苷 B、细梗香草皂苷 C的 RSD
分别为 1.13%和 1.09%。
3.3　重复性
取批号为 20090622的细梗香草药材 ,按 “ 2.3”
项下制成供试品溶液 ,平行 6份 ,采用 “2.1”项下条
件 ,采用 HPLC测定含量 ,结果细梗香草皂苷 B、细
梗香草皂苷 C的平均含量分别为 2.17%、1.28%,
RSD分别为 1.33%、1.57%。
3.4　稳定性
取供试品溶液 ,分别于 0、2、4、8、12、24h进样 ,测
定峰面积 。细梗香草皂苷 B、细梗香草皂苷 C的 RSD
分别为 1.85%、1.58%,说明样品在 24h内稳定。
3.5　回收率
取已知含量的的细梗香草样品 6份 ,精密称定 ,
分别加入等量的对照品溶液 ,按 “ 2.3”项下制备供
　　
表 1　细梗香草皂苷 B、C线性关系考察结果
Tab.1　Linearityofcalibrationcurveofthecompounds
Compounds Regressionequation r Linerrange/μg
CapiliposideBY=1.287 174X+12.947 71 0.999 8 0.824 0 ～ 8.240 0
CapiliposideCY=1.212 837X+13.130 67 0.999 8 0.404 8 ～ 4.048 0
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试品溶液 ,定容至 50 mL。在 “2.1”色谱条件下分
析 ,计算回收率。细梗香草皂苷 B的平均加样回收
率为 101.29%,细梗香草皂苷 C的平均加样回收率
为 99.62%;RSD分为 1.60%, 2.16%。
3.6　不同批次药材含量测定
取不同批次的细梗香草药材 ,按 2.3项下制备
供试品溶液 ,平行 3份 ,测定其中细梗香草皂苷 B、C
的含量(按干药材计算)。结果见表 2。
4　讨　论
4.1　细梗香草全草含丰富的黄酮和皂苷 ,其中皂苷
类成分具有很好的抗肿瘤活性 。本实验以细梗香草
皂苷 B和 C为评价指标 ,测定了 11批不同产地或
采集时期的药材中细梗香草皂苷 B和细梗香草皂
苷 C的含量。
由于细梗香草皂苷紫外吸收弱 ,采用末端波长
时基线噪音大 ,影响检测灵敏度。蒸发光散射检测
器(ELSD)是通用型检测器 ,其响应值仅与被测物的
质量有关而不依赖于它的光学特性 ,即使在梯度条
件洗脱也不容易产生基线漂移 ,广泛应用于弱紫外
吸收物质的检测中 [ 6-7] 。因此本实验采用高效液相
分离 , ELSD检测皂苷 ,进行含量测定 ,大大提高了
检测的灵敏度和专属性。
表 2　细梗香草中皂苷含量测定结果 .n=3, x±s
Tab.2　SaponinscontentsinLysimachiacapillipes.n=3, x±s
BatchNo. Origin Content/%CapiliposideB CapiliposideC Total
20090112 Fujian 1.23±0.008 0.91±0.013 2.14±0.016
20090212 Guizhou 0.48±0.026 0.26±0.007 0.74±0.032
20090508 Fujian 1.18±0.029 1.45±0.048 2.63±0.045
20090622 Fujian 2.17±0.024 1.28±0.017 3.45±0.041
20090618 Jiangxi 2.17±0.016 2.35±0.046 4.52±0.061
20090814 Jiangxi 2.31±0.053 1.76±0.037 4.07±0.030
20091123 Fujian 0.78±0.005 0.60±0.004 1.38±0.008
20091220 Fujian 1.00±0.027 1.58±0.027 2.58±0.058
20100323 Fujian 0.89±0.009 0.63±0.004 1.52±0.026
20100427 Fujian 1.01±0.011 1.75±0.051 2.76±0.050
20100526 Fujian 1.34±0.042 1.61±0.034 2.95±0.061
4.2　从各批次药材来看 ,江西 、福建产药材的皂苷
含量较高 。江西产药材中两个主要皂苷含量之和在
3.80% ～ 4.60%, 福建的药材含量在 1.30% ～
3.50%之间 。上述药材均为野生 ,其中江西省的药
材较为纤细 ,因此 ,皂苷含量差异可能来源于药材的
生长期和不同的生长环境。野生药材资源的质量受
不同产地 、采收时间 、生态环境以及贮藏运输方式等
的影响较大 ,因此要进一步建立细梗香草药材种植
规范化基地 , 制定药材质量标准 , 从而控制药材
质量 。
4.3　关于细梗香草的药材标准 ,目前仅见江西省地
方标准以满山香为正名收载[ 8] ,而未收载于 《中国药
典》。其中对细梗香草的理化鉴别 ,仅用荧光法检测
了黄酮类成分的存在 ,并未对其他成分进行鉴定。本
实验运用 HPLC测定了 11批药材中 2种主要皂苷的
含量 ,为细梗香草药材的质量控制提供了依据。
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210-212.
(收稿日期:2010-11-20)
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