全 文 ：·中医中药· 2013 年 9月第 51卷第 26期
中国现代医生 CHINA MODERN DOCTOR
泌尿生殖道支原体感染是非淋菌性尿道炎（NGU）的
重要病因之一。 近年来，泌尿生殖道支原体感染受到普遍
重视。 但随着临床上日趋严重的抗菌药物滥用，泌尿生殖
道支原体耐药性也不断发生着变化。 因此，从中草药中寻
找有效治疗药物越来越受到重视。薯莨（Dioscorea cirrhosa
Lour.）是薯蓣科薯蓣属的一种藤本植物，其药用有效成份
主要包括块茎中的酚类、苷类等。 本品味微苦、涩，性微寒，
药理作用包括活血止痛、止血止痒、解毒抗菌 [1]、收缩子宫
平滑肌[2]和治疗应激性溃疡[3]等。目前国内外对中药薯莨的
研究非常少，而有关其有效成份方面的研究则更少。 近年
来本课题组的研究表明，薯莨提取物具有降压作用 [4]。 同
时，薯莨浸膏对泌尿生殖道人型支原体（Mycoplasma ho-
minism，MH）也有较强的抗菌作用，并找到薯莨抗泌尿道
人型支原体作用的有效部位，为临床上治疗泌尿生殖道支
原体感染筛选新药和有效开发中草药薯莨提供依据，现报
道如下。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 培养基 A7 固体培养基购自法国梅里埃生物公司。
人型支原体液体培养基按照文献[5]方法配制。1：1 牛心消化
液、10%新鲜酵母液、20% 新生小牛血清、0.002%酚红、青
霉素 20 000 U/L。 加 0.1%精氨酸，pH 调至 6.5[6]。
1.1.2 支原体株 从泌尿生殖道感染患者的标本中分离获
得 30 株人型支原体（MH）菌株，经初步鉴定 [5]，传代 3 次
后，保存于-70℃备用。 实验菌液：取保存的备用菌液，在室
温下融化，用人型支原体液体培养基按 1：100 稀释，37℃
培养 24～48 h 后达 106 颜色变化单位（color changing unit,
CCU）/0.1 mL 作为接种物[6]。
1.1.3 提取物的制备 ①原药处理 取 8.1 kg 薯莨块茎 （采
自湖南省平江县，经南华大学生药学鉴定，标本存放于南
华大学药物药理研究所），洗净，干燥，粉碎。在 75%乙醇中
浸泡 4 h，超声回流提取 4 次，得总浸膏 1 612.5 g。 取浸膏
850.0 g（相当于原药材 4 269.8 g），加水 4 L，充分搅匀，依
次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。 萃取液减压蒸馏浓
缩， 挥干， 称重， 得石油醚部位 13.17 g， 乙酸乙酯部位
247.05 g 和正丁醇部位 445.00 g。② D101 大孔树脂分离
活性跟踪结果显示正丁醇部位具有体外抗人型支原体的
活性。取正丁醇萃取成份 320.0 g（相当于原药材 3 070.4 g）
上 D101 大孔吸附树脂柱（5.5×120 cm）,依次用水和不同浓
度（梯度为 5%）的乙醇洗脱，每浓度洗 6 个柱体积（BV）。
收集各浓度洗脱流分， 浓缩， 挥干。 5%、10%、15%、25%、
30%、35%洗脱流分依次命名为 A、B、C、D、E、F。 称重分别
为 24.61 g、18.14 g、12.10 g、24.75 g、12.48 g、6.20 g。
薯莨提取物体外抗人型支原体的作用
钟 超 1 朱 蕾 2
1.深圳市光明新区人民医院药剂科，广东深圳 518106；2.深圳市光明新区人民医院妇科，广东深圳 518106
[摘要] 目的 从中药薯莨中提取具有体外抗人型支原体作用的成分,并测定其最小抑菌浓度,为开发薯莨提供依
据。 方法 采用超声提取法醇提，D101 大孔树脂梯度洗脱的方法得到不同的洗脱流分，经固体培养法初筛具有
体外抑制人型支原体作用的流分， 再经液体-固体联合培养法测定其 MIC 范围和 MIC50值。 结果 薯莨正丁醇
部位经 D101 大孔树脂梯度洗脱，其中 25%乙醇洗脱流分具有较好的体外抑制人型支原体的作用，其 MIC 范围
是（16/32～128） mg/mL，而 MIC50为 32 mg/mL。 结论 薯莨具有抗人型支原体作用的开发和研究价值。
[关键词] 薯莨；人型支原体；最低抑菌浓度
[中图分类号] R285 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）26-0102-02
Effect of extractive in dioscorea cirrhosa Lour. against mycoplasma ho-
minism in vitro
ZHONG Chao1 ZHU Lei2
1.Department of Pharmacy，Guangming New District Pepole’s Hospital, Shenzhen 518106,China；2.Department of
Gynecology of Guangming New District Pepole’s Hospital, Shenzhen 518106, China
[Abstract] Objective To extrate a kind of effective compounds from Dioscorea Cirrhosa Lour. which can against my -
coplasma hominism（MH） in vitro,and detected its MIC. Methods The effective chemical constituents were isolated by
super-sound extraction, column chromatography on macroporous resin. The effective compounds had demonstrated by
plate method,the MIC range and MIC50 of it was detected using liquid-solid co-culture method. Results The com-
pounds by 25% alcohol eluting from n-butanol showed obvious effect agomst MH in vitro. The MIC range was 16/32 ～
128 mg/mL and MIC50 was 32 mg/mL. Conclusion Dioscorea Cirrhosa Lour. can be exploitated and researched against MH.
[Key words] Dioscorea cirrhosa Lour.; Mycoplasma hominism; MIC
[基金项目] 广东省人口与计划生育委员会科研项目（2012333）
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2013 年 9月第 51卷第 26期
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·中医中药·
1.2实验方法
1.2.1 初筛实验 取相同重量各洗脱部位组分分别溶于1%
二甲基亚砜（DMSO）溶液配成相同浓度（预实验用 1% 二
甲基亚砜，没有发现有抗人型支原体的作用）。 取 A7 固体
培养基，37℃恒温箱复温 10 min，将培养基均分为三个区，
在不同区中央滴入同一洗脱部位的 1% DMSO溶液 50 μL，
倒置 10 min，无菌接种环在药液区内均匀接种 MH菌株，CO2
培养箱培养， 选择 1% DMSO 溶液作为阴性对照，0.1 g/mL
阿奇霉素溶液作为阳性对照。 培养 96 h 后，取出培养基，
倒置，在 10 倍物镜显微镜下，观察视野中煎蛋样菌落，顺
时针方向在三个区中各取 5 个视野，记录菌落数 [7]。 根据
A7 固体培养基说明书，以平均每个视野中菌落数＜15 个作
为有效洗脱部位的判断依据。
1.2.2 提取物的预处理 根据初筛实验结果, 称取有效洗脱
部位流分适量，用 1% DMSO 溶解，后用人型支原体培养
基稀释，应用母液浓度为 256 mg/mL。 将应用母液 pH 调至
培养基 pH 一致。
1.2.3 体外最小抑菌浓度测定 ①菌落培养（液体-固体联
合培养法） 将经过初筛实验体外有效洗脱部位流分加入人
型支原体液体培养瓶中。 采用液体培养基稀释法 [8]，在 96
孔板上，向每一孔内均加 100 μL 培养基。 从第 1～7孔将应
用母液倍比稀释至（128～2） mg/mL。第八孔为空白对照。用
支原体培养基按 1：100 稀释 MH 培养物， 混匀取 100 μL
加入每一个孔内。 将加好的 96 孔板盖上板盖，轻摇混匀，
置于湿盒内，37℃培养箱孵育。 每一浓度药液均取 50 μL
加入 A7 固体培养基中，培养 96 h。 ② 结果观察 观察培
养基的颜色变化，如果有支原体生长，培养基将由黄色变
为红色。 24～48 h 内观察 MH 生长变化，如加药孔与阴性对
照孔颜色变化相同，则该浓度药物对 MH 无抑制作用。 如
48 h 后仍不出现颜色变化，则该浓度为能抑制 MH 生长的
有效药物浓度。 其中无颜色变化的最小药物浓度为有效抑
制支原体生长的最小药物浓度（MIC）。 实验采用 MH 标准
株作参照。 同时计算每一浓度药液经 A7 固体培养基培养
后 9 个视野中平均菌落数, 以平均每个视野<15 个菌落的
最小浓度为最小抑菌浓度。
1.3 统计学方法
采用 SPSS13.0 统计学软件，计量资料采用均数加减标
准差表示，多组间比较采用方差分析，两两采用 t 检验 。
P<0.05 为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 洗脱部位性状
各洗脱部位中，A 和 B 组分为深红色粉末状物质，溶
于水、甲醇、乙醇、二甲基亚砜等极性溶剂。 C 和 D 组分为
深黄色粉末状物质，易溶于甲醇、乙醇、二甲基亚砜等，溶
于温水（>45℃）。 E 和 F 组分为黄色粉末状物质，易溶于甲
醇、乙醇、二甲基亚砜等，溶于热水（>70℃）。
2.2初筛实验
各洗脱部位均配成 0.2 g/mL 浓度进行初筛实验。 结果
显示，D 组分具有明显的体外抗人型支原体作用，见表 1。
2.3 最小抑菌浓度测定
经液体-固体联合培养法培养结果见表 2，两种培养法
测定的最小抑菌浓度相近。
表 2 D 组分体外抗人型支原体作用的最小抑菌浓度测定结果（x±s）
3 讨论
人型支原体是女性泌尿生殖道感染的常见病原之一，
可引起盆腔炎、急性肾盂肾炎等多种生殖道疾病和创伤感
染、支原体血症等生殖道外感染[9]。因此，MH 感染日渐为人
们所重视，不断有抗支原体新药问世。
中药薯莨为薯蓣科植物。 其药用有效化学成分包括皂
苷类和生物碱等。既往研究证实，薯蓣科植物的总皂苷成分
具有治疗心血管疾病、平喘、抗炎和抗肿瘤等多种作用[10,11]。
而其抗人型支原体作用却未见报道。 笔者在对薯莨有效成
分的提取和分离的实验中，发现薯莨正丁醇部位通过 D101
大孔树脂梯度洗脱后，25%乙醇洗脱流分具有较好的体外
抑制人型支原体的作用。 经液体-固体联合培养法证实，其
MIC范围为（16/32～128） mg/mL，而 MIC50为 32 mg/mL。 两种
培养方法有一定的偏差，主要是因为该流分有较深的颜色
影响了结果的判断。
临床上人型支原体一般采用液体培养法，依据培养液
的颜色变化情况判断支原体的存在与否， 结果容易分辨，
但缺点是容易污染及可能出现假阳性结果[12]。 同时大部分
的中药提取液本身具有颜色，与培养液混合后，容易使结
果的判断产生偏差。 A7 固体培养基作为经典的解脲和人
型支原体分离的培养基，具有在低倍镜下观察菌落数既直
观又可靠的优点[12]。 由于本实验中梯度洗脱的各流分均有
较深的颜色， 可以影响液体培养法中药敏试验结果的判
断。 本实验采用人型支原体直接划线固体培养法对各流分
先进行初筛， 再采用液体-固体联合培养法测定有效流分
表 1 各洗脱部位（0.2 g/mL）体外对人型支原体作用（x±s，n=9）
A
B
C
D
E
F
1%DMSO
阿奇霉素（0.1 g/mL）
F 值
P
541.27±74.32
324.47±39.61
196.53±51.14
3.20±1.25*
29.73±11.44
126.07±43.23
682.60±64.89
0.93±0.21
3.58
0.027
样品 菌落数（个）
注：以阿奇霉素为阳性对照，P<0.05 有统计学意义。 *为 6 个组分分
别与阿奇霉素组间比较 t=24.1，P<0.05
液体培养法
A7 固体培养法
t 值
P
16～128（55.15±18.42）
32～128（48.27±24.31）
2.822
0.021
32（36.43±7.62）
32（38.54±9.13）
2.913
0.015
培养方法 MIC 范围（mg/mL） MIC50（mg/mL）
（下转第 106 页）
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的 MIC范围和 MIC50， 既解决了单纯液体培养法中各流分
颜色的影响，又可以解决单纯的固体培养法中各流分的浓
度难以精确稀释的问题。
本实验证实了中药薯莨具有较好的抑制体外人型支
原体的作用。 25%乙醇洗脱流分是一个具有成千上万个单
体的混合物，导致最小抑菌浓度数值偏大。 而且，其中的有
效单体成分还需在接下来的提取和分离实验中经活性跟
踪的方法深入研究。 但本实验结果为开发中药薯莨，深入
研究其药理作用，寻找新的具有抑制人型支原体作用的药
物提供了线索。
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（收稿日期：2013-05-29）
念的辩论， 帮助他们学会用合理的信念代替不合理信念，
减少或消除不良情绪[14]。此干预注意挖掘患者内心的东西，
并有针对性地干预，在后期注意强化治疗，同时使患者养
成与错误观念做斗争的方法，学会自我克服不良观念，并在
萌芽状态中消除 [15，16]。 ②放松训练：应用口头指导的方法，
让患者按护理人员的要求进行头颈部放松练习、胸腹放松
练习、四肢放松练习。③努力完善家属的支持系统，使家属
对患者提供精神动力和情感支持，提高睡眠质量。
总之，相对于正常人，冠心病介入术后应用天保宁治
疗的患者常表现为一定程度的焦虑情绪， 睡眠质量降低，
但应用过程中可以更好地调节血脂。 临床应积极进行患者
术后针对焦虑情绪的干预， 以改善负性情绪和睡眠质量，
以更好地促进身心康复。
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