全 文 ：现代医药卫生 2011 年第 27卷第 6期
论 著
土牛膝来源于苋科植物粗毛牛膝Achyranthes aspera L、柳
叶牛膝Achyranthes longifclia Makino及牛膝Achyranthes biden-
tata Blume野生种的根。性平，微苦、凉，具有清热解毒、利咽化
痰、抗菌消炎、镇静止痛等作用，主治白喉、扁桃体炎、急慢性咽
喉炎、感冒发烧、麻疹肺炎、痈疽疖肿、蛇咬伤、类风湿关节炎等 [1]。
在四川各地， 不少地方都用土牛膝治疗咽喉炎和扁桃体炎，是
一味民间常用的中草药。通过查阅文献资料发现，川产土牛膝
中含有齐墩果酸，属于五环三萜类化合物 [2]。药理研究表明它具
有消炎、增强免疫、抑制血小板降集、降糖、抗氧化和利尿等多
方面作用，还具有护肝、抗高血脂、抗动脉粥样硬化及抗肿瘤等
生物活性 [3]。通过高效液相色谱法（HPLC）测定川产土牛膝的齐
墩果酸含量，为合理提取土牛膝的活性成分及川产土牛膝的进
一步开发利用提供理论依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器： 戴安高效液相色谱仪 （P680A四元低压梯度泵，
PDA-100二极管阵列检测器，TCC-100柱温箱，Chromeleon色谱
工作站）；瑞士Precisa电子天平（XR 205SM-DR）；CQX25-06超
声波清洗器（上海必能信超声有限公司，功率250W，频率25kHZ）。
1.2 试药： 齐墩果酸对照品 （购自贵州迪大科技有限责任公
司，纯度99.99%）。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水。土牛膝是2009
年9月采自四川省泸州市龙马潭区石洞镇，野生，经鉴别为苋科
植物粗毛牛膝、柳叶牛膝的根。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 ： 色谱柱为Dikma Kromasil C18 （250 mm×4.6
mm，5 μm）；流动相：甲醇–水（92∶8）；检测波长：210 nm；柱温：
30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；进样量：10 μL。得对照品和供试品溶
液HPLC色谱图，见图1。
A B
图1 川产土牛膝齐墩果酸HPLC色谱图
注：A对照品；B供试品；1齐墩果酸
2.2 对照品溶液的制备： 取经五氧化二磷减压干燥至恒重的
齐墩果酸对照品适量，精密称定，置量瓶中，加甲醇制成每1 mL
含齐墩果酸0.5 mg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备：精密称取土牛膝粗粉1 g，12倍量70%
乙醇水浴回流提取1 h，过滤，过滤时用相同浓度的乙醇溶液少
量频次的洗涤药渣，定容到50 mL容量瓶，然后精密吸取定容提
取液10 mL，加入20%盐酸10 mL，100 ℃加热水浴回流3 h，加20
mL蒸馏水，蒸去部分乙醇，用氯仿萃取5次，每次10 mL，合并氯
仿层，浓缩至干，用流动相甲醇∶水（90∶10）定容于10 mL容量瓶
中，作为供试品溶液。
2.4 线性关系考察：精密称取齐墩果酸对照品5.0 mg，置于10
mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取上述对
照品溶液2，4，6，8，10，20 μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条
件测定，记录峰面积。以进样量（X）与对应的峰面积（Y）作回归
处理，得标准曲线。Y=6.9124X-0.0537（r=0.9999）。结果表明，齐
墩果酸对照品在1～10 μg范围内进样量与峰面积间均呈良好的
线性关系。
2.5 精密度试验：精密吸取10 μL齐墩果酸对照品溶液，注入
高效液相色谱法测定川产土牛膝中齐墩果酸的含量
欧丽兰，稅丕先，庄元春，朱 烨，张 春，何 兵※
（泸州医学院药学院，四川 泸州 646000）
【摘要】目的：建立高效液相色谱法（HPLC）测定川产土牛膝中齐墩果酸含量的方法。方法：采用HPLC法，色谱柱为Dikma Kro-
masil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-水（92∶8）；检测波长：210 nm；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；进样量：10 μL。结
果：齐墩果酸在1～10μg范围内具有良好的线性关系（r＝0.9999），平均回收率为96.97%，RSD为1.02%。结论：该方法简便、快速、准确、
具有良好的重复性和回收率，可作为齐墩果酸的定量分析方法。
【关键词】高效液相色谱法；土牛膝；齐墩果酸
文章编号：1009-5519（2011）06-0806-02 中图分类号：R28 文献标识码：A
HPLC determination of oleanolic acid in achyranthes produced in Sichuan
OU Li-lan，SHUI Pi-xian，ZHUANG Yuan-chun，et al.
(Department of Pharmacy，Luzhou Medical College，Luzhou，Sichuan 646000，China)
【Abstract】Objective：To establish a HPLC method for the determination of oleanolic acid in achyranthes produced in Sichuan.
Methods：The separation was carried out on the Dikma Kromasil C18 column (250 mm×4.6 mm，5 μm).The mobile phase was methanol－
water (92:8).The detective wavelength was set at 210nm.The column temperature was 30℃ and the flow rate was 1.0 mL·min-1 with the
sample volume of 10μL. Results：The calibration curve showed good linearity over the range of 1－10 μg (r＝0.9999).The average recovery
rate was 96.97% with RSD 1.02%.Conclusion：This method is simple， rapid， accurate with good repeatability and good recovery，which
can be used as the quantitative analysis method of oleanolic acid for achyranthes produced in Sichuan．
【Key words】HPLC；Achyranthes；Oleanolic acid
基金项目：泸州医学院青年基金项目（2009547）
作者简介：欧丽兰（1980-），女，四川泸州市人，硕士，研究方向为
药用植物学。
※通讯作者：何 兵
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现代医药卫生 2011 年第 27卷第 6期
儿童弱视眼屈光不正与弱视的关系
郝文文，孔庆兰
（青岛大学医学院附属医院眼科，山东 青岛 266003）
【摘要】目的：探讨阿托品散瞳后儿童弱视眼屈光不正与弱视的关系。方法：门诊随机选择3～12岁矫正视力低于0.8儿童146例，
采用国际标准E字视力表查视力，1%阿托品眼膏散瞳5天后，先行电脑验光再行检影试片验光。结果：146例儿童中，远视发生率68.2%，
近视发生率31.8%，远/近视合并散光的比例占85%，散光类型以顺规散光为主，弱视眼矫正视力与屈光度数和的Pearson相关系数
r=-0.557。结论：近视、远视、混合散光是造成儿童弱视的重要原因，弱视眼屈光不正度数和越大弱视程度越大。
【关键词】弱视；屈光不正；近视；远视；散光
文章编号：1009-5519（2011）06-0807-03 中图分类号：R72 文献标识码：A
Relationship between ametropia of children’s amblyopic eyes and amblyopia
HAO Wen-wen，KONG Qing-lan
(Department of Ophthalmology，Affiliated Hospital，Medical College，Qingdao University，Qingdao，Shandong 266003，China)
【Abstract】Objective：To investigate ametropia of amblyopic eyes after atropine mydriasis and their relationship with amblyopia.
Methods：146 cases of the corrected visual acuity<0.8，the age ranging 3~12 years，were selected from the outpatients.The visual acuity
was detected using the international standard E chart. After 5d of 1% atropine mydriasis， the computer optometry examination was firstly
performed and followed by the retinoscope optometry.Results：Among 146 amblyopia children，the incidence was 68.2% for hyperopia and
31.8% for myopia.Myopia/ hyperopia complicating astigmatism accounted for 85%.Astigmatism with rule was the main type of astigma-
tism. The Pearson related coefficient (r) between the corrected visual acuity of amblyopic eye and the sum of refractive degrees was －
0.557.Conclusion：Myopia， hyperopia and mixed astigmatism are the main reasons leading to amblyopia in children.The bigger the sum
of ametropia degree is， the bigger extent of amblyopia is.
【Key words】Amblyopia；Ametropia；Myopia；Hyperopia； Astigmatism
液相色谱仪，按2.1项下色谱条件，连续重复进样6次。结果表明
土牛膝中齐墩果酸的RSD为0.25%。表明本法精密度良好。
2.6 稳定性试验：取土牛膝药材粉末适量，精密称定，按2.3项
下供试品溶液制备方法制备供试品，分别于0、2、4、6、8、10 h分
别精密吸取10 μL， 测定峰面积值， 结果土牛膝齐墩果酸的
RSD=1.93%。可见供试品溶液在10h内，稳定性良好。
2.7 重复性试验：称取同一批土牛膝粉末6份，按2.3项下方法，
制备供试液，分别精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，进行定量
测定，结果表明土牛膝中齐墩果酸的RSD为0.55%。表明本法重
现性良好。
2.8 加样回收率试验：称取已知含量土牛膝药材9份，每份加
入适量对照品溶液，按2.3项下方法，制备样品溶液，分别精密
吸取样品溶液10 μL，注入液相色谱仪，进行定量测定，计算加
样回收率。 结果土牛膝齐墩果酸的平均加样回收率为96.97%，
RSD为1.02%。
2.9 样品测定：分别取上述土牛膝药材样品，按2.3项下方法，
制备供试液，分别精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，按上述色
谱条件，分别测定样品中齐墩果酸的含量，测定结果见表1。
3 讨论
3.1 提取方法的选择： 配制供试品溶液时采取了不同的提取
方法（超声、回流、索氏提取），不同提取溶剂（乙醇、50%乙醇、
70%乙醇、水和流动相），不同溶剂体积（2、4、8、10、12倍量），及
不同提取时间（15、30、45、60、80 min）分别考察，结果以12倍量
70%乙醇水浴回流提取1h含量最高。
3.2 测定波长的选择： 采用二极管阵列检测器在190～380 nm
范围内分别扫描齐墩果酸对照品、供试品溶液中齐墩果酸峰的
紫外吸收，对照品和供试品中的齐墩果酸均在210 nm有最大吸
收，故选用210 nm作为测定波长。
3.3 流动相系统的选择：HPLC法测定土牛膝齐墩果酸含量的
实验过程中试用过乙腈-水（20∶80）、乙腈-水（50∶50）、甲醇-水
（92：8）、甲醇∶水（70∶30）等不同的流动相，其中以甲醇∶水（92∶8）
为流动相时，峰的分离程度和峰的形状较好，故选择作为最佳
测定流动相条件。
4 结论
土牛膝为民间治疗咽喉炎和扁桃体炎的一味常用中草药，
但对土牛膝的研究目前还处于空白阶段，本实验通过HPLC测定
土牛膝中的有效成分含量，结果表明川产土牛膝当中也含有齐
墩果酸，其含量与牛膝当中齐墩果酸的含量相近，有较高的开
发利用价值，可以作为含齐墩果酸的植物资源进行开发利用。
参考文献：
[1] 全国中草药汇编编写组编.全国中草药汇编（上册）[M].人民卫生
出版社，1982：205.
[2] 潘杭君，孙红祥． 三萜皂苷的免疫调节作用[J]．中兽医学杂志，
2003，1：42．
[3] 周志勇，袁 丁．齐墩果酸药理作用研究进展[J]．中国医院药学杂
志，2008，28（23）：2031．
收稿日期：2010-10-25
表1 土牛膝齐墩果酸的含量测定结果
批次
091016
091028
091116
091221
100325
齐墩果酸（%）
0.3977
0.4842
0.4271
0.5624
0.3552
RSD(%)
0.56
0.45
0.65
0.71
0.39
807