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薯莨醇提成分对大鼠血压的影响



全 文 :收稿日期:2009-06-23
作者简介:夏承来(1977- )男,博士,研究方向:药理学 E-mail: xiachenglai
@126.com,Tel:13416165118
薯莨醇提成分对大鼠血压的影响
夏承来 1,钟 超 2( 1南方医科大学药学院,广东 广州 510515;2深圳市光明新区公明人民医院药剂科,广东 深
圳 518106 )
摘要:目的 从中草药薯莨中提取分离具有降压活性的有效成份,以期得到一种新的治疗高血压的药物或先导化合物,
为开发薯莨新的药理作用提供实验依据。方法 采用超声提取法得到总浸膏,石油醚相,乙酸乙酯相,正丁醇相和水相萃
取物,经大鼠颈总动脉插管和尾静脉注射给药技术,以给药前后血压对照,探讨有效成份的降压活性。结果:从薯莨提取
物正丁醇部位分离得到化合物 A, 通过大鼠颈总动脉插管测血压实验,发现该化合物 A 可明显降低大鼠血压。 结论 化
合物 A 具有降压活性。
关键词:薯莨;有效成份;降压
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1673-4254(2010)01-0160-03
Effect of the active component isolated from the alcohol extract of Dioscorea cirrhosa Lour on
blood pressure of rats
XIA Cheng-lai1, ZHONG Chao2
1Institute of Pharmaceutical Sciences, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China; 2Department of Pharmacy, Gongming
Peoples Hospital, Shenzhen 518106, China
Abstract: Objective To isolate the active component from Dioscorea cirrhosa Lour and test its activity in lowering blood
pressure. Methods The serial components were obtained from the total extract, ligroin extract, ethyl acetate, n-butyl alcohol
extract and water extract. The isolated active components were administered in rats via the common carotid artery canulation
and tail vein injection to test their effects on blood pressure. Results The component A isolated and purified from normal
butanol showed obvious effect in lowering the blood pressure of rats. Conclusion The isolated active component from
Dioscorea cirrhosa Lour possesses obvious blood pressure-lowering activity.
Key word: Dioscorea Cirrhosa Lour.Active; constituent; Antihypertensive; effective
机体血压受神经,内分泌的调节,正常血压是在
一定范围内的波动。 当收缩压高于 140 mmHg,或
(和)舒张压高于 90 mmHg时,就称为高血压。原发性
高血压,没有明确的病因,没有特效药,需长期用药。
市场上许多抗高血压的药物,大多具有较强的毒副作
用。目前的降压药如血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂氯沙坦
可致严重心动过缓[1]、钙拮抗剂和 β 受体阻断剂等可
诱发心肌梗死和心功能不全[2]。 本课题组的预实验显
示,薯莨提取物以降压作用为主,兼有减慢心率的作
用,这是该提取物具有降压作用的可能作用机制。 目
前国内外对薯莨心血管作用方面的研究鲜有报道,大
多是报道其止血、收缩子宫和抗菌等方面的内容。 而
对薯蓣属植物的心血管作用的研究却有很多,如黄山
药具有抗高脂血症的作用[3];穿龙薯蓣总皂苷具有治
疗冠心病、抗动脉粥样硬化、降脂等作用 [4-5]。 薯莨的
醇提液具有较好的心血管作用。本实验通过对各部分
提取物的整体动物实验,跟踪其降压有效成分的存在
部位,从而为提取过程指导方向,是一种有效的活性
跟踪的方法。同时,对于提取得到的有效成分,采用动
物实验进行药理学分析, 观察有效成分对血压的作
用,从而证实该活性单体的有效性。
1 材料和方法
1.1 试剂和仪器
10%水合氯醛溶液,肝素钠溶液,Krebs-Henseleit
溶液均自行配制。
实验用的薯莨块状茎采自湖南省岳阳市,经本实
验室采用超声提取法醇提,大孔树脂、正、反相硅胶柱
梯度洗脱等传统方法自行分离纯化得到。 总浸膏,石
油醚相,乙酸乙酯相,正丁醇相和水相萃取物浓度均
为 10 mg/ml; 正丁醇相上 D101 大孔树脂后 5%、
10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%乙醇洗脱物分
别命名为流分 A、B、C、D、E、F、G、H, 浓度均为 10
mg/ml;A1、B1、C1 分别为流分 C 过正相硅胶柱后
(二氯甲烷:甲醇 =8:2-4:6)梯度洗脱物中 1-6 流分、
7-21 流分、22-52 流分合并物, 浓度均为 5 mg/ml;化
合物 A浓度为 2 mg/ml。
二道生理记录仪,电子天平等为实验室常规设备。
1.2 实验动物
10 只 Sprague-Dawley大鼠购自南华大学实验动
物中心 (合格证号: 湖南省医学动物管理委员会,
南方医科大学学报(J South Med Univ) 2010;30(1)160· ·
收缩压 * 舒张压 # 平均压 **
用药前 用药后 用药前 用药后 用药前 用药后
流分 C 22.73±1.96 17.75±1.73 16.95±1.65 13.15±2.67 18.72±1.86 14.68±2.37
流分 B1 23.23±1.50 18.20±1.18 17.43±1.20 13.77±1.80 19.20±1.17 15.25±1.43
化合物 A 24.10±1.34 17.56±1.05 17.36±1.19 14.84±1.31 19.62±0.98 15.74±1.03
表 2 各层析分离流分对大鼠收缩压的影响
Tab.2 Influence of the constituent from all fractions on the rat blood
pressure(kPa, Mean±SD, n=10)
用药前与用药后比较, *P<0.01, #P<0.05, **P<0.05
收缩压 * 舒张压 # 平均压 **
用药前 用药后 用药前 用药后 用药前 用药后
总浸膏 21.87±1.61 18.27±1.94 18.88±1.76 14.77±1.89 19.85±1.68 15.95±1.70
石油醚相 23.20±2.10 23.37±1.85 19.05±1.20 19.75±2.17 20.47±1.37 20.96±1.78
乙酸乙酯相 21.30±1.99 21.68±1.92 18.15±3.09 18.22±2.73 18.87±2.90 19.25±2.54
正丁醇相 22.13±1.75 16.77±2.35 18.65±2.69 13.20±3.76 19.78±2.29 14.40±3.24
水相 23.27±0.70 20.87±1.96 17.93±2.08 16.07±2.05 19.70±1.15 17.67±2.00
用药前与用药后比较, *P<0.01, #P<0.05, **P<0.05
表 1 各萃取部位对大鼠血压的影响
Tab.1 Influence of the constituent from Dioscorea Cirrhosa Lour on the
rat blood pressure (kPa, Mean±SD, n=10)
95-023号),雄性,体质量均为 250~300 g。 国家标准啮
齿类动物饲料喂养,笼内饲养,每笼 2 只,自由饮食,
室温(17~23)℃,湿度 40%~60%,12 h 光 / 暗循环,每
天早上 7∶00开灯。
1.3实验方法
1.3.1 药物降压作用 将提取的药物配成适当浓度的
溶液。 调试好二道生理仪,在插管和压力换能器间充
满肝素钠溶液。 取大鼠称重,腹腔注射 10%水合氯醛
(3 ml/kg)麻醉,固定。 颈部开口,暴露颈总动脉,分离
出颈总动脉,开口并插管,固定颈总动脉与插管。开启
二道生理仪,待血压稳定后,测量其血压。 稳定后,极
性较大的成分采用自身用药前后对照;而极性较小的
成分采取溶剂对照,尾静脉注射溶剂,测量血压变化。
稳定后,再注射药物溶液,测量血压变化,并监测血压
随时间的变化情况。每次注射的溶剂量与药物溶液量
相等,每次给药间隔 10 min以上。
2 实验结果
2.1 各部位对大鼠血压的影响
2.1.1 各萃取部位降低血压的活性筛选 薯莨总浸膏和
石油醚相,乙酸乙酯相,正丁醇相以及水相部位对大
鼠血压的影响。 其中,总浸膏部位给药量为 40 mg/kg,
石油醚相,乙酸乙酯相,正丁醇相和水相部位给药量
均为 30 mg/kg。 总浸膏部位,正丁醇部位和水相部位
溶剂为双蒸水, 用药前血压为大鼠麻醉状态稳定血
压;石油醚部位和乙酸乙酯部位溶剂为 10%乙醇,用
药前血压为尾静脉注射与给药量同体积的纯溶剂后,
大鼠稳定状态的血压。与给药前相比,总浸膏部位和正
丁醇部位可使大鼠收缩压、 舒张压及平均压降低,显
示出降压活性,而其它各部位则没有降压活性(表1)。
2.2 正丁醇部位各层析分离流分降压活性性跟踪结果
在对正丁醇部位进行各种层析分离的过程中,测
量了每一个分离流分对大鼠血压的影响,选择具有降
压活性的流分继续分离,得到了化合物 A。 经结构鉴
定为黄酮类化合物,推测具有抗高血压作用。 在这一
过程中, 发现 15%乙醇洗 D101 大孔树脂流分 C,C
过正相硅胶柱后 7-21 流分 B1,及化合物 A 具有较好
的降压作用。 其中,C 流分的给药量为 20 mg/kg,B1
给药量为 10 mg/kg,化合物 A 给药量为 5 mg/kg。 各
物质对血压的影响见表 2。
2.3 各部位流分对大鼠血压的降压幅度
在研究各部位流分对大鼠血压降低有效性的同
时。 本实验比较了它们对大鼠血压降压的幅度 (图
1~3)。 结果发现,除石油醚相和乙酸乙酯相外,其余
各部位都可使大鼠收缩压,舒张压和平均压有较大幅
度的降低。
3 讨论
薯莨(Dioscorea cirrhosa Lour.)又名血母、红孩儿
等,是薯蓣科薯蓣属的一种多年生藤本野生植物,药用
其块茎。该植物生长处于自生自灭的野生状态。目前,
对于薯莨的化学成份的研究很少,其药用有效成份的
研究就更少,主要用于止血 [6-7],收缩子宫 [8],抗菌 [9-10]
夏承来,等.薯莨醇提成分对大鼠血压的影响第 1 期 161· ·
图 1 各部位流分对大鼠收缩压的影响
Fig.1 Effect of the fractions on the
contractive pressure(P<0.05 drugs vs
control, Mean±SD, n=10)
图 2 各部位流分对大鼠舒张压的影响
Fig.2 Effect of the fractions on the diastolic
pressure(P<0.05 drugs vs control, Mean±SD, n=10)
图 3 各部位流分对大鼠平均压的影响
Fig.3 Effect of the fractions on the a mean blood
pressure (P<0.05 drugs vs control, Mean±SD,n=10)
等,薯莨的药理活性研究也仅基本上局限于传统的民
间用法,但有效部位和有效成份尚不明确。 薯莨是否具
有薯蓣属植物特有的皂苷成分尚未见有报道。可以说
薯莨的各方面的研究尚处于空白或萌芽阶段,其临床
应用受到了极大的局限,这对于我们发掘民间中草药
的宝库十分不利。 因此,挖掘这一宝贵资源的药用潜
力,深入研究薯莨的化学成份和药理活性,发现其发
挥药理作用的药效作用部位及其作用机制,开发出疗
效质量稳定的新药,实现中药现代化是非常必要的。
本实验根据一般药理学的原则[11],对大鼠的血压
进行了用药前后的测量。并以此作为薯莨提取和分离
有效成份的筛选依据, 指导进一步的提取和分离,从
而最终得到有效化合物 A。各部位流分对大鼠血压的
影响实验。 根据总浸膏、石油醚相、乙酸乙酯相、正丁
醇相和水相对大鼠血压的影响,总浸膏、正丁醇相和
水相能使大鼠舒张压、收缩压和平均压都降低,但水
相的作用没有统计学意义。 因此,选择正丁醇相作为
继续分离的有效部位。 正丁醇部位上 D101大孔树脂
后,15%乙醇洗脱部位 (流分 C) 具有较强的降压作
用。 将流分 C 依次过正相硅胶柱和反相硅胶柱所得
到的流分 B和化合物 A都具有较强的降压作用。 本
实验中, 各成分用药浓度依据分离过程逐步降低,因
此对血压的降低作用也逐步增强。从而为薯莨提取和
分离有效成分的实验提供了筛选性的指导,并最终得
到化合物 A。 本实验中所用大鼠均为正常 SD 大鼠,
但体重均为 300克左右,血压均接近大鼠正常血压的
上限,用药后血压都恢复在正常血压范围内。 此类大
鼠也只能作为初步筛选用,如果要证实各分离部分和
化合物 A是否对高血压具有降压作用, 还需建立大
鼠高血压模型进行实验才能得以证实。
综上所述,经初步筛选,化合物 A 具有降低血压的
作用。 因此,化合物 A可能是一种具有较好的开发价
值的心血管药物或者先导化合物。
参考文献:
[1] 和 立, 刘美蓉, 田文仙. 氯沙坦致严重心动过缓 1 例报告[J]. 新
医学, 2003, (4): 211.
[2] 曲静伟, 洪中立. 抗高血压药物的评价与选择[J]. 现代实用医学,
2006, (4): 283-7.
[3] 马海英, 赵志涛, 王丽娟, 等. 薯蓣皂甙元和黄山药总皂甙抗高脂
血症作用比较[J].中国中药杂志, 2002, 27(7): 528-31.
[4] Fang YM, Li BG, Zhao JJ, et al. Elucidation of the chemical
structures of two steroid saponins of Dioscorea nippnica Makino[J].
Acta Pharm Sin, 1982, 17(5): 387-391
[5] Liu CL, Chen YY, Ge SB, et al. Studies on the constuents from
Dioscorea plantsⅡ: Isolation and identification of steroidal saponins
fromDioscorea collettii Hook[J].ActaPharmSin,1983,18(8):597-606.
[6] 刘日才.大剂量红孩儿治疗出血证[J].浙江中医杂志, 1997(5): 228.
[7] 刘日才. 中药红孩儿治疗伤寒并发重度肠出血 16 例[J]. 实用中
西医结合杂志, 1997, (14): 1415-6.
[8] 胡安黎,沈向才.薯莨治疗功能性子宫出血 67 例[J]. 湖北中医杂
志, 1987, (2): 24-7.
[9] 吴国正. 薯莨治疗应激性溃疡 58 例临床报告[J]. 中国中西医结
合外科杂志, 2000, (3): 178-9.
[10] 吴国正, 祝继明. 薯莨治疗急性胃粘膜病变的初步报告[J]. 浙江
临床医学, 2000, (6): 180-1.
[11] 《中药、在然药物一般药理学研究技术指导原则》课题研究组.药
品技术审评论坛[M]. 第四期. 北京: 国家食品药品监督管理局
药品审评中心, 2004: 16-20.
南方医科大学学报(J South Med Univ) 第 30 卷162· ·