全 文 ：高效液相色谱 －四通道紫外可见检测法测定不同产地谷精草中槲皮素含量
陈 芳1，冯丽娟2 (1．江汉大学化学与环境工程学院，湖北武汉 430056;2．遵义医学院珠海校区生物工程系，广东珠海 519041)
摘要 ［目的］建立谷精草中槲皮素含量的测定方法，测定 8个产地谷精草中槲皮素的含量。［方法］高效液相色谱 －四通道紫外可见
检测法，C18为色谱柱(250 mm ×4． 6 mm，5 μm)，流动相为无水甲醇 －浓度 0． 6%磷酸(52∶ 48，V/V)。通过保留时间结合四波长紫外光谱
定性，定性检测波长为 254、360、365和 370 nm。选用灵敏度最高的波长 254 nm定量。［结果］槲皮素在 5 ～30 μg /ml范围内线性关系良
好(R =0． 999 8)，平均回收率 99． 56%，RSD为 2． 30%;不同产地谷精草中槲皮素含量范围为 29． 5 ～ 92． 5μg /g。［结论］该方法测定结
果可靠，稳定易行，重复性好，可用于谷精草中槲皮素的含量测定;不同产地谷精草中槲皮素含量差异较大。
关键词 高效液相色谱法;四通道紫外可见;谷精草;槲皮素
中图分类号 S567;R284． 1 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2012)12 －07091 －02
Determination of Quercetin in Eriocaulon buergerianum from Different Growing Areas using High Proficiency Liquid Chromatogra-
phy Coupled with Four-channel UV-visible Detector
CHEN Fang et al (Department of Chemistry and Environmental Engineering，Jianghan University，Huibei Wuhan 430056)
Abstract ［Objective］To establish a quantitative method of determination of quercetin in Eriocaulon buergerianum，and determine the content
of quercetin in Eriocaulon buergerianum from different growing areas． ［Method］High proficiency liquid chromatography (HPLC)coupled with
four － channel UV － visible detector was used，C18 chromatographic column，mobile phase was the buffer solution of methanol and phosphoric
acid (0． 6%)，the volume ratio of methanol and phosphoric acid (0． 6%)was 52∶ 48． Qualitative evaluation was done by retention time and
four － channel UV spectrum at the same time，and the detection wavelength were 254，360，365，370 nm． Quantitative evaluation had done
at the best sensitive wave of 254 nm． ［Result］The linearity of quercetin was in the range of 5 － 30 μg /ml(R = 0． 999 8)，the average recov-
ery was 99． 56%，the RSD was 2． 30% ． The content of quercetin in samples from different growing areas was in the range of 29． 5 － 92． 5 μg /
g． ［Conclusion］The method is reliable，and can be used for quality control of Eriocaulon buergerianum． The content of quercetin in samples
from different growing areas has greater difference．
Key words High proficiency liquid chromatography (HPLC);Four-channel UV-visible detector;Eriocaulon buergerianum;Quercetin
作者简介 陈芳(1978 － ) ，女，湖北宜昌人，实验师，硕士，从事分析测
试研究，E-mail:jdcf886@ sohu． com。
收稿日期 2012-01-30
谷精草(FLOS ERIOCA ULI)为谷精草科(Eriocaulacea)
谷精草(Eriocaulon buergerianum Koern．)植物的干燥全草［1］，
具有疏散风热、明目和退翳等功效，主治风热目赤、肿痛羞
明、眼生翳膜和风热头痛等，为岭南常用的中草药之一［2 －3］。
其主要化学成分有槲皮素［4］。槲皮素的现代药理研究表明，
其具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎、抗病毒和止泻等药理作用［5］。
但关于谷精草中槲皮素含量的质量控制的检测方法研究鲜
有报道。为此，笔者研究了高效液相色谱 －四通道紫外检测
法检测谷精草中槲皮素的方法，以期为控制谷精草药材的质
量提供科学依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。中药谷精草，购于中药店，经鉴定为
FLOS ERIOCAULI。
1． 1． 2 主要仪器。SUMMIT 高效液相色谱仪，配有:P680A
LPG-4高压泵;UVD 170U 四通道紫外 －可见检测器;TCC-
100色谱柱温箱，由美国戴安公司生产。UV2401(PC)S紫外
－可见分光光度计，索氏提取器，均购自 Agilent公司。
1． 1． 3 主要试剂。槲皮素对照品，购于中国药品生物制品
检定所(批号:100081 － 200907) ，纯度 97． 4%。甲醇，色谱
纯，批号 040518，购自国药集团化学试剂有限公司。
1． 2 方法
1． 2． 1 色谱条件。色谱柱为 ODS C18分析柱(250 mm × 4． 6
mm，5 μm) ;流动相为无水甲醇 －浓度 0． 6%磷酸(52∶ 48，
V /V) ，流动相流速为 1． 0 ml /min;色谱柱温度为 30 ℃;检测
波长为 254、360、365和 370 nm。
1． 2． 2 对照品溶液的制备。精密称取经五氧化二磷干燥过
夜的槲皮素对照品适量，精密称定，加无水甲醇制成浓度为
10 mg /ml的溶液，即得。
1． 2． 3 供试品溶液的制备。将谷精草烘干，用粉粹机粉碎，
精确称取适量放入索氏提取器中，用石油醚脱脂 2 h，脱脂后
转移至圆底烧瓶中，加浓度95%乙醇100 ml回流1 h，后再加
入 25 ml浓度 25%盐酸回流 1 h，用旋转蒸发仪挥干溶剂，无
水甲醇定容至 50 ml。
1． 2． 4 方法学考察。①线性关系考察。将对照品溶液稀释
10倍后，分别精密量取 0． 5、1． 0、1． 5、2． 0、2． 5和 3． 0 ml，置于
100 ml量瓶中，加无水甲醇至刻度，摇匀。分别取上述对照
品溶液适量，注入液相色谱仪，按“1． 2． 1”色谱条件测定，记
录 254 nm 处的峰高。以峰高为纵坐标，槲皮素的浓度
(μg /ml)为横坐标，绘制标准曲线。②供试品溶液稳定性试
验。分别于 0、2、4、6、8、12和 24 h，精密吸取上述一种供试品
溶液适量，注入液相色谱仪，依法测定，记录 254 nm 处峰高
平均值和 RSD。③重复性试验。按上述供试品溶液制备方
法，称取同一批次的安徽谷精草样品5. 000 g，共8份，分别进行
测定，测得平均含量和 RSD。④回收率试验。采取加样回收
法，取已知含量的同一批次的样品 5. 000 g，6份，精密称定，分
别精密加入稀释 100倍后的槲皮素对照品溶液(10． 0 g /L)1． 5
ml，按“1．2．3”项下方法制备供试品溶液，精密吸取上述供试品
溶液适量，注入液相色谱仪，依法测定，计算回收率和 RSD。
1． 2． 5 样品测定结果。分别称取安徽、江苏、贵州、四川、福
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2012，40(12):7091 － 7092 责任编辑 石金友 责任校对 傅真治
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2012.12.194
建、云南、广东、浙江谷精草适量，精密称定，按“1． 2． 3”项方
法制备各供试品溶液，精密吸取各供试品溶液，注入液相色
谱仪，依法测定。
1． 2． 6 样品不同部位的含量测定。分别称取云南产谷精草根、
茎部和谷精珠适量，精密称定，按“1．2．3”项方法制备各供试品溶
液，精密吸取各供试品溶液，注入液相色谱仪，依法测定。
2 结果与分析
2． 1 方法学考察 ①线性关系的考察。计算回归方程为 Y
=1． 309 X +8． 588 2，(R =0． 999 8，n = 5)。结果表明槲皮素
在 5 ～30 μg /ml 范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系。
在选定的条件下，槲皮素的最低检出浓度为 2． 10 μg /ml。②
稳定性试验。计算得平均值为 11． 483，RSD为 1． 2%。表明
在 24 h 内供试品溶液稳定性良好。③重复性试验。计算得
平均含量为 29． 5 μg /g，RSD 为 1． 6%。表明该方法重现性
好。④回收率试验。计算得平均回收率为 99． 56%，RSD 为
2． 30%，表明该方法准确可靠，可用于槲皮素的含量测定。
2． 2 样品含量测定 结果表明不同产地谷精草中槲皮素含
量差异较大，其中江苏谷精草中槲皮素含量最高，福建其次，
浙江、广东、四川谷精草中槲皮素含量相差不大，安徽谷精草
中槲皮素含量最低。
表 1 不同产地谷精草中槲皮素含量测定结果
序号 产地 含量∥μg /g 序号 产地 含量∥μg /g
1 江苏 92． 5 5 浙江 45． 2
2 福建 78． 3 6 广东 43． 4
3 云南 64． 7 7 四川 40． 6
4 贵州 53． 6 8 安徽 29． 5
2． 3 样品不同部位的含量测定 结果表明，谷精草中槲皮
素的含量为 668. 9 μg /g;其茎部槲皮素的含量为 20. 5 μg /g，
根部槲皮素的含量为 17. 8 mg /g。
3 讨论
(1)流动相及浓度的选择。对于反相高效液相色谱分
析，由于槲皮素为含苯环和杂环的多酚羟基化合物，在溶液
中表现出一定的酸性，因此试验选用酸性的缓冲溶液，使其
部分在缓冲溶液中呈中性的分子状态，并且 pH越低，中性分
子的比例越高，与非极性固定相的亲和力越强，保留时间越
长。因此选用浓度 0． 6%的磷酸溶液作为缓冲溶液。通过反
复实验发现，在无水甲醇 －浓度 0． 6%磷酸为 52∶ 48(V /V)
时，槲皮素的保留时间合适，为 12． 6 min，能同其他物质较好
的分离，且色谱峰峰形较好，故选此条件。
(2)槲皮素的定性和检测器的检测波长的选择。戴安
UVD 170U紫外可见检测器是一种四波长检测器，用这种检
测器可以得到被分离组分 4 个波长的紫外可见光谱图。只
要这 4个波长选择适当，结合保留时间定性十分可靠，因为
在相同的色谱条件下，保留时间相同，同时这 4 个波长的吸
光度的比例也相同的情况也是极少的。
通过对槲皮素标准溶液在紫外可见光谱仪上扫描的紫
外吸收情况，选择 254、360、365和 370 nm这 4个波长。用这
4个波长结合保留时间对槲皮素进行定性。又由于波长 254
nm处紫外吸收相对最强，为了提高槲皮素检测灵敏度，试验
选用 254 nm处进行定量分析。
(3)该试验首次建立了高效液相色谱 －四通道紫外检测
法联用测定谷精草药材中槲皮素含量的方法，为研究中草药
中槲皮素的定性和定量分析提供了一种准确有效的方法，这
将为谷精草药材的质量控制提供依据。此外，该方法应用反
相键合相色谱法，加入能与水混溶的有机溶剂甲醇调节，根
据分离需要，加入磷酸调节极性和洗脱能力，为中草药中复
杂成分的分离提供了一种有效的方法［6］。
(4)测定不同产地谷精草中槲皮素的含量，可初步了解
气候等环境因素对中草药有效成分的含量的影响，对谷精草
资源合理充分的利用具有重要意义。
(5)谷精草茎部、根部和谷精珠在现代用药上统称为谷
精草，试验测得了谷精草不同部位槲皮素含量(见表 2) ，结
果表明谷精草根茎部槲皮素含量甚少，表明其含量较高的有
效成分可能不是槲皮素;而谷精珠中槲皮素含量较高，可考
虑在传统用药的基础上开发现代化的药用方式。
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15950 －15951．
(上接第 7078页)
提高丹皮酚蒸馏效率。另外一方面加入乙醇可以防止在蒸
馏过程中丹皮酚结晶在冷凝管上而降低产量。
(2)试验中加入乙醇的量在预试验中已经经过筛选，故
在此试验中直接采用最佳量，以保证提取量最大化。试验首
次采用星点设计对丹皮酚进行提取，并且得到的以丹皮酚结
晶重量为指标，经过 UV 对结晶纯度进行量度，采用折算后
的产量作为试验指标。
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2907 安徽农业科学 2012 年