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HPLC法测定民族药材角蒿不同部位中绿原酸的含量



全 文 :滤膜即得供试品。
图 2 供试品溶液
2. 4 线性关系实验:精密吸取对照品溶液 1ul,2ul,3ul,
5ul,7ul,分别进样,于 350nm处测定芹菜素 - 7 - O - β - D
-葡萄糖醛酸苷的峰面积。以进样量(μg)为横坐标(X) ,
以峰面积为纵坐标(Y)计算回归方程,芹菜素 - 7 - O - β
- D -葡萄糖醛酸苷的回归方程为 Y = 3058927. 58X + 61.
97,结果表明芹菜素 - 7 - O - β - D -葡萄糖醛酸苷在 0. 2
~ 0. 14μg范围内线性关系良好。
图 3 线性关系试验
2. 5 精密度实验:取同一批供试品,按“2. 3”法制备供试
品溶液,按上述色谱条件连续进样 5 次,测得峰面积 RSD =
1. 65%。
2. 6 稳定性实验:取同一批号供试品,按 2. 3 项下法制备
供试品溶液,每 2h进样 1 次,重复 5 次,RSD = 2. 79%。
2. 7 重复性实验:按样品测定方法,对同一批半截烂药材
进行平行实验 5 次,测得峰面积 RSD = 2. 98%。
2. 8 加样回收率实验:称 5 份同一批号已知含量的供试品
0. 5g,分别加入芹菜素 - 7 - O - β - D - 葡萄糖醛酸苷
1mL,浓度为 0. 02mg /mL对照品溶液配成浓度为 0. 004mg /
mL,进行平行实验测定 5 次,RSD = 3. 4%。
2. 9 样品测定:根据以上方法测定得出芹菜素 - 7 - O - β
- D -葡萄糖醛酸苷的含量为 0. 0086%。
3 讨论
3. 1 经过不同系统选择,甲醇 - 0. 05%磷酸水和乙腈 - 0.
5%磷酸水等一系列的流动相选择,最终确定乙腈 - 0. 05%
磷酸水(20:80)分离度最好,且基线稳定不漂移。
3. 2 由于半截烂中芹菜素 - 7 - O - β - D -葡萄糖醛酸苷
的含量不高,对半截烂的提取方法进行了考察,得出超声提
取 30min芹菜素 - 7 - O - β - D -葡萄糖醛酸苷峰面积相
对要高一些。
参考文献
[1]潘永华. 土家药四宝[J]. 中国民族医药杂志,1997. 3
(4).
[2]郭珅珅,杜 江.民族药雪里见的研究进展[J]. 中国民
族医药杂志,2009,(7) :49 - 51.
[3]陈春霞. 民族药材雪里见生物活性及化学成分研究
[D]. 华中科技大学博士论文,2012 - 05 - 01.
[4]王丽,马远,陈随清.构树叶中牡荆素、芹菜素 - 7 - O -
β - D -葡萄糖醛酸苷的含量测定[J]. 安徽农业科学,
2011,39(35) :21647 - 21649.
2015 年 1 月 26 日收稿
△内蒙古自然科学基金(编号:2014MS0860)
HPLC法测定民族药材角蒿不同部位中绿原酸的含量△
李雅芬1 白音夫2
(1.内蒙古自治区人民医院,内蒙古 呼和浩特 010017 ;
2.内蒙古自治区中医药研究所,内蒙古 呼和浩特 010020)
摘 要:目的:HPLC法测定角蒿不同部位中绿原酸的含量。方法:HPLC法测定;色谱柱 Kromasi - C18 (4. 6mm × 200mm,
5μm) ;流动相:乙腈 - 3mL·L -1磷酸溶液(12∶ 88) ;检测波长 328nm。结果:HPLC法绿原酸标准曲线浓度在 7 ~ 140·g·
mL -1范围内呈线性关系(r = 0. 999) ,平均回收率为 106. 8%,RSD为 4. 21% (n = 6) ,角蒿不同部位含有绿原酸。结论:角
蒿绿原酸含量根部 0. 021%,茎枝 0. 032%,花 0. 110%,叶 0. 061%,果 0. 035%,平均含量 0. 052%,花中绿原酸含量高。
关键词::HPLC法;角蒿;绿原酸
中图分类号:R291. 2 文献标识码:A 文章编号:1006 - 6810(2015)03 - 0053 - 02
本品系民族医习用药材,蒙古名乌兰陶鲁麻,为紫葳科植物
352015 年 3 月第 3 期 中国民族医药杂志
DOI:10.16041/j.cnki.cn15-1175.2015.03.037
角蒿 Incarvillea sinensis Lam,别名透骨草,是一种具有地方
特色的植物药,在民族医药及民间中应用广泛。角蒿根入
药或全株能入药。蒙医为镇赫依,燥希日乌素,润肠通便,
肺热咳嗽[1];中医为祛风湿,活血止痛。含生物碱、熊果
酸、毛蕊花糖苷、木樨草素吡喃糖类,药理研究:抗肿瘤、抗
氧化、抗贫血及止痛作用[2],药材质量控制成分未见报道。
本文对其不同部位已知成分绿原酸进行了含量研究。
1 仪器与试剂
1. 1 仪器:1100 型高效液相色谱仪 (美国安捷伦公司) ,
TJ - 912 型色谱分析平台(太极计算机公司)。
1. 2 试药:绿原酸对照品由中国药品生物制品检定所提
供;乙腈为色谱纯;其他均为分析纯试剂;水为纯化水;角蒿
(2013 年 7 月自采内蒙古呼和浩特市大青山坝口村)。
2 实验方法与结果
2. 1 色谱条件:色谱柱 Kromasi - C18 (4. 6mm × 200mm,
5μm) ,流动相乙腈 - 3mL·L -1磷酸溶液(12 ﹕ 88) ,波长
328nm,进样 10μL。在此条件下待测组分可达到基线分
离。样品中绿原酸与其它组分有较好的分离,见图 1。
图 1 HPLC图谱
A.绿原酸对照品;B.供试品;1. 绿原酸
2. 2 对照品溶液的制备:精密称取干燥至恒质量的绿原
酸对照品适量,置棕色量瓶中,甲醇溶解,配制成 1mL含 0.
28 mg 绿原酸溶液,作为对照品溶液。
2. 3 供试品溶液的制备:取本品根、茎、花叶与地上部位,
粉碎,过 100 目筛,精密称定 70mg,置具塞锥形瓶中,精密
加入甲醇 10mL,称质量,超声处理 50min ,放冷,称重,用甲
醇补足减失的质量,摇匀,滤过,取续滤液备用,即得。
2. 4 线性关系考察:分别精密量取绿原酸对照品溶液 0.
25,0. 5,1,2,3,4 和 5mL,置于 10mL量瓶内,用甲醇稀释至
刻度,按上述色谱条件进行测定。结果,在 7 ~ 140 μg·
mL -1浓度范围内以峰面积(A)与对照品质量浓度(C)进行
回归,其线性关系良好。回归方程为:A = 5452. 5 + 7008. 4
C,r = 0. 999。
2. 5 稳定性实验:取同 1 份供试品溶液,分别在 0,1,2,4h
进样测定,以绿原酸峰面积值计算 RSD为 0. 40%。结果表
明,供试品溶液在 4h内稳定。
2. 6 精密度实验:吸取同一批供试品溶液,在上述色谱条
件下重复进样 6 次,测得绿原酸峰面积 RSD为 0. 37%。
2. 7 重复性实验:取同批药材花部位按 2. 3 项下平行制
备 6 份样品溶液,并按 2. 1 项下测定,绿原酸的平均含量为
0. 110%,RSD = 0. 81%。
2. 8 加样回收率实验:取同批药材地上部位已知含量的
样品 6 份,每份取约 50mg,精密称定,依次精密加入分别加
入 0. 1mL(每 mL 含绿原酸 4. 20 mg)对照品溶液,挥去溶
剂,按供试品溶液的制备操作,测定含量,计算回收率。绿
原酸平均回收率为 106. 8%,RSD为 4. 21%(n = 6)。
2. 9 样品测定:取角蒿药材不同部位,按 2. 3 项下方法制
备供试品溶液,按拟定的色谱条件测定绿原酸含量,结果根
部 0. 021%,茎枝 0. 032%,花 0. 110%,叶 0. 061%,果 0.
035%,平均含量 0. 052%。
3 讨论
角蒿是一种常见常用的野生药用植物,对其研究报道
主要集中在生物碱方面,对质量标准也集中在纤维鉴别方
面。本文从角蒿活性成分角度测定了不同部位中绿原酸含
量,从测定结果看,绿原酸可作为角蒿质量控制成分之一。
角蒿根茎花叶果中均含有绿原酸,特别是花中绿原酸含量
高。
参考文献
[1]内蒙古卫生厅.内蒙古蒙药材标准[S]. 1987,424.
[2]晏永明,董小萍,程永现. 角蒿属药用植物化学成分与
活性研究进展[J].亚太传统医学,2010,6(4) :4
2015 年 3 月 30 日收稿
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45 中国民族医药杂志 2015 年 3 月第 3 期