全 文 ：小花琉璃草多糖提取工艺研究
缪天琳1，2，张跃华1，李文龙1，刘娟2* (1．佳木斯大学生命科学学院，黑龙江佳木斯 154007;2．佳木斯大学药学院，黑龙江佳木
斯 154007)
摘要 ［目的］优选小花琉璃草的多糖提取工艺。［方法］以小花琉璃草主茎粉末为原料，采用热水浸提法提取小花琉璃草多糖，选取提
取温度、提取时间、料液比和提取次数 4个影响因素进行单因素试验，通过 L9(3
4)正交试验确定小花琉璃草多糖提取的最佳提取工艺;
并用苯酚 －硫酸测定多糖含量。［结果］提取次数对小花琉璃草多糖含量影响最大，其次依次为料液比、提取时间和提取温度。最佳提
取工艺条件为:提取次数 2 次，料液比 1∶ 30(g /ml)，提取温度 90 ℃，提取时间 3 h。［结论］在最佳提取条件下，多糖提取率最高可
达 2． 28%。
关键词 小花琉璃草(Cynoglossum lanceolatum Forsk);多糖提取;工艺优化
中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2013)33 －12841 －02
Cynoglossum lanceolatum Forsk Polysaccharide Extraction Technology
MIAO Tian-lin et al (College of Life Science，Jiamusi University，Jiamusi，Heilongjiang 154007)
Abstract ［Objective］To optimize polysaccharide extraction technology of Cynoglossum lanceolatum． ［Method］With main stem powder of
Cynoglossum lanceolatum as raw material，hot water extraction method was adopted to extract polysaccharide from Cynoglossum lanceolatum． Ex-
traction temperature，time，solid － liquid ratio and times were selected to conduct single factor test，the optimum extraction technique was deter-
mined by L9(3
4)orthogonal test;The polysaccharide content was determined by phenol － sulfuric acid． ［Ｒesult］The order of influencing factors
is as follows:extraction times ＞ solid － liquid ratio ＞ extraction time and extraction temperature． The optimum extraction conditions are:extrac-
tion times 2，solid － liquid ratio 1∶ 30 (g /ml)，extraction temperature 90 ℃，extraction time 3 h． ［Conclusion］Under the optimum extraction
conditions，polysaccharide extraction rate could up to 2． 28% ．
Key words Cynoglossum lanceolatum;Polysaccharide extraction;Technique optimization
基金项目 黑龙江省卫生厅课题(2012 － 268) ;佳木斯大学校重点课题
(SZ2009 － 011)。
作者简介 缪天琳(1985 － ) ，女，辽宁绥中人，硕士研究生，研究方向:
药用植物。* 通讯作者，教授。
收稿日期 2013-10-22
小花琉璃草(Cynoglossum lanceolatum Forsk)为紫草科
(Boraginaceae)琉璃草属(Cynoglossum)多年生草本植
物［1 －2］，主产于我国云南、贵州和广西，在华东和华南等地也
有分布［3］，全草入药。小花琉璃草具有清热解毒、利尿消肿
和活血之功效，是我国彝族、藏族药典记载的民族中药材，主
要用于治疗月经不调和急性肾炎等，外用可用于治疗痈肿疮
毒和毒蛇咬伤［4］。笔者以小花琉璃草主茎粉末为原料，采用
热水浸提法对影响小花琉璃草多糖提取的因素进行单因素
试验和正交试验，探究节能高效最佳的提取工艺参数，以期
为开发小花琉璃草多糖的功能性产品提供技术支持。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。药材采自云南曲靖市，经佳木斯大学生
命科学学院王长宝博士鉴定为紫草科琉璃草属小花琉璃草
(Cynoglossum lanceolatum Forsk)。
1． 1． 2 主要仪器。SHB-(Ⅲ)循环水式多用真空泵和 Ｒ-
1001N旋转蒸发仪，购自郑州长城科工贸有限公司;722可见
分光光度计，购自上海欣茂仪器有限公司;LXJ-Ⅱ离心机沉淀
机，购自上海医用分析仪器厂;恒温水浴锅，购自郑州长城科
工贸有限公司;GZX-9076电热恒温鼓风干燥箱，购自上海博
迅实业有限公司。
1． 1． 3 主要试剂。95%乙醇，无水乙醇，葡萄糖，浓硫酸，重
蒸酚，均为分析纯，市售。
1． 2 方法
1． 2． 1 材料处理。将采集的小花琉璃草的茎晾晒干燥，用
中药粉碎机对样品进行粉碎，过 60 目筛，放于 55 ℃恒温箱
内干燥后保存备用。
1． 2． 2 线性关系的考察。采用苯酚 －硫酸法测定多糖含
量［5 －6］。在 105 ℃下干燥至恒重的葡萄糖标准品，精确称取
10 mg定容于 100 ml的容量瓶中，配制成浓度 100 μg /ml 的
葡萄糖标准液。分别精密移取标准液 0． 1、0． 2、0． 4、0． 6、0． 8
和 1． 0 ml加入具塞试管中，加水补充至 2． 0 ml，再加入浓度
6%苯酚溶液 1． 0 ml，充分混匀后迅速沿管壁加入 5． 0 ml 浓
硫酸，摇匀后静置 20 min，并以 2． 0 ml蒸馏水作空白对照;在
490 nm波长处利用可见分光光度计测定吸光度。以葡萄糖
浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标进行线性回归，计算回归
方程。
1． 2． 3 多糖的提取。小花琉璃草多糖热水浸提法流
程［7 －12］:小花琉璃草茎粉末(每份 10． 0 g)→脱去脂类和色素
(浓度95%乙醇，浸泡12 h)→热水提取→提取液旋转蒸发至
微粘稠→4倍无水乙醇沉淀(4 ℃冰箱，放置 12 h)→离心
(4 000 r /min，20 min)→沉淀无水乙醇、丙酮洗涤 3 次→60
℃恒温干燥得粗多糖。
1． 2． 4 单因素试验。(1)提取温度对多糖得率的影响。分
别控制温度为 60、70、80、90 和 100 ℃，在料液比为 1 ∶ 15
(W/V，g /ml，下同) ，提取时间为 2 h，提取次为 1 次条件下进
行多糖提取，考察提取温度对小花琉璃草多糖提取的影响。
(2)提取时间对多糖得率的影响。分别控制提取时间为 1、
2、3、4和 5 h，在温度 90 ℃、料液比为 1∶ 15、提取次数为 1 次
条件下进行多糖提取，考察提取时间对小花琉璃草多糖提取
的影响。(3)料液比对多糖得率的影响。分别设定料液比为
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2013，41(33):12841 － 12842，12845 责任编辑 石金友 责任校对 卢瑶
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2013.33.009
1∶ 10、1∶ 15、1∶ 20、1∶ 25 和 1∶ 30，在温度 90 ℃、提取时间为 2
h、提取次为 1次条件下进行多糖提取，考察料液比对小花琉
璃草多糖提取的影响。(4)提取次数对多糖得率的影响。分
别在提取次数 1、2、3、4和 5次，在提取温度 90 ℃、提取时间
为 2 h、料液比为 1∶ 15 条件下，考察提取次数对小花琉璃草
多糖提取影响。
1． 2． 5 正交试验［7］。根据单因素试验结果，以提取温度、提
取时间、料液比和提取次数为影响因素对小花琉璃草多糖提
取进行 L9(3
4)正交试验设计(表 1)。
表 1 正交试验因素水平设计
水平
因素
A温度
℃
B时间
h
C料液比
g /ml
D提取
次数
1 80 2 1∶ 20 1
2 90 3 1∶ 25 2
3 100 4 1∶ 30 3
2 结果与分析
2． 1 线性关系的考察 以标准葡萄糖浓度 C 为横坐标，吸
光度 A为纵坐标绘制标准曲线，计算得线性回归方程为:Y =
0． 006 8X +0． 007 2，Ｒ2 = 0． 997，浓度在 0 ～ 50 μg /ml 范围内
线性相关性良好。
2． 2 单因素试验
2． 2． 1 提取温度对小花琉璃草多糖得率的影响。图 1 表
明，小花琉璃草多糖得率随温度的升高而增大，数值间存在
明显差异，超过 80 ℃后增幅更明显，100 ℃时多糖得率最高。
这是因为多糖的溶解度会随提取温度的升高而增大，所以在
一定温度范围内，温度上升多糖得率会明显提高。
图 1 提取温度对小花琉璃草多糖得率的影响
2． 2． 2 提取时间对小花琉璃草多糖得率的影响。图 2 表
明，用热水浸提法提取小花琉璃草多糖在 1 ～ 3 h时间段，小
花琉璃草多糖得率随着时间的延长而提高，数值之间存在明
显差异，3 h后多糖得率上升逐渐平缓。这是因为在提取的
初期，小花琉璃草多糖能够被不断浸出时间越长多糖得率越
高，但是随着提取时间的延长，小花琉璃草多糖的浸出量逐
渐升高而最终达到最高点，所以再延长时间多糖得率也不会
再提高。所以 3 h为小花琉璃草多糖提取的最佳提取时间。
2． 2． 3 料液比对小花琉璃草多糖得率的影响。图 3 表明，
料液比在 1∶ 10 ～1∶ 25时，随着料液比的增加，小花琉璃草多
图 2 提取时间对小花琉璃草多糖得率的影响
糖得率明显增大;在料液比为 1∶ 25 时趋于平缓，达到最大
值。由于作为溶剂的水，在开始小花琉璃草多糖还没有完全
溶解就已经达到了饱和，使提取出的多糖无法全部溶解于其
中，所以在提高加水量时多糖提取率明显提高;但是当加水
的量达到可以溶解所有提出的多糖时，当继续提高加水量
时，所溶解的多糖量将保持不变，故小花琉璃草多糖提取的
最佳料液比为 1∶ 25。
图 3 料液比对小花琉璃草多糖得率的影响
2． 2． 4 提取次数对小花琉璃草多糖得率的影响。图 4 表
明，小花琉璃草多糖提取得率随着次数增加明显提高，提取
次数越多，多糖溶出的越完全。但是提取次数为 3次时增加
已不明显，而且随着提取次数的不断增加，提取液会增加，增
加了提取的工作量和成本。因此，小花琉璃草多糖的提取选
择提取 2次为最佳。
图 4 提取次数对小花琉璃草多糖得率的影响
2． 3 正交试验结果 由表 2 可知，最优提取工艺为
A2B3C3D2，即提取温度 90 ℃，提取时间 3 h，料液比 1∶ 30，提
取 2次，小花琉璃草多糖提取率最高。方差分析结果表明，
(下转第 12845页)
24821 安徽农业科学 2013 年
表 3 果实性状方差分量及遗传参数估算
性状 均值 标准差
家系间方差分量
MSf SSf
家系内方差分量
MSe SSe
家系
遗传力
遗传增益
%
果实纵径∥mm 14． 71 1． 679 101． 374 11． 264 177． 605 1． 973 0． 825 7． 53
果实横径∥mm 7． 42 0． 949 16． 480 1． 831 72． 610 0． 807 0． 559 5． 72
种粒数量∥N 13． 64 3． 249 220． 840 24． 538 824． 200 9． 158 0． 627 11． 94
注:MSf 表示表现型方差，MSe 表示环境方差，SSe 表示平方和，选择强度 i =0． 80。
4 结论与讨论
蓝靛果忍冬是重要的经济型树种，抗逆性、生态偶合性
和抗寒能力较强。几年来，我国学者仅探讨其分类地位、生
态特性、营养成分及利用价值，有关遗传效应方面的报道极
少。为此，笔者通过对生态耦合性和遗传效应的分析与评
价。结果表明，生境类型不同，果实横径、果实纵径和种粒数
量差异明显，且纵径变异较小，横径变异较大，种粒数量变异
最大，平均变异系数分别为 9． 38%、11． 92%和 20． 64%;果实
性状受遗传基因控制程度较强，遗传力和遗传增益中等，分
化较小，3个性状的遗传力分别为 0． 825、0． 559 和 0． 627，遗
传增益分别为 7． 53%、5． 72%和 11． 94%;林缘低湿地的光
照、温度、湿度及土壤含水量与生长发育和果实品质的耦合
关系紧密，以果实纵径、横径和种粒数量为主要评价指标，兼
顾变异程度和遗传效应，建议在经济林培育过程中，选择林
缘低湿地这一生境类型，可充分发挥林地的生长潜力，经济
效益明显。
参考文献
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8511．
(上接第 12842页)
影响小花琉璃草多糖提取的主次因素为 D ＞ B ＞ C ＞ A，即提
取次数 ＞料液比 ＞提取时间 ＞提取温度。
表 2 L9(3
4)正交试验结果
试验号 A B C D
多糖提
取率∥%
1 1 1 1 1 1． 09
2 1 2 2 2 1． 62
3 1 3 3 3 2． 12
4 2 1 2 3 1． 71
5 2 2 3 1 1． 36
6 2 3 1 2 2． 28
7 3 1 3 2 1． 89
8 3 2 1 3 1． 77
9 3 3 2 1 1． 19
k1 1． 61 1． 56 1． 71 1． 21
k2 1． 78 1． 58 1． 51 1． 93
k3 1． 62 1． 86 1． 79 1． 87
Ｒ 0． 17 0． 30 0． 28 0． 72
3 结论与讨论
热水浸提取法提取小花琉璃草多糖，影响因素有时间、
温度、料液比和提取次数。试验结果表明，提取时间大于 3
h，提取次数大于 2次得到的粗多糖量最多，但粗多糖中多糖
含量明显减少，说明其他物质溶出量增多;提取次数仅为 1
次时多糖纯度最高;单因素试验得到多糖最佳提取温度是
100 ℃，但高温下多糖的活性可能受到影响。通过 L9(3
4)正
交试验得到小花琉璃草琉璃草多糖提取工艺的优化结果是
提取温度 90 ℃，提取时间 3 h，料液比 1∶ 30，提取 2 次;在此
提取条件下，多糖提取率最高可达 2． 28%。
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