全 文 ：蕨麻猪生长激素基因的同源性和多态性分析
李军成1 , 2 ,路彩霞2 ,景志忠1
(1.中国农业科学院兰州兽医研究所 , 家畜疫病病原生物学国家重点实验室 , 农业部兽医公共卫生重点实验室 ,
甘肃省动物寄生虫病重点实验室 , 兰州　730046;2.广西农业职业技术学院 , 南宁　530007)
摘要:为了探索蕨麻猪的遗传多样性 , 对蕨麻猪生长激素基因序列的多态性进行研究 , 并选择 GenBank 中 14 条序列作为
比较研究对象;首次成功克隆了 7 条蕨麻猪生长激素基因 , 测出 5 条蕨麻猪生长激素基因 DNA 序列 , 其多态性是内含子 1 有
1 个转换和 1 个颠换;内含子 2 有 2 个转换。说明蕨麻猪之间的差异可能与内含子的控制有关。蕨麻猪与其他 14 种猪之间
在编码区和非编码区共检测到核苷酸的变异为 155 个 ,内含子有 119 个 ,外显子有 28 个 , 5′端有 8 个。其中 , 颠换 104 个 , 转
换14个 ,缺失 23 个 ,插入 14个。出现碱基取代的位点中 ,大多数是颠换型突变 , 颠换与转换之比为 7.43∶1 ,存在颠换偏倚现
象。对蕨麻猪生长激素基因同源性百分数和趋异数分析 , 结果发现 , 蕨麻猪与小型猪相比同源性较近 , 蕨麻猪与大型猪同源
性较远。蕨麻猪等 15 种猪生长激素基因序列树状图分析 , 结果表明 ,蕨麻猪与 Vize猪有较远的亲缘关系;蕨麻猪与贵州榕江
香猪亲缘关系最近。
关键词:蕨麻猪;生长激素基因;同源性;多态性
中图分类号:Q75　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1671-7236(2010)04-0098-05
　　猪生长激素(porcine g row th hormone , pGH)
是由猪脑垂体前叶嗜酸性细胞分泌的一种具有广泛
生理功能的长为 190个氨基酸的单链多肽蛋白质激
素 ,在调节猪的生长发育方面起重要作用。猪生长
激素基因全长为 2231 bp(Vize等 ,1987),由 5个外
显子和 4个内含子组成。蕨麻猪是中国特有的体型
较小的一种地方猪种 ,主要分布于甘肃甘南藏族自
治州等地的高寒高海拔地区(海拔 3000 m 左右 ,最
低气温可达-28.5 ℃),成年猪体重为 28.5 ～ 32.5
kg ,体长67 ～ 70 cm ,体高 44.0 ～ 47.9 cm ,该猪种由
于长期生活在恶劣高寒气候及终年放牧条件下 ,已
具有许多适应高寒环境的生物学特性 ,能利用野生
植物(如蕨麻 、野胡萝卜和各种草籽等),故当地群众
俗称为蕨麻猪 ,或山猪 、藏香猪 ,后冠名为合作猪(景
志忠 ,1997;杨具田等 , 2003)。本试验采用 PCR技
术首次扩增出蕨麻猪生长激素基因序列 ,通过与其
他猪种基因序列同源性和多态性比较 ,进一步探讨
和研究蕨麻猪生长激素基因与其生理学和生物
收稿日期:2009-12-01
作者简介:李军成(1963-), 男 ,甘肃人 , 博士 , 教授 , 高级兽医
师 ,主要从事临床兽医学与分子生物学研究。
通信作者:景志忠(1964-),男 ,甘肃人 ,博士 ,研究员 ,博士生导
师 ,主要从事病原与宿主分子生物学与免疫学研究。
基金项目:转基因生物新品种培育专项(2009ZX08008-010B)和
甘肃省应用技术研究与开发项目(2010-X)。
学特性的关系 ,为合理保护 、开发和利用这一珍贵的
种质资源奠定基础 。
1　材料与方法
1.1　主要试剂　Taq plus DNA 聚合酶 、dN TPs 、
pMD18-T 载体 、限制性内切酶 、Agarose Gel DNA
Purification Ki t(Ver 2.0)试剂盒 、Blood Genome
DNA Ex traction Ki t 试剂盒均购自大连宝生物公
司;克隆宿主菌 JM109由中国农业科学院兰州兽医
研究所实验室保存 。
1.2　试验动物　从甘肃甘南州夏河县阿木去乎乡
格合村引进一批蕨麻猪 ,在兰州进行异地饲养试验
(李军成等 ,2006),每头猪颈静脉采血 5 mL。
1.3 　基因组 DNA 的提取 　用 Blood Genome
DNA Ex traction Ki t试剂盒提取 100 μL 全血基因
组 DNA(李军成等 ,2007;莫斯科等 ,2006)。
1.4　引物的设计与合成　根据 GenBank中公布的
猪生长激素基因序列设计引物:P1:5′-A TA-
AAGGGCCCAAAAGGGACCAA T-3′;P2:5′-GC-
CCAGCAACTAGAAGGCACAGC-3′。预期扩增
长度为 1750 bp ,引物由上海生物工程技术服务公
司合成 。
1.5　PCR扩增与鉴定　以提取的总 DNA 为模板 ,
反应体系共 50 μL , 10 ×PCR Buf fer 5 μL , 25
mmol/ L MgCl2 4 μL ,2.5 mmol/ L dNT Ps 4μL ,引
物 P1(25 pmol/μL)、P2(20 pmol/μL)各 1 μL ,模板
DNA 5μL(ng/μL), Taq plus DNA 聚合酶0.5μL ,
·98· 生物技术 中国畜牧兽医 　2010 年第 37 卷第 4 期
加 ddH2O至总反应体系达到 50μL ;PCR反应条件
为 96 ℃预变性 120 s;95 ℃变性 50 s ,58 ℃退火 50
s ,72 ℃延伸 130 s ,35个循环;72 ℃延伸 10 min;取
PCR产物 10μL ,用 0.8%琼脂糖凝胶电泳 35 min
(100 V),紫外透射仪上观察 ,用美国生产的紫外凝
胶 Singene成像仪系统扫描 ,保存电泳图谱。
1.6　目的片段的重组回收与鉴定　将回收的 DNA
片段连接在 pMD18-T 载体上 , 转化大肠杆菌
JM 109感受态细胞 ,涂布在含 X-Gal 、IPTG 和 Amp
的 LB 平板上 ,筛选阳性克隆。挑取单个阳性克隆
菌落 ,接种含氨苄青霉素的 LB , 37 ℃振摇过夜 ,用
MiniBEST Plasmid Purif ication Ki t试剂盒提取质
粒 ,分别用 PCR方法 、Hind Ⅲ和 Xba Ⅰ酶切方法
鉴定后 ,送上海生物工程有限公司测序。
2　结果与分析
2.1　基因组 DNA 提取结果 　基因组 DNA 在
0.8%琼脂糖凝胶中电泳的结果见图 1。
图 1　基因组 DNA电泳结果
注:1～ 6 ,蕨麻猪生长激素基因组 DNA;M , DL 2000 Marker。
2.2　PCR扩增与鉴定结果　蕨麻猪生长激素基因
PCR产物电泳结果见图 2。
图 2　蕨麻猪生长激素基因 PCR产物电泳结果
注:M , DL 2000 Marker;1～ 7 ,蕨麻猪生长激素基因 PCR 产物。
2.3　目的片段的重组回收与鉴定结果　目的基因
片段重组回收与鉴定结果见图 3 。
2.4　扩增出的蕨麻猪生长激素基因序列　本次扩
增出的蕨麻猪生长激素基因序列 ,用 2 条引物 P1:
5′-A TAAAGGGCCCAAAAGGGACCAA T-3′, P2:
5′-GCCCAGCAACTAGAAGGCACAGC-3′截取后
长为 1671 bp。
图 3　酶切鉴定结果
注:M , DL 2000 Marker;1 ,上面条带为载体 ,下面条带为蕨麻猪
生长激素基因。
2.5　测出的 5条蕨麻猪基因序列的分析　对测出
的蕨麻猪(用 JM 表示)JM-1 、JM-2 、JM-3 、JM-6 、
JM-7等 5 条生长激素基因 DNA 序列用 DNAman
软件中的 Alignment程序进行比对发现 , JM-6与其
他测出序列的 4头蕨麻猪相比 ,生长激素基因 DNA
碱基没有变化 ,因此 ,选择 JM-6蕨麻猪的生长激素
基因 DNA 碱基序列为蕨麻猪的代表序列参与对比
分析。只有 JM-7在内含子 1 的第 149 处 T ※A ,
JM-3在内含子 1的第 282处 C※T , JM-1在内含子
2的第 546处 T ※A , JM-2 在内含子 2 的第 671处
C※G ,而 5个外显子和第 3 、4内含子未见碱基取代
和缺失 ,结果见图 4 。
2.6　从 GenBank中调出 14种猪的生长激素基因
的序列　试验扩增出长度为 1671 bp的蕨麻猪生长
激素基因序列 ,同时从 GenBank 中调出的 14种猪
生长激素基因的序列 ,检索序列号分别为:榕江猪
(DQ086832)、 五 指 山 猪 (DQ073397)、藏 猪
(AY727046)、 Vize 猪 (M17704)、 杜 洛 克 猪
(AY727039)、长白 猪(AY727040)、约克 夏猪
(AY727045)、 雅 南 猪 (AY727044)、 成 华 猪
(AY720936)、 大 河 猪 (AY727037)、 大 乌 猪
(AY727038)、 内 江 猪 (AY727041)、 荣 昌 猪
(AY727042)、太湖猪(AY727043)。
2.7　蕨麻猪与大 、小型猪之间的核苷酸变异分析　
蕨麻猪与大型猪 、小型猪之间核苷酸的变异 ,大型猪
与小型猪颠换之比为 89∶15 ,大型猪与小型猪转换
之比为 11∶3 ,大型猪与小型猪缺失之比为 7∶16 ,
大型猪与小型猪插入之比为 14∶0 。蕨麻猪仅与大
·99·中国畜牧兽医 　2010 年第 37 卷第 4 期 生物技术
型猪之间存在插入 ,在颠换和转换明显大于小型猪 , 与小型猪之间的缺失较大。
图 4　5 条蕨麻猪生长激素基因序列碱基差异对比
2.8　蕨麻猪与 14种猪生长激素基因 DNA 序列碱
基变化　由表 1可知 ,蕨麻猪与其他 14种猪之间在
编码和非编码区共检测到核苷酸的变异为 155个 ,
内含子有 119 个 ,外显子有 28 个 , 5′端有 8个 。其
中 ,颠换 104个 ,转换 14个 ,缺失 23个 ,插入 14个 。
内含子 1颠换最多为 28个 ,内含子 3缺失和插入最
多 ,分别为 19 个和 7 个 ,内含子 4转换最多 ,为 10
个 ,外显子 2 、3分别出现 16 、9 个颠换 、外显子 4出
现 3个转换。内含子的颠换 、转换均大于外显子 ,外
显子区没有缺失和插入核苷酸变化。出现碱基取代
的位点中 ,大多数是颠换型突变 ,颠换与转换之比为
7.43(104∶14),存在颠换偏倚现象。
表 1　15 种猪生长激素基因 DNA序列碱基变化
5′端 外显子 1 内含子 1 外显子 2 内含子 2 外显子 3 内含子 3 外显子 4 内含子 4 外显子 5 3′端 全外显子 全内含子 合计
转换 1 0 0 0 0 0 0 3 10 0 0 3 10 14
颠换 5 0 28 16 23 9 9 0 14 0 0 25 74 104
缺失 0 0 2 0 1 0 19 0 1 0 0 0 23 23
插入 2 0 1 0 0 0 7 0 4 0 0 0 12 14
合计 8 0 31 16 24 9 35 3 29 0 0 28 119 155　
2.9　蕨麻猪与其他 14种猪生长激素基因碱基数量
多态性分析　蕨麻猪的外显子数目是 5 个 ,外显子
1 、2 、3 、4 、5的碱基数与其他 14 种猪都相同 ,分别为
10 、161 、117 、162 、201 bp。表现出很强的遗传保守
·100· 生物技术 中国畜牧兽医 　2010 年第 37 卷第 4 期
性。蕨麻猪的内含子数目是 4个 ,内含子 1 、2 、3 、4
的碱基数分别为10 、161 、117 、162 bp 。与其他 14种
猪有差异 ,内含子 1 ,蕨麻猪等 13种猪都是 244 bp ,
而 Vize猪为 242 bp ,内江猪为 245 bp;内含子 2 ,蕨
麻猪等 14 种猪都是 210 bp ,但榕江猪为 209 bp;
内含子 3 ,蕨麻猪等 13种猪都是 192 bp , Vize 猪为
197 bp ,五指山猪为 176 bp;内含子 4 ,蕨麻猪等 10
种猪都是 277 bp ,而长白猪为 276 bp , Vize、杜洛
克 、约克夏 、大乌猪都是 278 bp。说明蕨麻猪内含
子 1 、2比较保守 ,内含子 3 、4变化比较大 ,而蕨麻
猪与大型猪相比较 ,在内含子 4 变异较大 。内含
子的变异远大于外显子 ,这可能是物种进化与分
化的主要物质基础 。
2.10　蕨麻猪生长激素基因组 DNA同源性分析
2.10.1　同源性百分数　用 DNAStar 软件分析同
源性 ,结果表明 ,蕨麻猪与几个小型猪相比 ,同源性
近 ,如蕨麻猪与贵州榕江香猪的同源性最近 , 为
99.8%;蕨麻猪与大型猪相比 ,同源性远 ,如蕨麻猪
与 Vize猪的同源性最远 ,为 98.4%。同源性百分
数越大 ,同源性越近(图 5)。
2.10.2　趋异数　用 DNAStar软件分析趋异数 ,结
果表明 ,蕨麻猪与几个小型猪相比 ,同源性近 ,如蕨
麻猪与贵州榕江香猪的趋异数为0.2;蕨麻猪与大
型猪相比 ,同源性远 ,如蕨麻猪与 Vize 猪的趋异数
为 1.2。趋异数越小 ,同源性越近(图 5)。
图 5　同源性百分数和趋异数
注:对角线以上代表同源性百分数 ,对角线以下代表趋异数。
2.10.3　同源性树状图　用 DNAStar 软件分析蕨
麻猪等 15 种猪生长激素基因序列树状图 ,结果表
明 ,系统树分成两大类 ,蕨麻猪与贵州榕江香猪聚为
一类 ,表现出蕨麻猪与贵州榕江香猪亲缘关系最近;
Vize猪单独聚为一类 ,表明蕨麻猪与 Vize猪有较远
的亲缘关系;猪分化出的时间从早到迟的顺序依次
为长白猪 、大乌猪 、太湖猪 、藏猪 、大河猪 、五指山猪 、
荣昌猪 、约克夏猪 、杜洛克猪 、内江猪 、成华猪 、雅南
猪;分化出的时间越早 ,与蕨麻猪的亲缘关系越远 ,
分化出的时间越迟 , 与蕨麻猪的亲缘关系越近
(图 6)。
图 6　用 DNAStar软件绘制的 15 种猪群的系统发生树
3　讨论
对测出的 JM-1 、JM-2 、JM-3 、JM-6 、JM-7 等 5
条生长激素基因 DNA 序列用 DNAman软件中的
Alignment程序进行比对发现 ,只有 JM-7在内含子
1的第 149处 T ※A , JM-3在内含子 1的第 282 处
C※T , JM-1在内含子 2的第 546处 T ※A , JM-2在
内含子 2的第 671处 C※G ,而 5个外显子和第 3 、4
内含子未见碱基取代和缺失 。说明蕨麻猪之间的差
异可能与内含子的控制有关 。
蕨麻猪的外显子数目都是 5个 ,外显子 1 、2 、3 、
4 、5的碱基数分别为 10 、161 、117 、162 、201 bp ,与其
他 14种猪完全相同 ,表现出很强的遗传保守性 。蕨
麻猪的内含子数目 4 个 ,内含子 1 、2 、3 、4 的碱基数
分别为 10 、161 、117 、162 bp。蕨麻猪与其他 14种猪
·101·中国畜牧兽医 　2010 年第 37 卷第 4 期 生物技术
在内含子 1 、2相对保守 ,内含子 3 、4变化比较大 ,而
蕨麻猪与大型猪相比较 ,在内含子 4 变异较大 ,与
Li等(2006)得到的榕江香猪生长激素基因的碱基
序列及已知 4个国外猪种和 9个中国地方猪种之间
的同源性为 97%～ 99%,其间的差异主要集中在内
含子 2和 4 。内含子的变异远大于外显子 ,这可能
是物种进化与分化的主要物质基础 。
蕨麻猪与其他 14种猪之间在编码和非编码区
共检测到核苷酸的变异为 155个 ,内含子有 119个 ,
外显子有 28个 ,5′端有 8 个。5′端有 8 个的结果与
王荣梅等(2004)对 6头临高猪 、3 头玉山黑猪 、5 头
蓝塘猪的生长激素基因启动子区的序列进行变异研
究 ,结果发现共有 10 处碱基替换的结果有相似之
处。其中 ,颠换 104个 ,转换 14个 ,缺失 23个 ,插入
14个。内含子 1颠换最多为 28 个 ,内含子 3 缺失
和插入最多 ,分别为 19个和 7个 ,内含子 4转换最
多 ,为 10 个 ,外显子 2 和 3 分别出现 16和 9 个颠
换 ,外显子 4出现 3个转换。内含子的颠换 ,转换均
大于外显子 ,外显子区没有缺失和插入核苷酸变化 。
出现碱基取代的位点中 ,大多数是颠换型突变 ,颠换
与转换之比为 7.43∶1 ,存在颠换偏倚现象 ,比帅素
荣(2004)的结果(4.23∶1)高 。
用 DNAStar软件分析的蕨麻猪等 15种猪生长
激素基因全序列树状图结果表明 ,系统树分成两大
类 ,Vize 猪单独聚为一类 ,其余长白猪 、大乌猪 、太
湖猪 、藏猪 、大河猪 、五指山猪 、荣昌猪 、约克夏猪 、杜
洛克猪 、内江猪 、成华猪 、雅南猪 、榕江猪 、蕨麻猪聚
为一类 ,蕨麻猪与贵州榕江香猪最后又聚为一类 ,表
现出蕨麻猪与贵州榕江香猪亲缘关系最近 ,表明蕨
麻猪与 Vize猪有较远的亲缘关系。
李景等(2006)对榕江香猪与其他 14种猪的生
长激素基因全序列树状图分析的结果非常接近 ,
Vize猪单独聚为一类 , 其余五指山猪 、大河猪 、藏
猪 、太湖猪 、长白猪 、榕江小型猪 、雅南猪 、成华猪 、内
江猪 、荣昌猪 、杜洛克猪 、约克夏猪 、大乌猪等 13种
猪聚为一类 。本试验参比的 14 种序列和李景等
(2006)参比的 13种序列都是从 GenBank中下载的
相同序列 ,但本试验的序列以扩增的蕨麻猪 1671
bp的长度进行等长切段比较 ,因此比李景等(2006)
的序列稍短一些 ,造成个别猪的亲缘关系差异 ,但大
的方向基本相同 ,特别是李景等(2006)研究的榕江
小型猪 、雅南猪 、成华猪 、内江猪 4种猪依次聚为一
类与本试验的 4种猪依次聚类结果完全相符。
参 考 文 献
1　王荣梅 ,张细权 ,杨关福,等.猪生长激素基因启动子区的序列进
行变异研究[ J] .韶关学院学报 , 2004 , 9:63～ 66.
2　王重龙 ,陶立 ,等.淮猪新品系 FSHβ 亚基基因多态性及其与产仔
数的相关性研究[ J] .中国畜牧兽医 , 2008 , 35(8):63～ 64.
3　帅素荣.猪生长激素(pGH)基因核苷酸多样性 、分子进化和
PCR-RF LP 及其遗传效应研究[ D] .雅安:四川农业大学 , 2004.
4　甘南藏族自治州地方史志编篡委员会.甘南州志(上)[ M] .北京:
民族出版社 , 1990.
5　李军成 ,景志忠 ,余四九,等.微卫星标记对高原小型蕨麻猪的遗
传变异研究[ J] .甘肃农业大学学报 , 2006 , 4(2):22～ 27.
6　李军成 ,景志忠.微卫星标记对高原蕨麻猪的遗传多样性研究
[ J] .中国实验动物学报 , 2007 , 4(14):355～ 360.
7　李景 ,冉雪琴 ,王嘉福.榕江香猪生长激素基因的鉴定及功能分析
[ J] .生理学报 , 2006 , 58(3):217～ 224.
8　杨具田 ,臧荣鑫 ,卢建雄 , 等.蕨麻猪种质资源保护与开发利用
[ J] .畜牧与兽医 , 2003 , 12:15～ 16.
9　莫斯科 ,房永祥 ,景志忠,等.蕨麻猪白细胞抗原Ⅰ类分子 3基因
的克隆和序列分析[ J] .甘肃农业大学学报 , 2006 , 6(3):39～ 44.
10 景志忠.甘肃蕨麻猪实验动物化利用前景[ J] .实验动物科学与
管理 , 1997 , 4(14):64～ 65.
11 Li J , Ran X Q , Wang J F.Ident ifi cation and fun ction of the
grow th h orm one gene in Rongjiang pig of China.Acta Physiolog-
i ca Sinica , 2006, 58(3):217～ 224.
12 Vize P D ,Wells R E.Is olat ion and characterization of the porcine
hormone gene.Gene , 1987 , 55:339～ 344.
Homology and Polymorphism Analysis of Juema Swine Growth Hormone Gene
LI Jun-cheng1 , 2 , LU Cai-xia2 , JING Zhi-zhong 1
(1.Key Labora to ry of Veterina ry Public Health of M inistry o f Ag riculture , S ta te Key Labor atory of
Ve te rinary Etio log ical Bio lo gy , Lanzhou Ve te rinary Research Institute , CAAS , Lanzhou 730046 , China;
2.Guangx i Ag ricultur al Vocation-Technical Co lleg e , Nanning 530007 , China)
　　Abstract:Fo r explo ring gene tic div ersity of Juema pig , researched on the polymo rphism of g row th hormone gene order o f
Juema pig , and selected sequences in 14 kinds of pig from GenBank.Full sequence of g row th ho rmone gene of 7 Juema pig s had
been cloned succe ssfully fo r the fir st time , fr om w hich 5 Juema pig s w ere sequenced respectiv ely , w hose polymo rphism is in-
tron 1 contains 1 commuta tion and 1 transversion , intron 2 contains 2 t ransve rsions , explain that the diffe rence between Juma
·102· 生物技术 中国畜牧兽医 　2010 年第 37 卷第 4 期
猪肺炎支原体MY-99株 P46基因的序列分析
熊丁杰 ,熊焰 ,蔺露
(四川农业大学动物科技学院 , 雅安　625014)
摘要:提取猪肺炎支原体(Mycop lasma hyopneumoniae)M Y-99 株 DNA , 利用设计的一对引物扩增编码 P46 蛋白的基
因 ,将扩增产物克隆到 pMD18-T 载体 ,挑取 2 个克隆株测序。测序结果表明 , P46 基因全长 1134 bp ,编码 378 个氨基酸 , 序列
的 182、381 和 734 位有 3 个 TGA ,是编码色氨酸 T rp的密码子。2 个克隆株的测序结果与标准株 232 株的 P46 基因序列相
比 ,其同源性分别为 99.6%和 99.2%。
关键词:猪肺炎支原体;P46 基因;序列分析
中图分类号:S858.28　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1671-7236(2010)04-0103-03
　　猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae ,
Mhp)可引起猪支原体肺炎(MPS ,又称“喘气病”)
。MPS是一种发病率高 ,死亡率低的慢性疾病 ,单
纯的猪肺炎支原体感染主要引发猪的慢性肺炎 ,
当该病与猪繁殖与呼吸综合征病毒 、猪圆环病毒 2
型或猪流感病毒混合感染时就会发生常见的猪呼
吸道疾病综合征(PRDC),对养猪业造成严重破坏
(Barbara等 ,2006)。猪肺炎支原体有 3 个主要的
抗原基因:P97 、P101和 P46 ,其中 P46 基因及编
码的蛋白质具有很高的保守性 ,对 Mhp 的诊断具
有重要意义 ,利用在 E.coli 中表达的猪肺炎支原
体 J株 46 ku的表面抗原(P46蛋白),在 Mhp发病
早期进行 ELISA 诊断 , 发现其与猪的其他支原
收稿日期:2009-10-27
作者简介:熊丁杰(1984-),男 ,四川人 ,硕士生 ,研究方向:分子
病毒学。
通信作者:熊焰(1955-),男。 E-mai l:xyan 2004@hotm ail.com
基金项目:四川省畜牧食品局资助项目(2004):猪气喘病病原分
子生物学特性及疫苗研究。
体无交叉反应(Satoshi等 ,1995)。本研究旨在分析
四川田间分离株 MY-99与标准株的同源性 ,为今后
利用 MY-99 株研发诊断用抗原和基因疫苗奠定
基础。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　菌株　猪肺炎支原体 MY-99株由四川农业
大学动医学院微生物实验室保存(孙霞等 , 2001);大
肠杆菌 DH5α购自成都博瑞克有限公司;E.coli
Competent Cell JM109 、pMD18-T 载体购自大连宝
生物公司。
1.1.2　试剂 　蛋白酶 K 溶液(20 mg/mL)购自
Amersco;Go ldview 购自赛百胜;琼脂糖 Agarose购
自 Promega。EDTA 、T ris 、SDS 、丙烯酰胺(Acr)、甲
叉双丙烯酰胺(Bis)、过硫酸铵 、巯基乙醇和 EDTA
等均购自生物试剂公司 。
1.1.3 　仪器 　离心机(Eppendo rf Centrifuge
5804R);PCR仪(Eppendorf ,Mastercycler);电泳仪
(Bio-Rad),电泳槽(Bio-Rad mini-sub cellGT);紫外
pigs may be connected with cont rolling of intr on.The variation of 155 nucleo tide all we re detected in coding and noncoding re-
g ion by compa ring Juema pig with o ther 14 breeds , and 119 out o f them were in intron reg ions and 28 out of them we re in exon
regions , w ith 104 tr ansve rsions , 14 commutations , 23 absence s , 14 inser ts among them.Among substitutive sites of basic
gr oup , most w as transversion mutations;the compa rision between transver sion and commutations was 7.43∶1 , which exists
transver sion bias phenomenon.T he pe rcen ta ge and dive rg ence numbe r of Juem a pig s g row th ho rm one gene hom o lo gy an-
a ly se show ed that hom olo gy w as near er by com pa ring Juema pig w ith o the r minitype pig , hom o lo gy o f Juem a pig and
o the r lar ge pig w as fa rer.Dendrog r am o f g r ow th ho rm one gene sequence in Juema pig etc.o f 15 kind s analy se , w hich
indicated Juem a pig hav ing fa r distant gene tic re la tionship w ith the V ize pig;Juem a pig and Rong jiang pig s g ene tic rela-
tio nships w ere near est.
Key words:Juema sw ine;g row th ho rmone gene;homo lo gy;polymo rphism
·103·中国畜牧兽医 　2010 年第 37 卷第 4 期 生物技术