全 文 ：2003年 9月 Jou rnal of North east Ag ricul tural Univ ersi ty Septem ber 2003
文章编号　 1005- 9369( 2003) 03- 0314- 04
长寿花 (Kalanchoe blossf eldiana CV. Tom Thumb)花序芽
培养及植株再生
李凤兰 ,胡国富 ,杜景红 ,胡宝忠*
(东北农业大学　黑龙江　哈尔滨　 150030)
摘要: 对长寿花花序的组织培养过程中外植体不同消毒时间、最佳芽丛诱导与生根培养基进行了研究。结果表明 ,
用 0. 10%升汞对花序进行消毒 5 min时效果最好 ,污染率为 20% ;最佳分化与增殖培养基为 MS+ 2. 0 mg· L- 1 6
- BA+ 1. 00 mg· L- 1 N AA;最佳生根培养基为: 1 /2M S+ 0. 10 mg· L- 1 N AA.
关　键　词: 长寿花 ; 花序 ; 组织培养
中图分类号: S68; Q949. 751. 1　　　文献标识码 A
　　长寿花 ( Kalanchoe blossf eldiana CV. Tom
Thumb) ,别名: 矮生伽蓝菜、圣诞伽蓝菜、寿星花 ,
属景天科、伽蓝菜属。 为多年生常绿多浆草本植物。
原产非洲热带马达加斯加岛 ,阳光充足的地区 ,长寿
花喜冬暖夏凉的环境 ,畏酷暑和严寒。对土壤要求不
严 ,在排水良好、肥沃的沙壤土上生长较好。现在我
国各地均有栽培。 花色有深红、粉红、大红、橙、黄及
白色多种颜色 ,既可观叶也可观花 ,具有较高的观赏
价值。 并且 ,此花于 12月开始开花 ,直到来年 4月 ,
花期较长 ,具有较高的生产价值。长寿花的常规繁殖
多采用扦插法 ,该法繁殖系数小 ,远不能满足生产上
的需求 ,因为组织培养具有繁殖系大、繁殖周期短、
可周年进行生产等优点 ,可以弥补扦插繁殖的不足。
目前 ,国内有关长寿花的组织培养方面已有报道 ,所
使用的外植体多为叶片〔1, 2〕。本文研究了长寿花花序
培养中不同消毒处理与不同浓度植物生长调节剂的
配比对花序培养效果的影响 ,试图找出花序快繁的
最适培养基配方 ,为大规模工厂化生产提供依据。
1　材料与方法
1. 1　材料
取自本实验室的红花和白花的长寿花未开放的
花序。 实验于 2002年 1月～ 2002年 11月进行。
1. 2　方法
1. 2. 1　消毒
　　把 0. 5～ 1 cm幼嫩的花序取下后用自来水冲洗
　　* 通讯作者
收稿日期: 2002- 11- 07
1 h后备用。在超净工作台上 ,外植体先用 75%酒精
浸泡 40 s。再用 0. 10%升汞溶液以 3, 5, 7, 9 min等
不同时间进行消毒 ,消毒后用无毒水洗涤 4次 ,每次
1 min,用无菌滤纸吸干表面水分 ,按极性接种在分
化和增殖培养基上。
1. 2. 2　培养条件
1. 2. 2. 1　诱导丛生芽的培养基　以 MS为基本培养基 ,
添加了 2 mg· L- 1 NAA和不同浓度的 6- BA, 2, 4
- D。 (表 2)
1. 2. 2. 2　生根培养基　以 1 /2M S和 MS为基本培养
基 ,添加不同浓度的 NAA;
以上培养基 ,都加入 2%蔗糖 , 0. 70%琼脂粉 ,
p H5. 8,培养基是在 121℃ , 1. 20 kg· cm- 2高温高压
下灭菌 20 min,培养温度 ( 25± 1)℃ ,光照 2 500 1x,
12 h。
2　结果与分析
2. 1　消毒时间对无菌外植体建立的影响
在试验中 ,不同的外植体灭菌时间不同 ,消毒效
果具体情况见表 1(观察效果时间是在第 45天进
行 ):
从表 1看出 ,花序在用 0. 10%升汞消毒 5 min
的消毒条件下获得最佳效果 ,其污染率仅为 20% ,
并且 ,萌发率也达到了 91. 70% ,当消毒时间为 3
min时 ,接种后 1～ 2 d即可发现 ,在培养材料附近
出现粘液状和发酵泡沫状物体 ,并且有的材料附近
的培养基中出现混浊和云雾状痕迹 ,而其它未发现
上现象 ,可见主要是消毒不彻底造成的〔 3〕。当消毒时
第 34卷第 3期 东　北　农　业　大　学　学　报 34( 3): 314～ 317
间为 7 min和 9 min时 ,虽然污染率很低 ,但由于这
个消毒方法杀死了微生物 ,同时对外植体造成了损
伤 ,使其萌发率明显降低〔4〕。
表　 1　不同消毒时间对于外植体诱导芽的影响
Table　 1　 Ef fect of the dif ferent sterilized t ime to bud induction of explant
消毒时间
Steri lized time
接种外植体数
No. of explants
污染的外植体数
No. of contaminat ion
污染率 (% )
Contamination rate
萌动外植体
No. of g ermination
萌动率 (% )
Germinating rate
用 0. 10%升汞消毒 3 min 60 40 66. 70 16 80. 00
用 0. 10%升汞消毒 5 min 60 12 20. 00 44 96. 70
用 0. 10%升汞消毒 7 min 60 8 13. 30 32 61. 50
用 0. 10%升汞消毒 9 min 60 8 13. 30 24 46. 20
　　萌动率 = 萌动外植体数 /未污染外植体数× 100%
germinating rate= No. of germination /No. of uncontaminated
2. 2　不同浓度的植物生长调节剂对芽丛形成的影
响
把外植体接在具有 2. 00 mg· L- 1 NAA和不
同浓度的植物生长调节剂 6-BA、 2, 4-D的诱芽培养
基上 ,在 10 d左右开始萌动 ,整个花序开始膨大 , 15
d左右 ,有花序的花序轴基部形成块状 ,有芽丛出
现。在培养第 25天 ,第 45天的时候对芽丛形成进行
了调查 ,结果如表 2。
表　 2　不同浓度的植物生长调节剂对芽丛形成的影响
Table　 2　 Ef fect of hormone concertration on buds
实验组
EG
接种数
No. of
explan ts
NAA
mg· L- 1
6-BA
m g· L- 1
2. 4-D
mg· L- 1
25 d后
After 25 days
分化数
No. of di ff eren tiation
分化率 (% )
BDR
45 d后
After 45 days
分化数
No. of dif f erentiat ion
分化率 (% )
BDR
Ⅰ 60 2 1 0. 00 16 26. 70 32 53. 30
Ⅱ 60 2 2 0. 00 28 46. 70 52 86. 70
Ⅲ 60 2 1 0. 05 12 20. 00 20 33. 30
Ⅳ 60 2 2 0. 05 16 26. 70 24 40. 00
　　 exp erimetn g roup; BDR: bud di fferetiation rate
　　由表 2可看出 ,在添加不同浓度的 6-BA、 2, 4-D
的培养基上 ,外植体形成芽丛的情况差别很大 ,在
2. 00 mL· L- 1的 NAA培养基上添加 2. 0 mg· L- 1
的 6-BA,对于芽丛的形成具有最好效果 ,培养 25 d
后 ,分化率达到 46. 70% ,并且 ,生长健壮 ,芽体较肥
大。当培养 45 d以后 ,分化率达到 86. 70% ,芽均匀 ,
节间较长。当加入一定量的 2, 4-D时 ,芽丛的形成
受到抑制 ,芽丛细弱 ,并且小苗不形成节间而呈莲座
状。
2. 3　生根培养基的筛选
将产生较多丛生芽的花序 ,取出切成具有 4～ 5
个丛生芽的愈伤块 ,还接在分化培养基上。在培养到
65 d时 ,株高为 1 cm ,具有 4片叶子时 ,取粗壮的无
根苗 ,接种在不同的生根培养基上 ,结果见表 3,生
根培养基以 1 /2M S+ 0. 05m L· L- 1为最佳 ,经 10 d
的生根培养 ,生根率就达到 96. 70% ,并且较健壮 ,
根长达到 1 cm ,当 NAA增加至 0. 10 mg· L- 1时 ,
生根率也很高 ,但根的生长情况不理想 ,并且成苗率
也很低。
2. 4　移栽生长情况
将已生根的苗在培养室中打开盖进行炼苗 4 d,
然后用自来水冲净根部残留的培养基 ,然后移入由
泥炭士∶珍珠岩∶腐叶土 ( 1∶ 1∶ 2)组成的培养土
中 ,荫蔽度为 90% ,保持高湿度 ,适当遮光培养 , 10 d
左右长出新叶。 成活率达到 85%以上。
·315·第 3期 李凤兰等:长寿花 ( Kalanchoe blossfeldiana CV. Tom Thumb)花序芽培养及植株再生
表　 3　不同生根培养基对生根的影响
Table　 3　 Effect of dif ferent root ing medium on rooting rate
培养基
M edium
NAA
( mg· L- 1 )
培养时间
Cul ture time
接种数
No of ex plants
生根芽数
Rooting b uds
生根率 (% )
Rooting rate
　　生长情况
　　 Growing situation
M S 0. 00 20 30 25 83. 30 根较粗壮 ,根长 0. 50 cm左右
M S 0. 05 20 30 27 90. 00 根粗壮 ,根长 1 cm左右
M S 0. 10 20 30 28 93. 30 根细弱 ,呈绒毛状
1 /2M S 0. 00 15 30 27 90. 00 根较粗壮 ,根长 0. 50 cm左右
1 /2M S 0. 05 15 30 29 96. 70 根健壮 ,根长 1 cm左右
1 /2M S 0. 10 15 30 29 96. 70 根较细弱 ,呈绒毛状
3　结　论
3. 1　在长寿花的花序组织培养过程中 ,使用
0. 10%升汞进行外植体消毒 ,消毒 5 min的消毒方
法极大提高了无菌外植体建立的成功率。 但必须严
格控制消毒时间 ,因为花序比较幼嫩 ,在消毒时间较
长时 ,使外植体受到伤害 ,而影响其萌发。
3. 2　在 MS基本培养基上添加 2 mg· L- 1的 6-
BA和 1 mg· L- 1的 NAA时 ,对于芽丛和诱导分化
效果最好 ,并且芽的生长情况非常好。但培养基中加
入一定量的 2, 4-D时 ,芽丛的分化受到抑制 ,此结
果与叶片培养中的 2, 4-D促进作用有所不同〔 5〕 ,其
原因还需进一步研究。
3. 3　长寿花的花序苗的生根比较容易 ,在叶的培养
中无根苗的生根率可以达到 100% 〔1, 2〕 ,在本次实验
中 ,培养一定时间 ( 25 d以上 ) ,无根苗的生根率都
能达到 90%以上。 NAA的添加对于根的发生具有
促进作用 ,但是 N AA过多 ,使根过度生长 ,反而影
响了根的质量 ,这对以后的成苗不利。基本培养基以
1 /2M S为最好 ,这与以往其它报道相同〔 6- 10〕。
3. 4　长寿花花期较长 ,而且每小盆可抽生 15～ 30
个花序 ,单株可着花 80～ 250朵 ,这为取得足够的外
植体提供了充分条件 ,同时 ,以花序作为外植体 ,取
材方便 ,并且不伤母体 ,采用花序进行组织培养 ,能
大大提高长寿花繁殖系数〔 11〕。长寿花的花序在合适
的培养基上 ,可以直接形成芽丛 ,从而缩短繁殖周
期 ,同时也减少了过多的操作 ,降低了繁殖成本 ,这
些都有利于采用此方法进行大规模的工厂化生产。
参　考　文　献
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·316· 东　北　农　业　大　学　学　报 第 34卷
Tissue culture and plant regeneration of the
inflorescence of Kalanchoe blossf eldiana
LI Feng-lan, HU Bao-zhong
( North east Agricul ture Universi ty, Harbin Heilongjiang 150030, PRC)
Abstract: Studies on dif ferent sterili ze time of explant, the preferable mideia of dif ferentiation and roo t-
ing . The result show s tha t explant sterili zed in 0. 10% aqueous mercuric chlo ride fo r 5 min has best ef fect;
the preferable medium o f di fferentiation is M S supplemented wi th 2. 00 mg· L- 1 6-BA and 1. 00 mL· L- 1
NAA, and the preferable medium of rooting is 1 /2 M S supplemented, wi th 0. 05 mg· L- 1 NAA.
Key words: Kalanchoe blossf eldiana; inf lorescence; tissues culfure
作者简介:李凤兰 ( 1973- ) ,女 ,黑龙江人 ,在读硕士 ,东北农业大学生命科学学院 ,主要研究方向为观赏
植物的生殖生物学及组织培养。
·317·第 3期 李凤兰等:长寿花 ( Kalanchoe blossfeldiana CV. Tom Thumb)花序芽培养及植株再生