全 文 ：牡 丹江医学院学报 1 9 9 9年 第 0 2卷
J OR UN AL O F M UD AN JL AN G ME D I cL A C OL L E GE
笙 4
V OI
4期
N o
.
4
·
5
.
2L uK I C o r n ea
.
1 9 9 6 ;1 5( 2)
:
1 8 5
3 Ca
n t e r a l
.
I n v es tP O h t ha lm
o lV i, 豁 ( A R V O ) ,
1 99 4 ; 3 5 ( 4 )
:
2 1 4 2 ( 4 1 18一 2 2 0 )
4 高长风 , 谢 雷克 . 双 氛灭痛滴眼剂 的杭炎作用研究
眼科研 究 , 1 9 9 3 ; 1 1 ( 4 ) : 2 4 2
5 孙复兴
志 , 1 9 8 8 ; 6 :
. 皮质类固醉 在眼科的用 法 , 实用眼科杂
1 3 0
1 9 9 9一 0 4一 0 1 收稿
高效液相色谱法测定家兔血浆中桂竹糖芥强心贰 G
张书捷 包海花 周金霞 李孟全
(牡丹江 医学院 中心 实验室 1 5 7 0 1 1 )
摘 要 目的 建立浏定家兔血装中桂竹枪芥强 心 武 G 的高效液相 色语法 。 方法 选用
S h im一 p a e k C I J C一 ODS 1 5 e m X 6
.
o m m C
1 8 5U 色语柱 , 流动相为 乙晴 一水一 甲醉 ( 2 · 5 : 6 0 :
15 )
, 以咖啡因为 内标物 , 血泉样品经甲醉提取 , N : 吹干 , 流动相定溶 , 20 川进样 , 二极管阵
列检浏波长 2 1 8 n m . 结果 线性 范围为 36 . 2一 3 6 2。。ug L 一 ’ , 最低检浏浓度为 36 . 2ug L’ ` , 精密
度 、 准确度 亦符合有关要求 。 结论 该分析方法简单 、 灵歌 、 专属性强 。
关健词 桂竹糖芥强心武 G ; 高效液相 色讲法 ; 家兔血策 ; 药物浓度
H I G H P E R F O R M A N C E L IQ U DI C H R O M A
T O G R A P H I C ( H P L C ) D E T E R M I N A T I O N O F
E R Y S IM O S I D E G I N R A B B I T P L A SM A
Z ha gn S h
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口八阴。 吐 of c口“耐 Z时柳侧讲 , M u d翻户 gn M e d仓al C of le ge , M “ d a n j必 n g 1 5 7 0 1 1
A bs t r a e t
:
o b jec t ive A h i g h 沐 fr o mr a n e e il q u id e h r o m a t o gr a p h i e m e t hod f o r t h e
q u a n t i t a t i v e d e t e mr i
n a t i o n o f E职 s m os id e G , a n e w k i n d o f e ar d i a e g ly e o s id e s , i n ar b b it p la s m a 15
p er se n t e d
.
M e t h o d s U s i n g a S h而一 p a e k e le 一 O D S C : 。 e o lu m n a n d a m o b ile p h a se e o n t a i n i n g
a e e t o n i t r il e
:
m e t h a n o l
:
w a t e r ( 2 5
, 6 5
:
1 5 )
, 初 t h ca f f e i n e a s t h e i n t e r n al s t a n d ar d . T h e P las m a
s a m p l e s h a v e be
e n e x t r a e t e d w it h m e t h a n o l ( 1
,
5 )
,
d r i e d w i t h N
: a t lo w t e m pe ar t ur e t h e n
d iso l
v e d a n d f i x e d a t l m l w i t h m o b il e
.
2 0 u l o f t h e so l u t i o n h as be
e n in jec t ed i
n t o t h e
e h r o m a t o盯 a p h ie s y s t e m . T h e an al y s i s 15 d e t ec t ed b y S P D 一 M l o A a t Z1 8 n m . R es u l st
C a il b r a t i o n e vur
e s
ar
e il n e ar o v e r t h e r a n g e o f 3 6
·
2一 3 6 2 0 0 u g / L · T h e d e t ec t i o n il而 t 15 3 6· 2
u g / L f o r E叮s im o s id e G i n t h e p la s m a . C o n e l此 i o n T h e m e t h ed Por v e s t o b e s im p le a n d
s e n s it iv e 诚 t h g 侧〕d s eP e i f i e i t y , P r e e is i o n a n d a e e u r a e y ·
K e y w o r d s
:
E r y s im o s id e G ; H ig h P e r f o mr
n e e L iq u id C h r o m a t o g r a p h y ( H P L C ) ; P la
s m a
e o n e e n t r a t i o n i n r a b b i t
桂竹糖芥强心贰 G 是黑龙江省商学院
台宝 山教授等 自桂竹糖芥种子中提取 、 分离
纯化的有效成份 。 纯度达到化学对照标准品
的要求 〔 , , 。 经化学分析和光谱 ( U V 、 R l 、 F A B
DOI : 10. 13799 /j . cnki . mdjyxyxb. 1999. 04. 003
牡丹江 医学院 学报 1 99 9 年 第 2 0 卷 第 4 期
J OR UN A L OF M A U DN J L入N G M E I A L D CO CL L EG E V o l. 2 0 N o . 4 19 9 9
一M S 、 ` H一 N M R、 ` 3 C一 N M R )鉴定 , 其化学
结 构为毒毛旋花子贰元 一 3 一 。一日一 D 一 洋
地黄毒糖旦 。 一 L 一 鼠糖贰 , 是首次发现的
新强心贰 , 暂命名为桂竹芥强心贰 G (图 1 ) 。
C践
H O
O H 6 H
r h a m
n o s e
图 l
药理及毒理实验表明 , 糖芥强心贰 G 与毒毛
旋花子贰 K 量一效关系相平行 , 效价强度为
毒毛旋花子贰 K 的 3 . 1 倍 , 为速效强心药 ,
能 明显增强戊巴 比妥纳所致心衰 的左心收缩
性 的正性肌力作用 , 毒副作用较低 〔2 , , 是临床
治疗心力衰竭很有希望的新药 。 为了解该药
在体内的代谢情况 , 本文建立 了家兔血浆 中
糖芥强心贰 G 的 H P L C 定量分析方法 , 按照
国 际上关 于 生 物分 析方 法 确证 的指 导 原
则 〔3 〕 , 考察了专属性 、 线性范围 、 精密度和准
确性 。
1 仪器与材料
1
.
1 仪器 岛津高效液相色谱仪 (包括 L C
一 10 A D 泵 , S P D 一 M 10 A 二极 管 阵列 检测
器 , C la s S 一 L c l OA 色谱工作站 , C T O 一 1 0 A
柱温箱 , 均为 日本 岛津公司产 品 ) , P er n it u m
l 计算机 (美 国 A S T 公司 ) , A V A N T I G T M
3 0 高效冷冻离心机 (贝克曼公司 ) , T C Q -
2 5 0 超声波清洗器 (北京医疗设备二厂 ) 。
1
.
2 药品与试剂 桂竹糖芥强心贰 G 纯 品
(黑龙江商学院中药系提供 ) ; 咖啡因标准 品
(牡丹江药检所提供 ) ; 肝素钠注射液 (南京
生物化学制药厂 ) ; 甲醇 、 乙睛 (色谱纯 , 山
东禹王化学试剂厂 ) ; 双蒸水 ; 石瑛 、 亚沸蒸
馏器制备 。
枪芥式 G
糖芥强心贰 G 标准溶液 : 精密配制桂竹
糖芥强心贰 G 使其浓度为 36 . Zm g /而 的贮
备液 , 再用 甲醇稀释得 1 . 45 、 7 . 24 、 14 · 8 、
72
.
4
、
1 4
.
s u g /回 的系列标准溶液 。 置冰箱
( 4 ,C ) 保存 。
内标溶液 : 取咖啡因纯品制得 1。。 u g /m l
的甲醇溶液 , 置冰箱 (4 ℃ ) 保存 。
1
.
3 实验动物 大耳 白家兔 , 体重 1 . 5 一
2
.
sk g
。 牡丹江医学院实验动物中心提供 。
2 方法与结果
2
.
1 血浆样品的预处理 定取血浆 l m l , 置
1 0耐 带塞试管中 , 加 0 . l m l 内标溶液和 s m l
甲 醇 , 超 声 振 荡 l o m i n , 离 心 1 5m i n
( 4 0 0 o r pm )
, 分取上清液 , 低温 N : 吹干 , 残
渣 用 流 动 相 溶 解 至 。 . l m l , 离 心 s m in
( 1 5 0 o o r p m ) 进样 2 0 u l 。
2
.
2 色谱条件 色谱柱 : S ih m 一 P ac k C L C -
O D S ( 1 s e m x 6
.
o e m ) C
, 。
s u ; 流动相 : 乙睛
一水一 甲醇 ( 2 5 : 60 : 1 5 ) ; 流速 : l m l / m in ;
柱温 : 3 5℃ ; 检测波长 : 2 18 n m 。
2
.
3 分析方法 的确证 ( l) 专属性 : 在所
选色谱条件下 , 取供试家兔的空白血浆样品
与含药血浆样品测得的色谱图比较 (图 2 ) 。
牡丹江 医学院学报 1 9 9 9 年 第 20 卷 第 4期
JO U RN A LO FM U DA N JLA N GM E DI C A LCO E L L GE V
ol
.
20 N o
.
1 49 9 9
0 10
图 2按本文方 法分析 家兔血浆样品
中枪芥式 G浓度 的 I H P毛 图
A
: 家兔空 白血 浆样 品
B
: 加 入 内标物 (峰 1 . T R= 6 . 6 min )
及 枪芥式 G(峰 2. = 8 T R· 3min )
的血 桨样品
C
: 家 兔静脉注射 枪芥 式 G0( . l mg/ kg)
后 1 5 mn i的血 桨样 品
结果表明 : 空 白血浆样品内源性物质不干扰
桂竹糖芥强心贰 G及 内标物的分析 , 且峰形
与分离度较好 。 ( 2 ) 线性范围 : 分别取空白
血浆 。 . 75 m l , 置 10 m l 带塞试管中 , 依次加上
面系列标准溶液各 0 . 25 耐 , 混匀 , 按 `血浆
样 品的预处理 ’ 操作 , 依法测定 。 以血浆药
物浓度为横坐标 , 分析物与内标物峰面积之
比为纵坐标 , 用加权最小二乘法 〔习进行回归
运 算 , 得 回 归 方 程 为 y 一 0 . 1 5 0 6 x2 一
0
.
0 5 5 0 1
, r = 0
.
9 9 9 7
。 线性范 围为 3 6 . 2一
3 6 2 0 o u g / L
, 最低检测量为 3 6 . Zu g / L . ( 3 )精
密度与准确度的测定 : 取空 白血浆 , 按线性
范围内配制高 、 中 、 低 3个浓度分别为 36 . 2 、
3
.
6 2
、
1
.
s l u g /m l
。 依法测定 、 重复 5 次 , 并
与标准曲线 同时进行 , 以当日的标准曲线计
算样品的浓度 , 并求得本法的精密度与准确
性 , 结果见表 1 。
表 1 分析方法的精密度与准确性
(
n = 5 交士 SD )
配制浓度 测得浓度 精密度 准确度
( u g / m l ) ( u g / m l ) R S D (% ) R E ( % )
3 6
.
2 3 5
.
5土 0 . 8 8 7 2 . 5 一 1 . 9
3
.
6 2 3
.
4 8土 0 . 又9 1 5 . 5 一 3 . 9
1
.
8 1 1
.
9 8士 0 . 1 3 8 7 . 0 9 . 4
(4 ) 提取 回收率试验 : 取空白血浆 , 按标准
曲线范 围内配制高 、 中 、 低 3 个浓度分别为
3 6
·
2
、
3
·
6 2
、
l
·
8 1 u g / m l
。 按 `血浆样品预处
理 ’ 项下 , 依法测定其峰面积 A : , 另取用甲
醇配 制 的 3 个 浓 度分 别 为 36 . 2 、 3 . 62 、
1
.
81
u g / m l标准液 , 测定其峰面积 A Z 。 按公
式 : 提取回收率 = A l / A : x 10 %计算提取回
收率 ( % ) , 结果见表 2 。 结果表明提取回收
率均达到 76 %以上 , 符合生物样品分析的要
求 。
2
.
4 定量分析结果 在方法确证的基础上 ,
对家兔静脉给药后的血样进行了分析 。 取健
康家兔 5 只 , 体重在 一 s一 2 . s k g , 按 。一 m g /
k g 剂量 , 耳缘静脉注射糖芥贰 G 。 给药前及
给药后 o m i n 、 sm i n 、 3 om i n 分别于股动脉取
血 Zm l , 置含肝素的离 心管 中 , 离心 15 m in
( 4 0 0 0 r pm )
, 分取血浆 , 按 `血浆样品预处
理 ’ 项下 , 依法测定 , 并以当日标准曲线计
算血药浓度 , 求算其所占初始浓度 的百分率
( tC / C
。 X I OO写 )结果见表 3 。 以配对 t 检验结
果表明 s m in 血药浓度 , 明显高于 3 Om in 血药
浓度 ( 尸 < 0 . 0 1 ) 。
表 2 提取回收率 (n = 5 又士 S D )
配制浓度 提取 回收率 精 密度
( u g / lnI ) (% ) (% )
3 6
.
2 8 1
.
9 2士 5 . 6 4 6 . 8 9
3
.
6 2 8 8
.
7 9士 7 . 5 5 8 . 5 0
1
。
8 1 7 5
.
5 6士 9 . 9 9 1 3 . 0 5
表 3 家兔 iV 精 芥 贰 G ( 0 . l m g / k g ) 后
1 5而 n 及 3 0m i n 的血药浓度
( n = 5 交士 S D )
给药时间 血药浓度
而 n tC / C。 ( % )
5 8 1
.
7士 3 . 9 3
3 0 1 1
.
1士 2 . 0 7
. 两组问比较 尸 < 0 . 01
3 讨论
3
.
1 本文采用高效液相色谱法测定血浆中
糖芥贰 G 的浓度 , 具有操作简单 , 结果准确 、
灵敏度高的特点 。
3
.
2 经专属性考察 , 在该色谱条件下 , 内源
宜
|私.
,8
.
牡丹江 医学院学报 1 9 9 9 年 第 20 卷
JO U R N A I
`
O F M U D A N J I A N G M E D IC A L C O L L E G E N o
.
4 1 99 9
性物质对糖芥贰 G 的测定无干扰 , 精密度实
验表明 , 本法测定结果稳定 , 具有 良好的重
现性 , 本法线性范 围广 , 能够满足糖芥贰 G
血浓度监测和药代动力学研究的需要 。
参 考 文 献
l 台宝山 枪荞式强心 戒化 学的初步研 究 . 黑龙江
商学院商业研 究 , 1 9 7 9 ; ( 1 ) : 3 6
2 李宇彬 棺界式对豚鼠心 肌细胞 N a 十 一 K + 一 A T P
醉抑制作用 的动力学研究 . 中国药理 学通讯 , 1 9 9 2 ; ( 4)
3 萧詹 , 陈坚行 . 生物药剂分析方法的认证 . 中国药
学杂志 . 1 9 9 3 ; 2 8 ( 7 ) : 4 2 5
4 钟 大放 . 以加权最 小二乘法建立 生物分析方 法标
准 曲线 的若干 问翅 . 药物分析杂志 , 19 96 ; 16 ( 5) : 34 3一
3 4 6
1 9 9 9一 0 6一 27 收稿
1
,
6 一二磷酸果糖对脑缺血家兔血肌配的影响
申梅淑 于宏伟 宗灿华
(牡丹江 医学院生化教研 室 1 5 7 0 1 1 )
摘 要 目的 观察 1 , 6 一二磷酸果糖对脑缺血家兔血肌 醉的影响 。 方法 21 只 家兔随
机 分 3 组 。 实验组与对照组制备右侧脑 动脉缺血模型 , 实验组静脉 注射 1 , 6 一二磷酸果糖
1
.
s m l/ k g
·
d
, 对照组静脉注射生理盐水 1 . s m l/ k g · d , 空 白组正常喂养 。 2 周后 , 3 组家兔空
腹状态下 , 耳缘静脉取血 , 分 离血清 , 以 J af fe 反应测定血清肌醉含童 。 结果 对照组血从酥
含量高于 实验组与空白组 , 实验组与空 白组比较 , 变化不 大 。 3 组 家兔血清肌醉含童无显著性
差异 。 结论 1 , 6 一二磷酸果糖可 以增强脑动脉缺血 家兔的 能童代谢 。
关键词 1 , 6 一二磷酸果糖 ; 脑动脉缺血 ; 肌醉
T H E E F F E C T O F T H E I
,
6 一 F R U C T O S E 一 B IP H O S P H A T E
O N B L O O D C R E A T I N E O F C E R B R A L
I S C H E入4 I A O F R A B B IT
S h改 M叻 h u , e t al
D e P a汀m ent of B女r h , 众 t yr
,
M “ d a ” j翻 ” 9 M e d 众al C of le ge 1 5 7 0 1 1
A b s t r a e t : o b ej e t i v e T h e e x ep r im e n t 15 t o o b e s e vr e t h e e f fe e t o f l
, 6 一 f r u e t o se -
b ip h o s p h a t e o n b lc〕ed
e r e a t i n i n e o f e e r e b r a l i s e h e m ia o f r a bb it
.
M e t h od
s T w e n t y 一 o n e r a b b i st
w e r e r a n d o m ly a s s i n g n e d t o t h r e g r o u p s
.
1
,
6 一 f r u e t o se 一 b ip h os p h a t e g r o u p a n d e o n t r a s t g r o u p
w e r e m a k e d a m od
e l o f e e r e b r a l i s e h e m i a
.
1
,
6 一 f r u e t o s e 一 b ip h o s p h a t e g or u p w e r e t r e a t e d l , 6
一 f r u e t o s e 一 b ip h o s p h a t e ( 1
.
s m l / k g
·
d ) i
n v e i n
.
oC
t r a s t g r o u p w e r e t r ea t e d n o mr
a l s u l n e
( 1
.
sm l / k g
·
d ) i n v e i n
.
B l a n k g r o u p w e r e n o r m a l k e p t
.
T w o w e e k s a f t e r
, t h e q u a n t it y o f
e r e a t i二 i n e w e r e d e t e r m in e d b y Ja f fe R ea e t i o n
.
R e s u l t s oC
n t r a s t g r o u p : t h e q u a n t i t y o f b l o od
e r e a t i n i n e 15 h ig h e s t
.
1
,
6 一 fr u e t o s e 一 b i p h o s p h a t e g r o u p : t h e q u a n t i t y o f b lo 记 e r e a t i n i n e t a ked
a il t t l e e h a n g e
.
B u t t h e d i f f e r e n t a b o v e t h r e e g r o u p s w e r e n
’ t s ig n i f i a n t
.
C o n e l u s i o n l
,
6 -
f r u e t o s e 一 b ip h o s p h a t e e a n im p r o v e e n e r g y m e t a b o il s m e e r e b r a l isc h e m i a o f r a b b i t s
·
K e y w o r d s : 1
,
6 一 f r u e t o s e 一 b iP h o s p h a t e ; C e r e b r a l i s e h e m ia ; C r e a t i n i n e