全 文 ：药物分析杂志 C h i n J P h a r m A n a l00 8 2, 2 8 ( 10 ) 一 1 64 5 一
R P 一 H P L C 法测定 白花银背藤药材中东蓖著内醋的含量
贾薇 , 汪杰 , 曾元儿 ’ , 江滨
(广州中医药大学中药学院 , 广州 5 10 006 )
摘要 目的 :建立白花银背藤中东蓖若内醋的 R P 一 H P L C 含量测定方法 。 方法 : 采用高效液相色谱法 , 色谱柱为 LI C h r os p h er
100 R p 一 C .: ( 2 50 m m x 4 m m
,
5 协 m ) , 流动相 : 甲醇 一 0 . 5% 醋酸水溶液 ( 2 2 : 7 8 ) , 流速为 l . o m L · m in 一 ’ , 分析时间 3 o m i n , 检
测波长 228 n m ,进样体积 : 5 一 20 林L 。 结果 : 该方法的线性范围为 0 . 05 一 0 . 50 林g , : 二 0 . 9 996 ( n = 5 ) ;平均回收率 ( n = 5) 为
%
.
9%
,
R SD 为 1 . 6 % 。 结论 :该法简便 、 准确 , 重复性好 ,可用于白花银背藤药材的质量控制 。
关键词 : 白花银背藤 ;东蓑若内醋 ; RP 一 H PL C
中图分类号 : gR l 7 文献标识码 : A 文章编号 : 0 2 5 4 一 1 7 93 ( 20 0 8 ) 10 一 16 45 一 03
R P 一 H P L C d e t e r m i n a it o n o f s c o P o l e it n i n H e r b a A r g y r e i a e S e 9 1 11 11
JIA W
e i
,
W AN G J i
e ,
ZE N G Y u a n 一 e r * , J I A N G B i n
( C
o
l l
e g e o f Ph a m a c y
,
G u a n g
z
h
o u
Un i
v o r s
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I’ CM , G u a n g z h。, u 5 10 0 0 6 , C hi n a )
A b s t r a c t O bj e c t i
v e : T o e s t a b li s h a ; 1 R P 一 H PL C m e t h o d fo r t h e d e t e rm in a t i o n o f s e o p o l e t i n i n H e r b a A笔y r e ia e
S e g u i n i i
.
M e ht o d
: A n H p L C m e t h o d w a s d e
v e lo p e d
.
L ICh
r o s ph e
r 10 0 R p 一 C . 、 e o l u m n ( 2 5 0 m m x 4 m m
,
5 协m )
w a s a d o P t e d
, a n d th e m o b i l e P h a s e e o n s i s te d o f m e th a n o l a n d o
,
5% a e e t i e a e id s o l u t i o n ( 2 2 : 7 8 )
.
F l
o w r a t e w a s 1
.
0
m L
·
m i n
一 ’ , 。 n d a n a l y s i s t im e w a s 3 0 m i n
.
D e t e e ti o n w a s a t 2 2 8 n m w i r h inj e e ti o n v o l u m e o f s 一 2 0 林 L . eR s ul t s :
T h e l i n e a r r a n g e w a s 0
.
0 5 一 0
.
5 0 协g , r = 0 . 9 9 9 6 ( n = 5 ) , a n d t h e a v e ar g e r e e o v e叮 ( n = 5 ) w a s 9 6 . 9% , R SD w a s
1
.
6%
.
C o n e l u s i o n : T h e m e t h o d 15 s im p l e
, a e e u r a t e a n d er p or d u e ib l e
, s u i t a b le fo r t h e q u a l i ty e o n tr o l o f s e o p o l e t i n
.
K e y w o r d s
:
H e r b a A嗯 y r e ia e S e g u i n i i ; s e o p o l e t i n ; R P 一 H P LC
白花银背藤 , 又名 山牡丹 〔’ 〕 , 为旋花科植物白
花银背藤 A卿 er i a s嗒 u i n ii ( L 6 v l . ) V a n i o * e x L` v l . 的
干燥根和茎 ,性温 , 味微涩 ,具有补气血 、 止咳 、 驳骨 、
止血生肌的功效 ,用于内伤出血 、 贫血头昏 、 咳嗽 、 骨
折 L’ 〕。 主产于广西 、 云南 、 贵州等地 , 为民间草药 。
市面上已有以该药材为原料制成的制剂 , 如山牡丹
胶囊 。 然而 , 目前对该药材的现代研究极少见文献
报道 ,故本文在对 白花银背藤化学成分研究的基础
上 ,以东蓑若内醋 ( cs 叩ol et in ) 为其含量 测定的指
标 ,建立了 RP 一 H PL C 定量方法 ,并测定了 7 批不同
来源的白花银背藤药材中东蓑若内醋 的含量 , 为白
花银背藤的质量评价提供了依据 , 同时也为该药材
及其制剂的质量标准研究奠定了基础 。
1 仪器与试药
岛津 LC 一 10 A 高效液相色谱仪 ( 日本岛津 ) ;
S a rt o r i u s 电子天平 。
东蓑若 内醋对照 品 ( 中国药品生 物制品检定
所 , 批 号 7 68 一 9 0 01 ) ; 流动 相 用 甲醇 为色 谱纯
( M E R C K 公司 ) , 水为超纯水 , 其余试剂为分析纯 。
白花银背藤药材由广州中医药大学中药学院潘超美
教授和黄海波副教授共同鉴定为旋花科植物白花银
背藤 A l返。六三i a s嗒 u i n i i ( L ` v l . ) V a n i o t e x L ` v l . 的干燥
茎 。
2 方法与结果
2
.
1 对照 品溶液的制备 取东蓑若内醋对照 品
or
.
0 m g
, 精密称定 ,置 10 m L 量瓶中 , 加甲醇溶解 ,
加甲醇至刻度 , 摇匀 , 制成每 1 m L 含东 蓑若内醋
1
.
0 m g 的溶液 。 精密量取该溶液 0 , 50 m L , 置 10
m L 量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 , 制成每 1 m L 含东
蓑若内醋 5 0 协g 的对照品溶液 ,摇匀 ,用 0 . 45 协m 微
孔滤膜滤过 ,取续滤液 , 即得 。
2
.
2 供试品溶液的制备 取本品粉末 1 . 0 9 , 精密
* 通讯作者 T e l : ( 0 20 ) 3 9 35 8 0 8 2 ; E 一 m a i l : z e n即 u a n e r@ 2 1。 n
DOI : 10. 16155 /j . 0254 -1793. 2008. 10. 013
一 16 46 一 药物分析杂志 C hi n J p har m An a l 0 0 8 2, 2 8 ( 10 )
称定 ,加甲醇 25 : n L ,加热回流 l h , 滤过 , 用 甲醇分
次洗涤容器和残渣 ,合并滤液 , 蒸干 , 残渣加 3 I n oL
·
L
一 ’盐酸溶液 10 m l J ,加热回流水解 巧 m in , 取出 ,
冷却 ,移人分液漏斗中 , 加三氯甲烷提取 3 次 , 每次
25 m L
,合并提取液 ,蒸干 , 残渣加甲醇使溶解 , 移至
2 m L 量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,用 0 . 45 林m 微孔
滤膜滤过 ,取续滤液 , 即得
2
.
3 色谱条件与系统适应性试验 色谱柱 : iL -
C h r o s p h e
r 10 0 R p 一 C ! : ( 2 5 0 m m x 4 m m
,
5 协m ) ;流
动相 : 甲醇 一 0 . 5% 醋酸水溶液 ( 2 2 : 78 ) ; 流速 : 1 . 0
m L
·
m in
一 ’ ;检测波长 : 2 28 n m ;柱温 : 40 ℃ 。 在上述
色谱条件下 , 精密吸取对照品溶液 5 林 L 、供试品溶
液 巧 林L ,注人液相色谱仪 ,测定 ,记录色谱图 ,东蓑
若内醋的保留时间约 为 20 . 2 m in , 见 图 l 。 理论板
数按东蓑若内醋峰计算应不低于 3 00 0 。
3 0 叮m i n
图 1 H P L C 色谱图
F ig 1 H P I C
e
h or n l a lo g
r a m s
A
. 对照品 ( le fe r o n e o s u f , s [ a n 〔 e ) B . 自花银背藤 ( H e山 a A r爵 , e i a e
S
e g u i ,
1
11)
1
. 东蓑若内醋 ( s 〔 o 一。Ol e r i n )
2
.
6 重 复性试验 精密称取 同一批次药材样品 5
份 ,按 “ 2 . 2 ” 项下方法操作 ,进样 巧 林L ,在上述色谱
条件下进行分析测定 , 结果东蓑若内醋含量的平均
值为 30 . 5 林g · g 一 ’ , R SD 为 1 . 3% , 说明重 复性较
好 。
2
.
7 稳定性试验 取同一供试品溶液分别在 O , 1 ,
2
,
4
,
8
,
16
,
24 h 进样 巧 协 L ,在上述色谱条件下进行
分析测定 ,结果峰面积的 RS D 为 1 . 5% ,表明供试品
溶液至少在 24 h 内稳定 。
2
.
8 加样 回收率试验 精密称取 5 份已知东蓑若
内醋含量 ( 30 . 5 林g · g 一 ’ ) 的白花银背藤药材粉末
0
.
5 9
,分别精密加人东蓑若内醋对照品溶液 ( 50 此
·
m L
一 ’
) 0
.
3 0 m L
,按 “ 2 . 2 ” 项下方法操作 , 进样 15
林L ,在上述色谱条件下测定 , 计算回收率 ,结果平均
回收率 ( n = 5) 为 % . 9% , R SD 为 1 . 6 % , 表明方法
回收率较好 。
2
.
9 样品测定 分别取不 同来源 的白花银背藤药
材 (茎 )粉末 ,按 “ 2 . 2 ” 项下方法制备供试品溶液 ,每
个样品平行制备 2 份溶液 ,精密吸取供试品溶液 5
一
20 林(L 进样体积根据各样品中东蓑若内醋含量
的高低而定 ) ,在上述色谱条件下进行分析测定 , 计
算样品中东食若内醋的含量 ,结果见表 1 。
表 1 样品测定结果 ( n = 2)
T a b 1 A s s a y o f H e r b a A r g y r e i a e S e g u i而
来源
(
5 0 , lr o e s
)
样品号
(
s a n 、冬, le N u . )
进样体积
(
v 。, IL: , ll e )
/ 林L
含量
(
。 . , , l r e rl r )
/ 卜g · g 一 !
,乙9`J气八器
J
93240821850
气七、一、ù、,ú l]-气乙广西百流 ( B a i l i u , G u a「1部 i )
2
.
4 标准曲线的绘制 分别精密吸取每 1 m L 含东
蓑若内醋 1 . 0 m g 的溶液 0 . 10 , 0 . 2 0 , 0 , 4 0 , 0 . 5 0 ,
0
.
80
,
1
.
0 m L
, 分别置 10 m L 量瓶中 , 加 甲醇至刻
度 ,摇匀 , 分别制成每 1 m L 含东蓑若内醋 10 , 2 0 ,
4 0
,
5 0
,
80
,
10 0 卜g 的对照品溶液 , 摇匀 , 用 0 . 4 5 卜m
微孔滤膜滤过 ,分别精密吸取续滤液 5 卜L , 按上述
色谱条件进样测定 , 以峰面积积分值 乃为纵坐标 ,
进样量 X ( 卜g ) 为横坐标 , 绘制标准曲线 , 计算回归
方程为 :
A = 4
.
] 3 x 10
6 X + 1
.
7 3 x 10
4 r = 0
.
9 9 9 6
东蓑若内酷进样量在 0 . 05 一 0 . 50 卜g 范围内呈 良好
线性关系 。
2
.
5 精密度试验 精密吸取东蓑若内醋对照 品溶
液 ( 50 协g · m L 一 ’ )5 协L ,按拟定色谱条件连续进样
测定 5 次 ,结果峰面积的 R S D 为 1 . 4 % ,说明仪器精
密度较好 。
广东南海 ( N a r、11 a i , G u a ; l名d o , 19 )
3 讨论
3
.
1 供试品溶液制备条件的选择 本实验考察了
以甲醇 、 乙醇为提取溶剂 ;冷浸 、 超声 、 回流 3 种提取
方法对东蓑若内醋提取效率的影响 ,结果发现 , 甲醇
回流提取的效果最佳 ;此外 , 对提取时间也进行了考
察 , 比较了加热回流提取时间分别为 0 . 5 , l , Z h 时
的提取率 ,结果表明以 l h 的提取时间为最佳 ,故选
择以甲醇为提取溶剂 , 加 热 回流提取 l h 的方 法 。
本实验还对样品是否水解以及水解时间进行了考
察 , 结果表明 , 水解后测定的样品中东蓑若内醋的含
药物分析杂志 C h in J Ph amr A n al 200 8 , 2 8 ( 1 0 )
量比未水解的高 。 这是因为样品中的东蓑若内醋以
游离态和昔的形式存在 , 昔经水解会产生游离东蓑
若内酷 。 而本实验旨在测定样品中游离东蓑若内醋
和东蓑若昔水解产生的东蓑若内醋的总和 , 因此采
用酸水解方法 。 通过对水解时间 15 , 3 0 , 4 5 , 6 0 m i n
的比较 , 发现水解时间 巧 m in 后 , 东蓑若内醋的含
量不再增加 ,故选择水解时间为 巧 m in 。
3
.
2 检测波长的选择 由东蓑若内醋对照 品溶液
的紫外吸收光谱图可见 , 东蓑若内醋的最大吸收波
长为 2 8 n m ,而且在此波长下的基线较平稳 , 故选
择 2 28 n m 作为检测波长 。
3
.
3 流动相的选择 考察了甲醇 、 甲醇 一 水 、 甲醇
一 0
.
5% 醋酸水溶液 3 个溶剂系统 , 结果表明 , 以甲
醇 一 0 . 5% 醋酸水溶液为流动相 ,所得色谱峰的峰形
较好 ,分离效果最佳 。
3
.
4 含量测定指标的选择 在对 白花银背藤药材
化学成分研究的过程中 ,我们从中分离得到 了东蓑
若内酷等化合物 , 均为首次从该植物中分得 。 根据
文献「3」,东蓑若内醋具有镇痛 、 抗炎等作用 , 为药
理活性成分 ,故本实验选择东蓑若内醋为含量测定
指标 。
3
.
5 样品测定结果分析 本实验对 7 批不同来源
的白花银背藤药材中东蓑若内醋的含量 进行了测
定 ,结果发现以广东南海采集的白花银背藤茎中东
蓑若内醋含量最高 , 广西百流采集的 6 批 白花银背
藤药材的质量参差不齐 ,东蓑若内醋的含量相差较
大 ,其原因可能与产地 、 生长年限和采收时间等有
关 , 准确原因还有待于进一步地深入研究 。
参考文献
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( 本文于 2 00 7 年 6 月 ZO H收到 )
门卜 曰 月卜 卜一 月卜 川 门卜 一 月卜 一 门卜 门卜 一〕 阅卜 一月卜 川 月卜 月卜 巾卜明卜 一卜月卜 门卜 一闷卜 仆月卜 「一 月卜 月卜 价月卜 巾 门卜 一月卜 门卜 月卜 卜 一月卜 一 司卜 一 月卜 一门卜 一叫卜 一月卜 一司卜
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验 、 药物化学 、 生物技术 ) 、 药物与临床 、 新 药述评 、 药学史 、 药学人物 、 药事管理 、 学术讨论 、 科研简报等
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